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A Fluorescent Screening Assay for Identifying Modulators of GIRK Channels

G protein-gated inward rectifier K+ (GIRK) channels function as cellular mediators of a wide range of hormones and neurotransmitters and are expressed in ...

University of South Carolina, School of Medicine

&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x5916;&#x5411;&#x304D;&#x30AB;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;I&#xFF08;&#x306B;&#xFF09;&#xFF09;&#x3001;TTX&#x8010;&#x6027;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;I&#xFF08;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF09;&#xFF09;&#x3068;L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;I&#xFF08;CA&#xFF09;&#xFF09;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x306F;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x6642;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x5224;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x3002;

&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;

&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xACFC;&#xB3C4; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE7C;&#xB968; (I(to)), TTX &#xB0B4;&#xC131; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; (I(Na)) &#xBC0F; L &#xD615; &#xCE7C;&#xC298; (I(Ca)) &#xC804;&#xB958; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC18D;&#xC131;.

&#xC2EC;&#xC7A5; myocyte &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBCC0;&#xD654; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El objetivo de este estudio fue determinar si las propiedades del potasio transitoria hacia el exterior (I (a)), sodio TTX resistente (I (Na)) y de tipo L de calcio (I (Ca)) corrientes son alterados durante los cambios en forma de la c&#xE9;lula cardiaca.

Los cambios en la morfolog&#xED;a de los miocitos card&#xED;acos alterar las propiedades de los canales i&#xF3;nicos dependientes de voltaje

&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x4E3A;&#x4E86;&#x786E;&#x5B9A;&#x5982;&#x679C;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684;&#x77AC;&#x65F6;&#x5916;&#x5411;&#x94BE; &#xFF08;I(to))&#xFF0C;&#x6CB3;&#x8C5A;&#x6BD2;&#x7D20;&#x8010;&#x94A0; &#xFF08;I(Na)) &#x548C; L-&#x578B;&#x9499; (I(Ca)) &#x7535;&#x6D41;&#x5728;&#x5FC3;&#x810F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x72B6;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x53D1;&#x751F;&#x6539;&#x53D8;&#x3002;

&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x6539;&#x53D8;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;

The goal of this study was to determine if the properties of the transient outward potassium (I(to)), TTX-resistant sodium (I(Na)) and L-type calcium (I(Ca)) currents are altered during changes in cardiac cell shape.

Changes in cardiac myocyte morphology alter the properties of voltage-gated ion channels.

Le but de cette &#xE9;tude &#xE9;tait de d&#xE9;terminer si les propri&#xE9;t&#xE9;s du potassium sortant transitoire (I ()), la TTX-r&#xE9;sistants de sodium (I (Na)) et L-calcique de type (I (Ca)) courants sont modifi&#xE9;es lors des changements de forme de la cellule cardiaque.

Les changements dans la morphologie des myocytes cardiaques modifier les propri&#xE9;t&#xE9;s des canaux ioniques voltage-d&#xE9;pendants

&#xC4;nderungen in kardialen Myozyten-Morphologie ver&#xE4;ndern die Eigenschaften der Spannung-gesteuerte Ionenkan&#xE4;le.

L&#39;obiettivo di questo studio era di determinare se le propriet&agrave; del potassio verso l&#39;esterno transitoria (I(to)), sodio TTX-resistenti (I(Na)) e L-tipo di calcio (I(Ca)) correnti sono alterate durante i cambiamenti di forma delle cellule cardiache.

Cambiamenti nella morfologia del miocita cardiaco alterano le propriet&agrave; dei canali ionici voltaggio-dipendenti.

&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x786E;&#x5B9A;&#x671F;&#x95F4;&#x77ED;&#x6682;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x6D53;&#x5EA6;&#x662F;&#x5426;&#x53D7;&#x5230;&#x5F71;&#x54CD;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#xFF08;PKA&#xFF09; &#x5FC3;&#x810F;&#x7684; L &#x578B;&#x7ECF;&#x7535;&#x6D41; &#xFF08;ICa&#xFF09; &#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x79BB;&#x5230; 3-4 &#x5929;&#x8001;&#x65B0;&#x751F;&#x5927;&#x9F20;&#x548C;&#x5BF9;&#x9F50;&#x7684;&#x80F6;&#x539F;&#x8584;&#x51DD;&#x80F6;&#x4E0A;&#x57F9;&#x517B;&#x3002;&#x4EE5; 1 &#x6216; 2 &#x6BEB;&#x7C73;&#x7ECF;&#x5916;&#x90E8;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x9F50;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE; PKA &#x7684;&#x773C;&#x538B;&#x5347;&#x9AD8; microM 2 &#x6FC0;&#x52B1;&#x65F6;&#x663E;&#x793A;&#x662F;&#x5F31;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1; (&#x589E;&#x52A0; 20%&#xFF09; &#x7684;&#x5927;&#x578B; ICa&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x773C;&#x538B;&#x5347;&#x9AD8;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x9020;&#x6210;&#x589E;&#x52A0; 100%&#x5728; ICa &#x65F6;&#x5916;&#x90E8;&#x7ECF;&#x6D53;&#x5EA6;&#x662F;&#x51CF;&#x81F3; 0.5 m m &#x6216;&#x88AB;&#x66FF;&#x6362;&#x4E3A; Ba(2+)&#x3002;&#x8FD9;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; Ca(2+) &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E5F;&#x6709;&#x4EBA;&#x5F53;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x88AB;&#x6CBB;&#x7597; 1 microM &#x5F02;&#x4E19;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x3001; &#x9EC4;&#x560C;&#x5464; 100 microM 3-&#x5F02;&#x4E01;&#x57FA;-1-&#x7532;&#x57FA;&#x6216; 500 microM 8-&#x6EB4;-&#x8425;&#x5730;&#x3002;ICa &#x7684; PKA &#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x80FD;&#x529B;&#x6062;&#x590D;&#x4E86;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D; (CaM) &#x6291;&#x5236;&#x80BD;&#x4E0E;&#x900F;&#x6790;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x6291;&#x5236;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C&#x3001; &#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7684; Ca(2+) &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6216;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x5206;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x51F8;&#x8F6E;&#x4E0E;&#x6240;&#x6709;&#x56DB;&#x4E2A; Ca(2+) &#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E5F;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86; ICa &#x7684; PKA &#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6210;&#x5E74;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x5916;&#x90E8; Ba(2+) &#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x66F4;&#x591A;&#x56DE;&#x5E94;&#x773C;&#x538B;&#x5347;&#x9AD8;&#x548C;&#x8425;&#x5730;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x7ECF;&#x8FDB;&#x5165;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x6027;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x901A;&#x8FC7;&#x89C4;&#x7BA1; ICa PKA &#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

&#x80DE;&#x7ECF;&#x8C03;&#x8282;&#x5FC3;&#x810F;&#x7684; L &#x578B;&#x7ECF;&#x9499;&#x8C03;&#x7D20;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; a&#xFF1A; &#x4F5C;&#x7528;&#x4E8E;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

The goal of this study was to determine whether the protein kinase A (PKA) responsiveness of the cardiac L-type Ca(2+) current (ICa) is affected during transient increases in intracellular Ca(2+) concentration. Ventricular myocytes were isolated from 3- to 4-day-old neonatal rats and cultured on aligned collagen thin gels. When measured in 1 or 2 mM Ca(2+) external solution, the aligned myocytes displayed a large ICa that was weakly regulated (20% increase) during stimulation of PKA by 2 microM forskolin. In contrast, application of forskolin caused a 100% increase in ICa when the external Ca(2+) concentration was reduced to 0.5 mM or replaced with Ba(2+). This Ca(2+)-dependent inhibition was also observed when the cells were treated with 1 microM isoproterenol, 100 microM 3-isobutyl-1-methylxanthine, or 500 microM 8-bromo-cAMP. The responsiveness of ICa to PKA was restored during intracellular dialysis with a calmodulin (CaM) inhibitory peptide but not during treatment with inhibitors of protein kinase C, Ca(2+)/CaM-dependent protein kinase, or calcineurin. Adenoviral-mediated expression of a CaM molecule with mutations in all four Ca(2+)-binding sites also increased the PKA sensitivity of ICa. Finally, adult mouse ventricular myocytes displayed a greater response to forskolin and cAMP in external Ba(2+). Thus Ca(2+) entering the myocyte through the voltage-gated Ca(2+) channel regulates the PKA responsiveness of ICa.

Intracellular Ca(2+) regulates responsiveness of cardiac L-type Ca(2+) current to protein kinase A: role of calmodulin.

L&#x26;#39;objectif de cette &#xE9;tude &#xE9;tait de d&#xE9;terminer si la prot&#xE9;ine kinase A la r&#xE9;activit&#xE9; (PKA) de l&#x26;#39;cardiaques de type L Ca (2 +) en cours (ICA) est affect&#xE9;e au cours des augmentations transitoires de concentration intracellulaire de Ca (2 +) de concentration. Myocytes ventriculaires ont &#xE9;t&#xE9; isol&#xE9;s &#xE0; partir de 3 - &#xE0; 4 jours d&#x26;#39;&#xE2;ge rats nouveau-n&#xE9;s et cultiv&#xE9;s sur des gels de collag&#xE8;ne align&#xE9;s minces. Lorsque mesur&#xE9;e en 1 ou 2 mM de Ca (2 +) solution externe, les myocytes align&#xE9;s affich&#xE9; une grande ICA qui a &#xE9;t&#xE9; faiblement r&#xE9;glement&#xE9; (20% d&#x26;#39;augmentation) lors de la stimulation de la PKA par 2 microM forskoline. En revanche, l&#x26;#39;application de la forskoline a provoqu&#xE9; une augmentation de 100% dans ICA lorsque l&#x26;#39;externe Ca (2 +) de concentration a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;duite &#xE0; 0,5 mM ou remplac&#xE9; par Ba (2 +). Ce Ca (2 +) d&#xE9;pendant de l&#x26;#39;inhibition a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9; lorsque les cellules ont &#xE9;t&#xE9; trait&#xE9;es avec 1 microM isoprot&#xE9;r&#xE9;nol, 100 microM 3-isobutyl-1-m&#xE9;thylxanthine, ou 500 microM 8-bromo-AMPc. La r&#xE9;activit&#xE9; de l&#x26;#39;ICA de la PKA a &#xE9;t&#xE9; restaur&#xE9; pendant la dialyse intracellulaire avec un peptide inhibiteur de la calmoduline (CaM), mais pas pendant le traitement avec des inhibiteurs de prot&#xE9;ine kinase C, Ca (2 +) / prot&#xE9;ine kinase CaM-d&#xE9;pendante, ou la calcineurine. Ad&#xE9;noviral m&#xE9;di&#xE9;e par l&#x26;#39;expression d&#x26;#39;une mol&#xE9;cule CaM &#xE0; des mutations dans tous les CA quatre (2 +) des sites de liaison a &#xE9;galement augment&#xE9; la sensibilit&#xE9; PKA de l&#x26;#39;ICA. Enfin, myocytes ventriculaires de souris affich&#xE9; une plus grande r&#xE9;ponse &#xE0; la forskoline et de l&#x26;#39;AMPc en externe Ba (2 +). Ainsi Ca (2 +) entrant dans le myocyte par le Ca voltage-d&#xE9;pendants (2 +) canal r&#xE9;glemente la r&#xE9;activit&#xE9; PKA de l&#x26;#39;ICA.

Intracellulaire de Ca (2 +) R&#xE9;gule la r&#xE9;activit&#xE9; du cardiaque de type L Ca (2 +) Mise &#xE0; jour le prot&#xE9;ine kinase A: R&#xF4;le de la calmoduline

Intrazellul&#xE4;ren Ca (2 +) regelt die Reaktionsf&#xE4;higkeit der kardialen L-Typ Ca (2 +), um aktuelle Proteinkinase A: Rolle von Calmodulin.

L&#39;obiettivo di questo studio era di determinare se la chinasi di proteina reattivit&agrave; A (PKA) della corrente cardiaca tipo L Ca(2+) (ICa) &egrave; interessata durante un aumento transitorio della concentrazione intracellulare di Ca(2+). Miociti ventricolari sono stati isolati da 3 - a 4-day-old neonatali ratti e coltivati su sottile gel collagene allineate. Quando misurata in 1 o 2 mM Ca(2+) soluzione esterna, i miociti allineati visualizzato un grande ICa che era debolmente regolamentata (20% di aumento) durante la stimolazione di PKA di 2 microM forskolina. Al contrario, applicazione di forskolina ha causato un aumento del 100% in ICa quando la concentrazione di Ca(2+) esterna &egrave; stato ridotto a 0,5 mM o sostituita con Ba(2+). Questa inibizione Ca(2+)-dipendente &egrave; stata osservata anche quando le cellule sono state trattate con 1 microM isoproterenol, 100 microM 3-isobutil-1-methylxanthine o 500 microM 8-bromo-cAMP. La reattivit&agrave; di ICa di PKA &egrave; stata restaurata durante la dialisi intracellulare con un peptide inibitorio calmodulina (CaM), ma non durante il trattamento con inibitori della chinasi di proteina C, chinasi di proteina Ca(2+)/CaM-dipendente o calcineurina. Adenoviral-mediata espressione di una molecola di CaM con mutazioni in tutti e quattro i siti Ca(2+)-associazione aumentata anche la sensibilit&agrave; PKA di ICa. Infine, miociti ventricolari topo adulto visualizzato una maggiore risposta di forskolina e accampamento in Ba(2+) esterne. Cos&igrave; entra il myocyte attraverso il canale voltaggio-dipendente Ca(2+) Ca(2+) regola la reattivit&agrave; PKA di ICa.

Ca(2+) intracellulare regola la reattivit&agrave; del cardiac Ca(2+) L-tipo corrente al ruolo di r: proteina chinasi della calmodulina.

&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x7B4B;L&#x578B;Ca&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;PKA&#xFF09;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x304C;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x96FB;&#x6D41;&#xFF08;ICA&#xFF09;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;3&#x304B;&#x3089;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F; -  4&#x65E5;&#x9F62;&#x306E;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x6574;&#x5217;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x4E0A;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B2;&#x30EB;&#x306B;&#x3002; 1&#x307E;&#x305F;&#x306F;2 mM&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x5916;&#x6DB2;&#x3001;&#x6574;&#x5217;&#x7B4B;&#x306F;&#x3001;2&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;PKA&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5F31;&#x304F;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x305F;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;ICA&#xFF08;20&#xFF05;&#x5897;&#xFF09;&#x3068;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x90E8;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C;0.5 mM&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x307E;&#x305F;&#x306F;Ba&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306B;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;ICA&#x306E;100&#xFF05;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;1&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30EC;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;100&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;3  - &#x30A4;&#x30BD;&#x30D6;&#x30C1;&#x30EB;-1  - &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;500&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;8  - &#x30D6;&#x30ED;&#x30E2;-cAMP&#x3092;&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x963B;&#x5BB3;&#x3082;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; PKA&#x3078;&#x306E;ICA&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;/&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E2D;&#x306B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;CaM&#xFF09;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x900F;&#x6790;&#x4E2D;&#x306B;&#x5FA9;&#x5143;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;4&#x3064;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5A92;&#x4ECB;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;ICA&#x306E;PKA&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6210;&#x4F53;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x90E8;&#x306E;Ba&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EB;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;cAMP&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5165;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;2 +&#xFF09;ICA&#x306E;PKA&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#xFF1A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x304C;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3078;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;L&#x578B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A (PKA) &#xC751;&#xB2F5; &#xC2EC;&#xC7A5; L &#xD0C0;&#xC785; Ca(2+) &#xC804;&#xB958; (ICa)&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes 3 &#xC6D4;&#xC5D0; 4 &#xC77C; &#xB41C; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xC815;&#xB82C; &#xB41C; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC587;&#xC740; &#xC824;&#xC5D0; &#xAD50;&#xC591;. 1 &#xB610;&#xB294; 2 m m Ca(2+) &#xC678;&#xBD80; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;, &#xCE21;&#xC815; &#xC815;&#xB82C;&#xB41C; myocytes 2 microM forskolin &#xC5EC; PKA&#xC758; &#xC790;&#xADF9; &#xB3D9;&#xC548; &#xC57D;&#xD558;&#xAC8C; &#xADDC;&#xC81C; (20% &#xC99D;&#xAC00;)&#xB294; &#xD070; Ica&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xBC18;&#xBA74;, forskolin&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC678;&#xBD80; Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4; 0.5 m M&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB610;&#xB294; ba(2+)&#xB85C; &#xAD50;&#xCCB4; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; Ica&#xC5D0; 100% &#xC99D;&#xAC00; &#xC77C;&#xC73C;&#xCF30;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; &#xC800;&#xD574;&#xB3C4; 1 microM isoproterenol, 100 microM 3-isobutyl-1-methylxanthine, &#xB610;&#xB294; 500 microM 8-&#xBE0C;&#xB85C; &#xBAA8;-&#xCEA0;&#xD504; &#xC140; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB54C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. PKA Ica&#xC758; &#xC751;&#xB2F5; &#xC18D;&#xB3C4; calmodulin (&#xCEA0;) &#xAE08;&#xC9C0; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC640; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD22C; &#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C, Ca(2+)/&#xCEA0; &#xC885;&#xC18D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C;, &#xB610;&#xB294; calcineurin &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB450; 4 &#xAC1C;&#xC758; Ca(2+) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; &#xCEA0; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC2DD; Adenoviral &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; Ica&#xC758; PKA &#xAC10;&#xB3C4;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC131;&#xC778; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes &#xC678;&#xBD80; Ba(2+) forskolin&#xC744; &#xCEA0;&#xD504; &#xD070; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC785;&#xB825; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; myocyte Ca(2+) Ica&#xC758; PKA &#xC751;&#xB2F5; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC870;&#xC808;.

&#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xC870;&#xC808; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; a: calmodulin&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xD604;&#xC7AC; &#xC2EC;&#xC7A5; L &#xD615; ca(2+)&#xC758; &#xC751;&#xB2F5;.

El objetivo de este estudio fue determinar si la prote&#xED;na quinasa A la capacidad de respuesta (PKA) de la cardiaca de tipo L de Ca (2 +) actual (Ica) se ve afectada durante los aumentos transitorios de Ca intracelular (2 +) de concentraci&#xF3;n. Miocitos ventriculares se aislaron a partir de 3 - a 4-d&#xED;as de edad, ratas neonatales y cultivadas en geles de col&#xE1;geno alineadas delgadas. Cuando se midi&#xF3; en 1 o 2 mM de Ca (2 +) soluci&#xF3;n externa, los miocitos alineados muestran una gran ICA que se regul&#xF3; d&#xE9;bilmente (20% de incremento) durante la estimulaci&#xF3;n de la PKA por 2 microM forskolina. En contraste, la aplicaci&#xF3;n de forskolina caus&#xF3; un aumento de 100% en Ica cuando el exterior de Ca (2 +) la concentraci&#xF3;n se redujo a 0,5 mM o sustituido con Ba (2 +). Este Ca (2 +)-inhibici&#xF3;n dependiente tambi&#xE9;n se observ&#xF3; cuando las c&#xE9;lulas fueron tratadas con 1 microM isoproterenol, 100 microM 3-isobutil-1-metilxantina, o 500 microM 8-bromo-cAMP. La capacidad de respuesta de Ica a la PKA fue restaurado durante la di&#xE1;lisis intracelular con un p&#xE9;ptido inhibidor de la calmodulina (CaM), pero no durante el tratamiento con inhibidores de la prote&#xED;na quinasa C, Ca (2 +) / CaM-quinasa dependiente de la prote&#xED;na, o la calcineurina. Adenoviral mediada por la expresi&#xF3;n de una mol&#xE9;cula de CaM con mutaciones en toda Ca cuatro (2 +)-sitios de uni&#xF3;n tambi&#xE9;n aument&#xF3; la sensibilidad PKA de ICA. Por &#xFA;ltimo, los adultos miocitos ventriculares de rat&#xF3;n muestran una mayor respuesta a forskolina y el campamento de la demanda externa de Ba (2 +). As&#xED;, Ca (2 +) de entrar en el miocito a trav&#xE9;s de la Ca dependiente de voltaje (2 +) del canal regula la capacidad de respuesta PKA de Ica.

Intracelular de Ca (2 +) Regula la capacidad de respuesta de los cardiaca tipo L de Ca (2 +) actual de la prote&#xED;na quinasa A: Papel de la calmodulina

&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x662F;&#x4E00;&#x5BB6;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28; (ECM) &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x786E;&#x5B9A;&#x5728;&#x8C03;&#x8282;&#x5FC3;&#x810F;&#x7684; L &#x578B;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x6574;&#x5408;&#x7D20; beta(1) &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;&#x65B0;&#x751F;&#x5927;&#x9F20;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80F6;&#x539F;&#x819C;&#x548C;&#x611F;&#x67D3;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6216;&#x4EBA;&#x7C7B; beta(1A) &#x6574;&#x5408; (Adbeta(1A)) &#x6216;&#x5D4C;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x5C3E; beta(1A) &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;/&#x8DE8;&#x819C;&#x57DF;&#x548C;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-2 &#x53D7;&#x4F53; (AdTAC-beta(1))&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x81EA;&#x7531; beta(1) &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x5C3E; &#xFF08;TAC-beta(1))&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x7684;&#x5168;&#x957F; beta(1A) &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x3001; &#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x4E2D;&#x65AD;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x3002;&#x5F53;&#x4E0E;&#x63A7;&#x5236;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;Adbeta(1A) &#x548C; AdTAC-beta(1) &#x90FD;&#x4E0D;&#x611F;&#x67D3;&#x4EA7;&#x751F;&#x4EFB;&#x4F55;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x5728;&#x5F53;&#x524D;&#x914D;&#x7F6E;&#x4E0E;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x7535;&#x538B;&#x5173;&#x7CFB; &#xFF08;I(Ca)) &#x6216; I(Ca) &#x8870;&#x53D8;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x7A33;&#x6001;&#x706D;&#x6D3B;&#x66F2;&#x7EBF;&#x4E2D;&#x7684;&#x8D1F;&#x53D8;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; TAC-beta(1)&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; beta(1A)&#xFF0C;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x5F02;&#x4E19;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86; 90%&#x7684; I(Ca) &#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x4EA7;&#x751F;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8D85;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE;&#x5168;&#x957F; beta(1A) &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9020;&#x6210;&#x53EA;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86; 18%&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;beta-adrenergic &#x523A;&#x6FC0;&#x4E2D;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80DE;&#x5185;&#x8425;&#x6C34;&#x5E73;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86; 5-10 &#x500D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x751F;&#x4EA7; Adbeta (1A) &#x5728;&#x4E0D;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;-&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;TAC-beta(1) &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x5F3A;&#x5316;&#x5BF9;&#x5F02;&#x4E19;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20; (&#x589E;&#x52A0; 160%) &#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x54CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242; BayK8644 &#x5728;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;/ECM &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F; I(Ca) &#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x5173;&#x952E;

&#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x6574;&#x5408;&#x7D20; beta(1A) &#x4E9A;&#x57FA;&#x548C; beta(1A) &#x80DE;&#x8D28;&#x57DF;&#x7684;&#x4FEE;&#x6539; beta-adrenergic &#x8C03;&#x8282;&#x5FC3;&#x810F;&#x7684; L &#x578B; Ca &#xFF08;2 +&#xFF09; &#x7535;&#x6D41;&#x3002;

Integrins are a family of cell-surface receptors that link the extracellular matrix (ECM) to the cellular cytoskeleton. The goal of this study was to determine the importance of the integrin beta(1) subunit in regulating cardiac L-type Ca(2+) channel function. Neonatal rat ventricular myocytes were cultured on collagen membranes and infected with adenovirus expressing either the human beta(1A) integrin (Adbeta(1A)) or a chimeric protein consisting of the cytoplasmic tail domain of the beta(1A) integrin and the extracellular/transmembrane domain of the interleukin-2 receptor (AdTAC-beta(1)). Expression of the free beta(1) integrin tail (TAC-beta(1)), but not the full-length beta(1A) integrin, altered cell morphology and disrupted normal cell adhesion. When compared with myocytes infected with control virus, neither Adbeta(1A) nor AdTAC-beta(1) infection produced any significant change in the current vs. voltage relationship of the whole-cell Ca(2+) current (I(Ca)) or the kinetics of I(Ca) decay. Expression of TAC-beta(1), but not beta(1A), induced a negative shift in the Ca(2+) channel steady-state inactivation curve. Application of the beta-adrenergic receptor agonist isoproterenol produced over a 90% increase in I(Ca) in control cells, but caused only an 18% increase in myocytes overexpressing the full-length beta(1A) integrin. In addition, beta-adrenergic stimulation resulted in a 5-10-fold increase in intracellular cAMP levels in control cells, but produced no significant response in Adbeta(1A)-infected cells. In contrast, expression of TAC-beta(1) was associated with an augmentation in the Ca(2+) channel response to isoproterenol (160% increase) and the Ca(2+) channel agonist BayK8644. Thus, integrin/ECM interactions may be critical in the regulation of I(Ca)

Overexpression of the integrin beta(1A) subunit and the beta(1A) cytoplasmic domain modifies the beta-adrenergic regulation of the cardiac L-type Ca(2+)current.

Int&#xE9;grines sont une famille de r&#xE9;cepteurs de surface cellulaire qui relient la matrice extracellulaire (ECM) au cytosquelette cellulaire. Le but de cette &#xE9;tude &#xE9;tait de d&#xE9;terminer l&#x26;#39;importance de la int&#xE9;grine b&#xEA;ta (1) sous-unit&#xE9; dans la r&#xE9;gulation cardiaque de type L Ca (2 +) la fonction du canal. Myocytes ventriculaires de rats nouveau-n&#xE9;s ont &#xE9;t&#xE9; cultiv&#xE9;es sur des membranes de collag&#xE8;ne et infect&#xE9;s par l&#x26;#39;ad&#xE9;novirus exprimant la b&#xEA;ta humain (1A) de l&#x26;#39;int&#xE9;grine (Adbeta (1A)) ou une prot&#xE9;ine chim&#xE9;rique comprenant le domaine de la queue cytoplasmique de la version b&#xEA;ta (1A) de l&#x26;#39;int&#xE9;grine et l&#x26;#39;extracellulaire / transmembranaire de domaine de r&#xE9;cepteur de l&#x26;#39;interleukine-2 (AdTAC-b&#xEA;ta (1)). Expression de la version b&#xEA;ta gratuite (1) de l&#x26;#39;int&#xE9;grine queue (TAC-beta (1)), mais pas la pleine longueur beta (1A) de l&#x26;#39;int&#xE9;grine, la morphologie des cellules alt&#xE9;r&#xE9;es et perturb&#xE9; l&#x26;#39;adh&#xE9;rence cellulaire normale. En comparaison avec les myocytes infect&#xE9;s par le virus de contr&#xF4;le, ni Adbeta (1A), ni AdTAC-beta (1) l&#x26;#39;infection produite tout changement significatif dans la relation actuelle fonction de la tension de la cellule enti&#xE8;re Ca (2 +) courant (I (Ca)) ou la cin&#xE9;tique de I (Ca) d&#xE9;croissance. Expression de la TAC-beta (1), mais pas beta (1A), induit un d&#xE9;calage n&#xE9;gatif dans le Ca (2 +) canal courbe d&#x26;#39;inactivation l&#x26;#39;&#xE9;tat d&#x26;#39;&#xE9;quilibre. Application de la b&#xEA;ta-adr&#xE9;nergique isoprot&#xE9;r&#xE9;nol agoniste du r&#xE9;cepteur produite sur une augmentation de 90% en I (Ca) dans les cellules de contr&#xF4;le, mais a provoqu&#xE9; seulement une augmentation de 18% dans les myocytes surexprimant la pleine longueur beta (1A) de l&#x26;#39;int&#xE9;grine. En outre, stimulation b&#xEA;ta-adr&#xE9;nergique a entra&#xEE;n&#xE9; une augmentation de 5 &#xE0; 10 fois dans les taux d&#x26;#39;AMPc intracellulaires dans les cellules de contr&#xF4;le, mais n&#x26;#39;ont produit aucune r&#xE9;ponse significative de Adbeta (1A) de cellules infect&#xE9;es. En revanche, l&#x26;#39;expression de TAC-beta (1) a &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9;e &#xE0; une augmentation dans le Ca (2 +) r&#xE9;ponse du canal &#xE0; l&#x26;#39;isoprot&#xE9;r&#xE9;nol (160% d&#x26;#39;augmentation) et le Ca (2 +) agoniste des canaux BayK8644. Ainsi, l&#x26;#39;int&#xE9;grine / ECM interactions peuvent &#xEA;tre critique dans la r&#xE9;gulation de I (Ca)

La surexpression de l&#x26;#39;int&#xE9;grine beta (1A) et la sous-unit&#xE9; b&#xEA;ta (1A) domaine cytoplasmique Modifie le r&#xE8;glement b&#xEA;ta-adr&#xE9;nergiques de l&#x26;#39;cardiaque de type L Ca (2 +) en cours

Die &#xDC;berexpression des Integrin beta (1A)-Untereinheit und der Beta (1A) zytoplasmatische Dom&#xE4;ne modifiziert die Beta-adrenerge Verordnung des kardialen L-Typ-Ca (2 +) Strom.

Le integrine sono una famiglia di recettori della superficie cellulare che linkare la matrice extracellulare (ECM) del citoscheletro cellulare. L&#39;obiettivo di questo studio era di determinare l&#39;importanza della subunit&agrave; beta(1) integrina nella regolazione della funzione cardiaca di canale tipo L Ca(2+). Miociti ventricolari neonatali del ratto sono stati coltivati su membrane di collagene e infettato da adenovirus che esprime sia l&#39;integrina beta(1A) umano (Adbeta(1A)) o una proteina chimerica costituita il dominio della coda citoplasmatica dell&#39;integrina beta(1A) e del dominio extracellulare/transmembrana del recettore dell&#39;interleuchina-2 (AdTAC-beta(1)). Espressione della coda dell&#39;integrina beta(1) libero (TAC-beta(1)), ma non l&#39;integrina beta(1A) Full-length, cellula alterata morfologia e adesione cellulare normale perturbato. Quando confrontato con miociti infettati con controllo virus, infezione n&eacute; Adbeta(1A) n&eacute; AdTAC-beta(1) prodotto alcun cambiamento significativo nell&#39;attuale vs rapporto tensione della Ca(2+) di tutta la cella corrente (I(Ca)) o la cinetica del decadimento I(Ca). Espressione di TAC-beta(1), ma non beta(1A), indotta da un cambiamento negativo nella curva di steady-state inattivazione del canale Ca(2+). Applicazione delle alterazioni recettore agonista isoproterenol prodotto sopra un aumento del 90% in I(Ca) in cellule di controllo, ma ha causato solo un aumento del 18% nei miociti con sovraesprimono relativa l&#39;integrina beta(1A) Full-length. Inoltre, ha comportato un aumento di 5-10 volte in cAMP intracellulare in cellule di controllo stimolazione beta-adrenergici, ma non prodotto alcuna significativa risposta in Adbeta (1A)-cellule infette. Al contrario, espressione di TAC-beta(1) &egrave; stato associato con un aumento della risposta del canale Ca(2+) di isoproterenolo (160% di aumento) e l&#39;agonista di canale Ca(2+) BayK8644. Cos&igrave;, le interazioni dell&#39;integrina/ECM possono essere critiche nella regolazione della I(Ca)

Sovraespressione della subunit&agrave; di integrina beta(1A) e il dominio citoplasmatico beta(1A) modifica del regolamento beta-adrenergici della corrente cardiaca L-type Ca (2++).

&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xFF08;ECM&#xFF09;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x7B4B;L&#x578B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3B2;&#xFF08;1&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x819C;&#x4E0A;&#x306B;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x3B2;&#xFF08;1A&#xFF09;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;Adbeta&#xFF08;1A&#xFF09;&#xFF09;&#x3084;&#x3B2;&#xFF08;1A&#xFF09;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5C3E;&#x90E8;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3067;&#x611F;&#x67D3;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3;2&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;AdTAC-&#x3B2;&#xFF08;1&#xFF09;&#xFF09;&#x3002;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#xFF08;1&#xFF09;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x5C3E;&#xFF08;TAC-&#x3B2;&#xFF08;1&#xFF09;&#xFF09;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#xFF08;1A&#xFF09;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x3092;&#x7834;&#x58CA;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3001;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x3082;Adbeta&#xFF08;1A&#xFF09;&#x3082;AdTAC-&#x3B2;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;1&#xFF09;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x5BFE;&#x96FB;&#x5727;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#xFF08;I&#xFF08;CA&#xFF09;&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;I&#xFF08;Ca&#xFF09;&#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x3002; TAC-&#x3B2;&#xFF08;1&#xFF09;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x3001;&#xFF08;1A&#xFF09;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x66F2;&#x7DDA;&#x306E;&#x8CA0;&#x306E;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;I&#xFF08;CA&#xFF09;&#x306E;&#x307F;&#x304C;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x9577;&#x3B2;&#xFF08;1A&#xFF09;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;18&#xFF05;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;90&#xFF05;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3B2;-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30EC;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x3B2;-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x523A;&#x6FC0;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;cAMP&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;5&#x304B;&#x3089;10&#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;Adbeta&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x5FDC;&#x7B54;&#xFF08;1A&#xFF09;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;TAC-&#x3B2;&#xFF08;1&#xFF09;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30EC;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x3078;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x5FDC;&#x7B54;&#xFF08;160&#xFF05;&#x5897;&#xFF09;&#x3068;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;BayK8644&#x306E;&#x5897;&#x5927;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;/ ECM&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;I&#xFF08;CA&#xFF09;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;

&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#xFF08;1A&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#xFF08;1A&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x7B4B;L&#x578B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x3B2;-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x898F;&#x5247;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;

Integrins&#xB294; &#xAE30;&#xC9C8; (ECM) &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; cytoskeleton&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xAC00;&#xC871;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xC2EC;&#xC7A5; L &#xD0C0;&#xC785; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; integrin beta(1) &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xB3C4; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC950; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xACBD;&#xC791; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; (Adbeta(1A)) &#xB610;&#xB294; beta(1A) integrin &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xAF2C;&#xB9AC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; interleukin-2 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (Adtac-beta(1))&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9C4; chimeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xAC04; beta(1A) integrin &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC;. &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xC790;&#xC720; beta(1) integrin &#xAF2C;&#xB9AC; (TAC-beta(1)), &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; beta(1A) integrin, &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xC140; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xACFC; &#xAD50;&#xB780;&#xB41C; &#xC815;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29;. Adbeta(1a)&#xB3C4; AdTAC-beta(1) &#xAC10;&#xC5FC; (I(Ca)) &#xB610;&#xB294; I(Ca) &#xBD95;&#xAD34;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xD604;&#xC7AC; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; ca(2+)&#xC758; &#xC804;&#xC555; &#xAD00;&#xACC4; &#xB300; &#xC804;&#xB958;&#xC5D0; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xAC00; &#xC0DD;&#xC0B0; myocytes &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C;&#xC640; &#xBE44;&#xAD50;&#xD560; &#xB54C;. TAC-beta(1), &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; beta(1a)&#xC758; &#xD45C;&#xD604; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xC548;&#xC815; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xACE1;&#xC120;&#xC5D0; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4;. Beta-adrenergic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; isoproterenol &#xC751;&#xC6A9; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC140;&#xC5D0; I(Ca) 90% &#xC99D;&#xAC00; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; myocytes &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; beta(1A) integrin overexpressing&#xC5D0; 18% &#xC99D;&#xAC00; &#xC77C;&#xC73C;&#xCF30;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, beta-adrenergic &#xC790;&#xADF9; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCEA0;&#xD504; &#xB808;&#xBCA8; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xC140;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; 5-10 &#xBC30; &#xC99D;&#xAC00; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC0DD;&#xC0B0; Adbeta (1A)&#xC5D0; &#xC911;&#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC774;-&#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xAC10;&#xC5FC;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, Tac-beta(1)&#xC758; &#xD45C;&#xD604; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xC751;&#xB2F5; isoproterenol (160% &#xC99D;&#xAC00;)&#xC640; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; BayK8644 &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, integrin/ECM &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; I(Ca) &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Integrin beta(1A) &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; beta(1A) &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; overexpression&#xC758; &#xC2EC;&#xC7A5; L-&#xC885;&#xB958; Ca (2 +) &#xC804;&#xB958; beta-adrenergic &#xADDC;&#xC815;&#xC744; &#xC218;&#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las integrinas son una familia de receptores de la superficie celular que unen la matriz extracelular (ECM) para el citoesqueleto celular. El objetivo de este estudio fue determinar la importancia de la beta integrina (1) en la regulaci&#xF3;n de la subunidad cardiaca de tipo L de Ca (2 +) la funci&#xF3;n del canal. Neonatales miocitos ventriculares de rata se cultivaron sobre membranas de col&#xE1;geno e infectadas con adenovirus que expresan o bien la beta humana (1A) integrina (Adbeta (1A)) o una prote&#xED;na quim&#xE9;rica que consiste en el dominio cola citopl&#xE1;smica de la beta (1A) y la integrina transmembrana extracelular / dominio del receptor de interleucina-2 (AdTAC-beta (1)). Expresi&#xF3;n de la beta libre (1) integrina cola (TAC-beta (1)), pero no la beta integrina de longitud completa (1A), la morfolog&#xED;a celular alterada y perturbado la adhesi&#xF3;n celular normal. Cuando se compara con miocitos infectados con el virus de control, ni Adbeta (1A), ni AdTAC beta-(1) infecci&#xF3;n producido ning&#xFA;n cambio significativo en la relaci&#xF3;n actual funci&#xF3;n de la tensi&#xF3;n de la Ca de c&#xE9;lulas enteras (2 +) corriente (I (CA)) o la cin&#xE9;tica de I (Ca) caries. Expresi&#xF3;n de TAC-beta (1), pero no beta (1A), indujo un cambio negativo en el Ca (2 +) del canal de estado estacionario curva inactivaci&#xF3;n. La aplicaci&#xF3;n del isoproterenol receptor beta-adren&#xE9;rgico producido m&#xE1;s de un aumento del 90% en I (Ca) en el control de las c&#xE9;lulas, pero s&#xF3;lo caus&#xF3; un aumento del 18% en los miocitos que sobreexpresan la versi&#xF3;n beta de larga duraci&#xF3;n (1A) de la integrina. Adem&#xE1;s, el beta-adren&#xE9;rgico estimulaci&#xF3;n result&#xF3; en un incremento 5-10-veces en los niveles de AMPc intracelular en c&#xE9;lulas de control, pero no produjo una respuesta significativa en Adbeta (1A)-c&#xE9;lulas infectadas. En contraste, la expresi&#xF3;n de CAT-beta (1) se asoci&#xF3; con un aumento en el Ca (2 +) respuesta del canal al isoproterenol (160% de incremento) y Ca la (2 +) agonista canal BayK8644. Por lo tanto, la integrina / ECM interacciones puede ser cr&#xED;tico en la regulaci&#xF3;n de I (Ca)

La sobre-expresi&#xF3;n de la integrina beta (1A) y la subunidad beta (1A) dominio citopl&#xE1;smico Modifica el Reglamento de beta-adren&#xE9;rgicos de la cardiaca de tipo L de Ca (2 +) en curso

Le volume sensible du chlorure de courant (ICl, de la houle) se trouve dans le mammif&#xE8;re myocarde et est activ&#xE9; par un gonflement osmotique. Le but de cette &#xE9;tude &#xE9;tait d&#x26;#39;examiner l&#x26;#39;importance de la tyrosine kinase d&#x26;#39;adh&#xE9;sion focale kinases (FAK) et de la kinase Src dans cardiaque ICl, la r&#xE9;glementation de la houle. Myocytes ventriculaires de rats nouveau-n&#xE9;s ont &#xE9;t&#xE9; cultiv&#xE9;es sur des membranes de collag&#xE8;ne et infect&#xE9;s par l&#x26;#39;ad&#xE9;novirus exprimant la b&#xEA;ta-galactosidase (AdLacZ), FAK, ou FAK li&#xE9;e nonkinase. FAK li&#xE9;e nonkinase (FRNK) est une prot&#xE9;ine endog&#xE8;ne cardiaque, qui fonctionne comme un inhibiteur de FAK. Entiers de cellules de patch-clamp enregistrements d&#xE9;montr&#xE9; que gonflement osmotique a &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;activation d&#x26;#39;un courant sortant de rectification dans les cellules non infect&#xE9;es et AdLacZ-infect&#xE9;. Compte tenu des propri&#xE9;t&#xE9;s de ICl, de la houle, ce courant fait preuve d&#x26;#39;un potentiel d&#x26;#39;inversion pr&#xE8;s du potentiel d&#x26;#39;&#xE9;quilibre du Cl-; a &#xE9;t&#xE9; inhib&#xE9;e par les bloqueurs de canaux Cl-4,4 &#x26;#39;-dinitrostilb&#xE8;ne-2, 2&#x26;#39;-disulfonique, 5-nitro -2 - (3-ph&#xE9;nylpropylamino)-benzo&#xEF;que l&#x26;#39;acide, et le tamoxif&#xE8;ne, et a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;limin&#xE9; dans la solution hypertonique. En plus d&#x26;#39;activer ICl, de la houle, hypotonique gonflement am&#xE9;lior&#xE9; la phosphorylation sur tyrosine de plusieurs prot&#xE9;ines cardiaques, y compris ceux de la gamme de 68-70 et 120-130 kDa. Pr&#xE9;traitement des cellules avec le m&#xE9;dicament 4-amino-5-(4-chloroph&#xE9;nyl) -7 - (t-butyl)-pyrazolo [3,4-d] pyrimidine, un inhibiteur de FAK et Src, diminu&#xE9;e gonflement induite phosphorylation de ces prot&#xE9;ines, mais, paradoxalement, augment&#xE9; ICl, gonfler. En outre, la surexpression de FAK FRNK mais pas entra&#xEE;n&#xE9; une augmentation de double en I (Cl, houle) et a augment&#xE9; le taux d&#x26;#39;activation actuelle. Ainsi, les tyrosine kinases FAK et Src contribuent &#xE0; la r&#xE9;gulation de ICl, gonfler.

R&#xE8;glement du canal chlorure cardiaque Volume sensible par Focal Adhesion Kinase et kinase Src

Die Verordnung von Herz-Volumen-sensitiven Chlorid-Kanal von Focal Adhesion Kinase und Src-Kinase.

&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x5BB9;&#x79EF;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x6C2F; (ICl&#xFF0C;&#x81A8;&#x80C0;&#xFF09; &#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x5FC3;&#x808C;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#xFF0C;&#x5E76;&#x901A;&#x8FC7;&#x6E17;&#x900F;&#x80BF;&#x80C0;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x5BA1;&#x67E5;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x9ECF;&#x7740;&#x6591;&#x6FC0;&#x9176; &#xFF08;FAK&#xFF09; &#x548C; Src &#x6FC0;&#x9176;&#x5728;&#x5FC3;&#x810F; ICl&#xFF0C;&#x81A8;&#x80C0;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;&#x65B0;&#x751F;&#x5927;&#x9F20;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80F6;&#x539F;&#x819C;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE; &beta;-&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x82F7;&#x9176; (AdLacZ)&#x3001; FAK &#x6216; FAK &#x76F8;&#x5173; nonkinase &#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;FAK &#x76F8;&#x5173; nonkinase &#xFF08;FRNK&#xFF09; &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x7684;&#x5FC3;&#x810F;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x9ECF;&#x7740;&#x6591;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x819C;&#x7247;&#x94B3;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8BB0;&#x5F55;&#x8868;&#x660E;&#x6E17;&#x900F;&#x80BF;&#x80C0;&#x662F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5916;&#x5411;&#x6574;&#x6D41;&#x5F53;&#x524D;&#x672A;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x548C; AdLacZ &#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684; ICl&#xFF0C;&#x81A8;&#x80C0;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7535;&#x6D41;&#x63A5;&#x8FD1;&#x6F5C;&#x5728;&#x5747;&#x8861;&#x6F5C;&#x5728;&#x9006;&#x8F6C;&#x4E3A;&#x663E;&#x793A; Cl-&#xFF1B;&#x88AB;&#x6291;&#x5236; Cl-&#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242; 4&#x3001; 4&#39;-dinitrostilbene-2&#xFF0C;2&#39;-&#x4E8C;&#x78FA;&#x9178;&#x9178;&#x3001; 5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)-benzoic &#x9178;&#x548C;&#x4E09;&#x82EF;&#x6C27;&#x80FA; &#xFF1B;&#x9AD8;&#x6E17;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x88AB;&#x6DD8;&#x6C70;&#x4E86;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x6FC0;&#x6D3B; ICl&#xFF0C;&#x81A8;&#x80C0;&#xFF0C;&#x4F4E;&#x6E17;&#x80BF;&#x80C0;&#x52A0;&#x5F3A;&#x5305;&#x62EC;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5728; 68-70 &#x548C; 120-130 kDa &#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x5FC3;&#x810F;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;4-Amino-5-(4-chlorophenyl)-7-(t-butyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidine &#x836F;&#x7269;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9884;&#x5904;&#x7406;&#x3001; &#x6291;&#x5236; FAK &#x4E0E; Src&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x80BF;&#x80C0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4F46;&#x77DB;&#x76FE;&#x7684;&#x662F;&#x589E;&#x52A0; ICl &#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3001; &#x81A8;&#x80C0;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;FRNK &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x9ECF;&#x7740;&#x6591;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728; I(Cl,swell) &#x4E2D;&#x9020;&#x6210;&#x53CC;&#x91CD;&#x5F3A;&#x5316;&#x548C;&#x5F53;&#x524D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x6BD4;&#x7387;&#x4E0A;&#x5347;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;&#x548C; Src &#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x7684; ICl&#xFF0C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x81A8;&#x80C0;&#x3002;

&#x7C98;&#x7740;&#x6591;&#x6FC0;&#x9176;&#x548C; Src &#x6FC0;&#x9176;&#x5FC3;&#x810F;&#x5BB9;&#x79EF;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x6C2F;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;

The volume-sensitive chloride current (ICl,swell) is found in the mammalian myocardium and is activated by osmotic swelling. The goal of this study was to examine the importance of the tyrosine kinases focal adhesion kinase (FAK) and Src kinase in cardiac ICl,swell regulation. Neonatal rat ventricular myocytes were cultured on collagen membranes and infected with adenovirus expressing beta-galactosidase (AdLacZ), FAK, or FAK-related nonkinase. FAK-related nonkinase (FRNK) is an endogenous cardiac protein, which functions as an inhibitor of FAK. Whole cell patch-clamp recordings demonstrated that osmotic swelling was associated with the activation of an outward rectifying current in uninfected and AdLacZ-infected cells. Consistent with the properties of ICl,swell, this current displayed a reversal potential close to the equilibrium potential for Cl-; was inhibited by the Cl- channel blockers 4,4'-dinitrostilbene-2,2'-disulfonic acid, 5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)-benzoic acid, and tamoxifen; and was eliminated in hypertonic solution. In addition to activating ICl,swell, hypotonic swelling enhanced the tyrosine phosphorylation of multiple cardiac proteins including those in the range of 68-70 and 120-130 kDa. Pretreatment of the cells with the drug 4-amino-5-(4-chlorophenyl)-7-(t-butyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidine, an inhibitor of FAK and Src, diminished swelling-induced phosphorylation of these proteins but paradoxically increased ICl,swell. Furthermore, overexpression of FRNK but not FAK caused a twofold augmentation in I(Cl,swell) and increased the rate of current activation. Thus the tyrosine kinases FAK and Src contribute to the regulation of ICl,swell.

Regulation of cardiac volume-sensitive chloride channel by focal adhesion kinase and Src kinase.

Il cloruro di volume sensibile corrente (ICl, swell) &egrave; trovato nel miocardio dei mammiferi ed &egrave; attivato dal gonfiamento osmotico. L&#39;obiettivo di questo studio era di esaminare l&#39;importanza della tirosina chinasi focale di adesione chinasi (FAK) e della chinasi Src in cardiaco ICl, swell regolamento. Miociti ventricolari neonatali del ratto sono stati coltivati su membrane di collagene e infettato da adenovirus esprimendo la beta-galattosidasi (AdLacZ), FAK o correlati a FAK nonkinase. Correlati a FAK nonkinase (FRNK) &egrave; una proteina endogena cardiaca, che funziona come un inibitore di FAK. Registrazioni di patch-clamp intera cellula ha dimostrato che rigonfiamento osmotico &egrave; stato associato con l&#39;attivazione di una rettifica esterno corrente nelle cellule non infette e AdLacZ-infetti. Coerenti con le propriet&agrave; di ICl, swell, questa corrente visualizzata un&#39;inversione potenziale vicino al potenziale di equilibrio per Cl-; &egrave; stato inibito dai bloccanti Cl-canale 4, 4&#39;-dinitrostilbene - 2, 2&#39;-disolfonico acido, acido 5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)-benzoic e tamoxifene; ed &egrave; stato eliminato in soluzione ipertonica. Oltre ad attivare ICl, swell, gonfiore ipotonica rafforzata la fosforilazione della tirosina di proteine cardiache multipli, compresi quelli nella gamma di 68-70 e 120-130 kDa. Pretrattamento delle cellule con il farmaco 4-amino-5-(4-chlorophenyl)-7-(t-butyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidine, un inibitore di FAK e Src, ha diminuito il gonfiore-indotta la fosforilazione di queste proteine ma paradossalmente aumentato ICl, swell. Inoltre, sovraespressione di FRNK ma non FAK ha causato un aumento del duplice in I(Cl,swell) e aumentato il tasso di attivazione corrente. Cos&igrave; la chinasi della tirosina FAK e Src contribuiscono alla regolazione della ICl, swell.

Regolamento del canale cloruro cardiaco volume sensibile da chinasi focale di adesione e della chinasi Src.

&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x5869;&#x5316;&#x7269;&#xFF08;ICL&#x3001;&#x3046;&#x306D;&#x308A;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x6D78;&#x900F;&#x81A8;&#x5F35;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7126;&#x70B9;&#x63A5;&#x7740;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;FAK&#xFF09;&#x3068;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;ICL&#x3001;&#x3046;&#x306D;&#x308A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Src&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x819C;&#x4E0A;&#x306B;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x3001;&#x3B2;-&#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;AdLacZ&#xFF09;&#x3001;FAK&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;FAK&#x95A2;&#x9023;nonkinase&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x611F;&#x67D3;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002; FAK&#x95A2;&#x9023;nonkinase&#xFF08;FRNK&#xFF09;&#x306F;&#x3001;FAK&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x8A18;&#x9332;&#x306F;&#x3001;&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x306E;&#x816B;&#x308C;&#x304C;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3068;AdLacZ&#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x306B;&#x6574;&#x6D41;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; ICL&#x3001;&#x3046;&#x306D;&#x308A;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3001;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x3053;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x8868;&#x793A;&#x53CD;&#x8EE2;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5E73;&#x8861;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x306E;Cl-&#x3001;CL&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x906E;&#x65AD;&#x85AC;&#x3001;4,4 &#x26;#39; -  dinitrostilbene-2&#x200B;&#x200B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x26;#39;  - &#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30F3;&#x9178;&#x3001;5  - &#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;-2  - &#xFF08;3  -  phenylpropylamino&#xFF09; - &#x5B89;&#x606F;&#x9999;&#x9178;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30BF;&#x30E2;&#x30AD;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9AD8;&#x5F35;&#x6DB2;&#x3067;&#x9664;&#x53BB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; 68&#x304B;&#x3089;70&#x3068;120&#x304B;&#x3089;130 kDa&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x5185;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;ICL&#x3001;&#x3046;&#x306D;&#x308A;&#x3001;&#x5F35;&#x816B;&#x308C;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3002;&#x85AC;4  - &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;-5  - &#xFF08;4  - &#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#xFF09;-7&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x524D;&#x51E6;&#x7406; - &#xFF08;t-&#x30D6;&#x30C1;&#x30EB;&#xFF09;&#x30D4;&#x30E9;&#x30BE;&#x30ED;[3,4-d]&#x30D4;&#x30EA;&#x30DF;&#x30B8;&#x30F3;&#x3001;FAK&#x304A;&#x3088;&#x3073;Src&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306E;&#x816B;&#x308C;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x9006;&#x8AAC;&#x7684;&#x306B;ICL&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x81A8;&#x6F64;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;FRNK&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;FAK&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x306E;2&#x500D;&#x62E1;&#x5927;&#xFF08;CL&#x3001;&#x3046;&#x306D;&#x308A;&#xFF09;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;FAK&#x304A;&#x3088;&#x3073;Src&#x306F;&#x3001;ICL&#x3001;&#x3046;&#x306D;&#x308A;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7126;&#x70B9;&#x63A5;&#x7740;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;Src&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5FC3;&#x81D3;&#x5BB9;&#x7A4D;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x30AF;&#x200B;&#x200B;&#x30ED;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;

&#xD604;&#xC7AC; &#xBCFC;&#xB968;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC5FC;&#xD654; (ICl, &#xD33D;&#xCC3D;) &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC2EC;&#xADFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xACE0; &#xC0BC; &#xD22C; &#xBD93;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; tyrosine kinases &#xCD08;&#xC810; &#xC811;&#xCC29; &#xB2C8; (&#xD30D;) &#xBC0F; &#xC2EC;&#xC7A5; ICl, &#xD33D;&#xCC3D; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; Src kinase&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC950; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xACBD;&#xC791; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xBCA0;&#xD0C0;-galactosidase (AdLacZ) &#xC774;&#xB098; &#xD30D;, &#xD30D; &#xAD00;&#xB828; nonkinase&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC;. &#xD30D; &#xAD00;&#xB828; nonkinase (FRNK) &#xD30D;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB0B4; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xB179;&#xC74C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xC0BC; &#xD22C; &#xBD93;&#xAE30;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; &#xD604;&#xC7AC; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xBC0F; Adlacz&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD588;&#xB2E4;. ICl, &#xD33D;&#xCC3D;, &#xC18D;&#xC131; &#xC77C;&#xCE58;&#xC774; &#xD604;&#xC7AC; Cl-;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xD3C9;&#xD615;&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801; &#xBC18;&#xC804; &#xD45C;&#xC2DC; Cl-&#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C; 4, 4&#39;-dinitrostilbene-2, 2&#39;-disulfonic &#xC0B0;, 5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)-benzoic &#xC0B0; &#xBC0F; tamoxifen;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC548; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0C8;&#xB77D; &#xD588;&#xB2E4;. ICl, &#xD33D;&#xCC3D;, &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xACE0;&#xC628; &#xBD93;&#xAE30; 68-70&#xACFC; 120-130 Kda&#xC758; &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xD5A5;&#xC0C1;. 4-Amino-5-(4-chlorophenyl)-7-(t-butyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidine &#xC57D;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC140;&#xC758; &#xC804;&#xCC98;&#xB9AC;, &#xD30D; &#xBC0F; Src, &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xC5ED;&#xC124;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; Icl&#xC774;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBD93;&#xAE30; &#xC720;&#xB3C4;, &#xD33D;&#xCC3D;. &#xB610;&#xD55C;, FRNK&#xB9CC; &#xC548; &#xD30D;&#xC758; overexpression i(cl,swell)&#xC5D0;&#xC11C; 2 &#xC911; &#xD655;&#xB300; &#xC778;&#xD574; &#xACE0; &#xD604;&#xC7AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD30D;&#xACFC; Src ICl, &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; tyrosine kinases &#xD33D;&#xCC3D;.

&#xCD08;&#xC810; &#xC811;&#xCC29; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xBC0F; Src &#xB2C8; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBCFC;&#xB968; &#xAD6C;&#xBD84; &#xC5FC;&#xD654; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;.

El volumen sensible al cloruro de corriente (ICl, oleaje) se encuentra en el mam&#xED;fero miocardio y es activado por hinchamiento osm&#xF3;tico. El objetivo de este estudio fue examinar la importancia de la quinasa de adhesi&#xF3;n de tirosina quinasas focal (FAK) y quinasa Src de la funci&#xF3;n cardiaca ICL, la regulaci&#xF3;n del oleaje. Neonatales miocitos ventriculares de rata se cultivaron sobre membranas de col&#xE1;geno e infectadas con adenovirus que expresa beta-galactosidasa (AdLacZ), FAK, o nonkinase FAK relacionada. FAK relacionada nonkinase (FRNK) es una prote&#xED;na end&#xF3;gena card&#xED;aca, que funciona como un inhibidor de FAK. C&#xE9;lulas enteras patch-clamp grabaciones demostrado que hinchamiento osm&#xF3;tico se asoci&#xF3; con la activaci&#xF3;n de una corriente hacia el exterior rectificar en c&#xE9;lulas no infectadas y AdLacZ infectadas. En consonancia con las propiedades de ICl, oleaje, esta corriente se muestra un potencial reversi&#xF3;n cerca del potencial de equilibrio para el Cl-; fue inhibida por los bloqueadores de los canales de Cl-4,4 &#x26;#39;-dinitrostilbene-2, 2&#x26;#39;-disulf&#xF3;nico, &#xE1;cido 5-nitro -2 - (3-fenilpropilamino)-benzoico, y el tamoxifeno, y se elimin&#xF3; en soluci&#xF3;n hipert&#xF3;nica. Adem&#xE1;s de la activaci&#xF3;n de ICL, se hinchan, hipot&#xF3;nica hinchaz&#xF3;n aument&#xF3; la fosforilaci&#xF3;n de la tirosina de m&#xFA;ltiples prote&#xED;nas card&#xED;acas, incluyendo aquellos en el rango de 68-70 y 120-130 kDa. El pretratamiento de las c&#xE9;lulas con el f&#xE1;rmaco 4-amino-5-(4-clorofenil) -7 - (t-butil) pirazolo [3,4-d] pirimidina, un inhibidor de FAK y Src, la disminuci&#xF3;n de la inflamaci&#xF3;n inducida por fosforilaci&#xF3;n de estos prote&#xED;nas, pero, parad&#xF3;jicamente, mayor ICL, se hinchan. Por otra parte, la sobreexpresi&#xF3;n de FAK FRNK pero no caus&#xF3; un aumento del doble en I (Cl, oleaje) y el aumento de la tasa de activaci&#xF3;n actual. As&#xED;, las tirosina quinasas Src FAK y contribuyen a la regulaci&#xF3;n de la ICL, se hinchan.

Reglamento del Canal de cloruro de volumen card&#xED;aco y min&#xFA;sculas de la quinasa de adhesi&#xF3;n focal y la kinasa Src

&#x5FC3;&#x810F;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x6027; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x808C;&#x8089;&#x6536;&#x7F29;&#x3001; &#x7B2C;&#x4E8C;&#x4FE1;&#x4F7F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3001; &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x7535;&#x6C14;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BBF;&#x95EE;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x7684; L &#x578B; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x5728;&#x5FC3;&#x810F;&#x4E2D;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8868;&#x793A;&#xFF0C;&#x4E8C;&#x6C22;&#x5421;&#x5576;&#x7C7B; (DHP)-&#x4E0D;&#x533A;&#x5206; CaV1.2 &#x901A;&#x9053;&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x3002;&#x540E;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x57F9;&#x517B;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x611F;&#x67D3;&#x4E86;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2; LacZ &#x6216;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; CaV1.2 &#x901A;&#x9053; &#xFF08;CaV1.2DHPi&#xFF09;&#xFF0C;&#x5305;&#x542B;&#x53CC;&#x7A81;&#x53D8; (T1039Y &amp; Q1043M)&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x5448;&#x73B0;&#x901A;&#x9053;&#x4E3A;&#x4E2D;&#x6027;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x533A;&#x5206;&#x5927;&#x5C0F;&#x5199; DHP &#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5982;&#x5C3C;&#x7D22;&#x5730;&#x5E73;&#x3002;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE; L &#x578B; Ca2 + &#x5F53;&#x524D; (ICa) &#x6D4B;&#x91CF;&#x4E2D;&#x63A7;&#x5236;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6291;&#x5236;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x5C3C;&#x7D22;&#x5730;&#x5E73;&#x4E0E; IC50 66 nM &#x548C;&#x5B8C;&#x6574;&#x5757; 250 &#x725B;&#x7C73;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;ICa AdCaV1.2DHPi &#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x7531; 500 nM &#x5C3C;&#x7D22;&#x5730;&#x5E73;&#x53EA;&#x6709; 35%&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#xFF0C;&#x4F46; 50 microM &#x5C14;&#x786B;&#x5353;&#x88AB;&#x5B8C;&#x5168;&#x963B;&#x6B62;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x5B64;&#x7ACB;&#x5730;&#x7814;&#x7A76; CaV1.2DHPi&#xFF0C;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x611F;&#x67D3; AdCaV1.2DHPi &#x88AB;&#x5B75;&#x5316;&#x4E0E;&#x5C3C;&#x7D22;&#x5730;&#x5E73;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8868;&#x793A;&#x5927; ICa (12 pA/pF) &#x548C;&#x5728;&#x5916;&#x5730;&#x523A;&#x6FC0;&#x671F;&#x95F4;&#x663E;&#x793A; Ca2 + &#x77AC;&#x53D8;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x773C;&#x538B;&#x5347;&#x9AD8; microM 2 &#x548C;&#x9EC4;&#x560C;&#x5464; 100 microM 3-&#x5F02;&#x4E01;&#x57FA;-1-&#x7532;&#x57FA; &#xFF08;IBMX&#xFF09;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x523A;&#x6FC0;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A&#xFF0C;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x63A8;&#x52A8;&#x4E86;&#x56FD;&#x9645;&#x5F8B;&#x5E08;&#x534F;&#x4F1A; AdCaV1.2DHPi &#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;Cd2 +-&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x56FD;&#x9645;&#x5F8B;&#x5E08;&#x534F;&#x4F1A;&#x4E5F;&#x5F55;&#x5F97; AdCaV1.2DHPi &#x611F;&#x67D3;&#x5FC3;&#x810F;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;CaV1.2DHPi &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5C06;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4E8C;&#x6C22;&#x5421;&#x5576;&#x7C7B;&#x4E0D;&#x533A;&#x5206; L-&#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

Cardiac voltage-gated Ca2+ channels regulate the intracellular Ca2+ concentration and are therefore essential for muscle contraction, second messenger activation, gene expression and electrical signaling. As a first step in accessing the structural versus functional properties of the L-type Ca2+ channel in the heart, we have expressed a dihydropyridine (DHP)-insensitive CaV1.2 channel in rat ventricular myocytes and fibroblasts. Following isolation and culture, cells were infected with adenovirus expressing either LacZ or a mutant CaV1.2 channel (CaV1.2DHPi) containing the double mutation (T1039Y & Q1043M). This mutation renders the channel insensitive to neutral DHP compounds such as nisoldipine. The whole-cell, L-type Ca2+ current (ICa) measured in control myocytes was inhibited in a concentration-dependent manner by nisoldipine with an IC50 of 66 nM and complete block at 250 nM. In contrast, ICa in cells infected with AdCaV1.2DHPi was inhibited by only 35% by 500 nM nisoldipine but completely blocked by 50 microM diltiazem. In order to study CaV1.2DHPi in isolation, myocytes infected with AdCaV1.2DHPi were incubated with nisoldipine. Under this condition the cells expressed a large ICa (12 pA/pF) and displayed Ca2+ transients during field stimulation. Furthermore, addition of 2 microM forskolin and 100 microM 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX), to stimulate protein kinase A, strongly increased IBa in the AdCaV1.2DHPi-infected cells. A Cd2+-sensitive IBa was also recorded in cardiac fibroblasts infected with AdCaV1.2DHPi. Thus, expression of CaV1.2DHPi will provide an important tool in studies of cardiac myocyte and fibroblast function.

Adenoviral-mediated expression of dihydropyridine-insensitive L-type calcium channels in cardiac ventricular myocytes and fibroblasts.

Cardiaques voltage-d&#xE9;pendants canaux Ca2 + r&#xE9;glementer la concentration de Ca2 + intracellulaire et sont donc essentiels pour la contraction musculaire, l&#x26;#39;activation de second messager, l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes et de signalisation &#xE9;lectriques. Comme une premi&#xE8;re &#xE9;tape dans l&#x26;#39;acc&#xE8;s aux propri&#xE9;t&#xE9;s structurelles par rapport fonctionnelle de la L-Type de Ca2 + dans le canal de coeur, nous avons exprim&#xE9; une dihydropyridine (DHP) insensible &#xE0; la casse Cav1.2 canal dans les myocytes ventriculaires de rat et des fibroblastes. Suite &#xE0; l&#x26;#39;isolation et la culture, les cellules ont &#xE9;t&#xE9; infect&#xE9;es par l&#x26;#39;ad&#xE9;novirus exprimant LacZ ou un mutant Cav1.2 canal (CaV1.2DHPi) contenant la double mutation (T1039Y &#x26;amp; Q1043M). Cette mutation rend le canal insensible aux compos&#xE9;s DHP neutres tels que nisoldipine. La cellule enti&#xE8;re, de type L Ca2 + actuelle (ICA) mesur&#xE9;e dans les myocytes de contr&#xF4;le a &#xE9;t&#xE9; inhib&#xE9;e de mani&#xE8;re dose-d&#xE9;pendante par nisoldipine avec une CI50 de 66 nM et un bloc complet &#xE0; 250 nm. En revanche, l&#x26;#39;ICA dans les cellules infect&#xE9;es par le AdCaV1.2DHPi a &#xE9;t&#xE9; inhib&#xE9;e par seulement 35% de 500 nM nisoldipine mais compl&#xE8;tement bloqu&#xE9; de 50 microM diltiazem. Afin d&#x26;#39;&#xE9;tudier CaV1.2DHPi dans l&#x26;#39;isolement, les myocytes infect&#xE9;s par AdCaV1.2DHPi ont &#xE9;t&#xE9; incub&#xE9;es avec nisoldipine. Sous cette condition, les cellules expriment un grand ICa (12 pA / pF) et affich&#xE9; Ca2 + de transitoires lors de la stimulation de champ. En outre, l&#x26;#39;addition de 2 microM forskoline et 100 microM 3-isobutyl-1-m&#xE9;thylxanthine (IBMX), de stimuler la prot&#xE9;ine kinase A IBA, augmente fortement dans les cellules infect&#xE9;es par AdCaV1.2DHPi. Un Cd2 + sensible IBA a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;galement enregistr&#xE9; dans les fibroblastes cardiaques infect&#xE9;es par le AdCaV1.2DHPi. Ainsi, l&#x26;#39;expression de CaV1.2DHPi fournira un outil important dans les &#xE9;tudes de myocytes cardiaques et la fonction des fibroblastes.

Ad&#xE9;noviral m&#xE9;di&#xE9;e par l&#x26;#39;expression de la dihydropyridine-insensibles canaux calciques de type L dans les myocytes ventriculaires cardiaques et des fibroblastes

Kardiale Spannung-Gating Ca2 + Kan&auml;le die intrazellul&auml;ren Ca2 +-Konzentration zu regulieren und sind daher f&uuml;r die Muskelkontraktion, zweite Bote-Aktivierung, Genexpression und Elektrische Signalisierung. Als ersten Schritt beim Zugriff auf die strukturellen und funktionellen Eigenschaften des L-Typ Ca2 +-Kanals im Herzen, haben wir eine Dihydropyridin (DHP) ge&auml;u&szlig;ert-unempfindliche CaV1.2 Kanal Ratte ventrikul&auml;re Muskelzellen und Fibroblasten. Nach Isolierung und Kultur wurden Zellen mit Adenoviren auszudr&uuml;cken entweder LacZ oder ein mutant CaV1.2 Kanal (CaV1.2DHPi), enth&auml;lt die doppelte-Mutation (T1039Y &amp; Q1043M) infiziert. Diese Mutation rendert den Kanal unempfindliche gegen neutrale DHP-Verbindungen wie Nisoldipine. Der ganze Zellen und L-Typ Ca2 + Strom (ICa) gemessen im Steuerelement Myocytes in gewissem Sinne Konzentration abh&auml;ngige, durch Nisoldipine mit einem IC50 66 nM und vollst&auml;ndigen Block bei 250 gehemmt war nM. ICa in Zellen, die mit AdCaV1.2DHPi infiziert wurde hingegen gehemmt von nur 35 % von 500 nM Nisoldipine aber komplett von 50 MicroM Diltiazem blockiert. Um CaV1.2DHPi isoliert zu studieren, waren Myocytes mit AdCaV1.2DHPi infiziert mit Nisoldipine inkubiert. Unter dieser Bedingung die Zellen ausgedr&uuml;ckt eine gro&szlig;e ICa (12 pA/pF) und Ca2 + Transienten w&auml;hrend der Stimulation Feld angezeigt. Dar&uuml;ber hinaus stiegen die Zugabe von 2 MicroM Forskolin und 100 MicroM 3-Isobutyl-1-Methylxanthine (IBMX), Protein-Kinase A, stimulieren stark IBa in den AdCaV1.2DHPi-infizierten Zellen. Ein Cd2 +-sensible IBa wurde auch aufgenommen in kardialen Fibroblasten mit AdCaV1.2DHPi infiziert. Ausdruck von CaV1.2DHPi wird somit ein wichtiges Instrument in Studien der kardialen Muskelfaser und Fibroblasten-Funktion bieten.

Adenoviral-vermittelte Ausdruck des Dihydropyridin-unempfindliche L-Typ-Kalzium-Kan&auml;le in kardiale ventrikul&auml;re Muskelzellen und Fibroblasten.

Canali Ca2 + voltaggio-dipendenti cardiache regolano la concentrazione intracellulare di Ca2 + e sono quindi essenziali per la contrazione muscolare, seconda attivazione messenger, espressione genica e di segnalazione elettrica. Come primo passo accedere a strutturale rispetto alle propriet&agrave; funzionali del canale tipo L Ca2 + nel cuore, abbiamo espresso un diidropiridinico (DHP)-insensibile canale CaV1.2 in miociti ventricolari ratto e fibroblasti. A seguito di isolamento e la coltura, le cellule sono state infettate con adenovirus esprimendo LacZ o un mutante canale CaV1.2 (CaV1.2DHPi) contenenti la doppia mutazione (T1039Y &amp; Q1043M). Questa mutazione rende il canale insensibile al neutro composti DHP come nisoldipina. Le cellule intere, tipo L Ca2 + corrente (ICa) misurata nel controllo miociti era inibito in modo concentrazione-dipendente da nisoldipina con una CL50 di 66 nM e blocco completo a 250 nM. Al contrario, ICa in cellule infettate con AdCaV1.2DHPi &egrave; stato inibito da solo il 35% da 500 nM nisoldipina ma completamente bloccato da 50 microM diltiazem. Per studiare CaV1.2DHPi in isolamento, miociti infettati con AdCaV1.2DHPi sono stati incubati con nisoldipina. Sotto questa condizione le cellule ha espresso una grande ICa (12 pA/pF) e visualizzato Ca2 + transitori durante la stimolazione del campo. Inoltre, aggiunta di 2 microM forskolina e 100 microM 3-isobutil-1-methylxanthine (IBMX), per stimolare la proteina chinasi A, fortemente aumentato IBa nelle cellule infettate da AdCaV1.2DHPi. Un Cd2 +-IBa sensibile &egrave; stato registrato anche in fibroblasti cardiaci infettati con AdCaV1.2DHPi. Cos&igrave;, espressione di CaV1.2DHPi fornir&agrave; uno strumento importante negli studi del miocita cardiaco e funzione dei fibroblasti.

Adenoviral-mediata espressione dei canali di calcio L-tipo diidropiridinico-insensibili in miociti ventricolari cardiaci e fibroblasti.

&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;Ca2 +&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x7B4B;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3001;&#x30BB;&#x30AB;&#x30F3;&#x30C9;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x90E8;&#x306B;L&#x578B;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x5BFE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#xFF08;DHP&#xFF09;&#x3068;&#x5C0F;&#x6587;&#x5B57;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x306A;&#x3044;CaV1.2&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5358;&#x96E2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x57F9;&#x990A;&#x5F8C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;LacZ&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#xFF08;T1039Y&#xFF06;Q1043M&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;CaV1.2&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;CaV1.2DHPi&#xFF09;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x611F;&#x67D3;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x30CB;&#x30BD;&#x30EB;&#x30B8;&#x30D4;&#x30F3;&#x3001;&#x4E2D;&#x6027;DHP&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306A;&#x3044;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;L-&#x578B;Ca2 +&#x96FB;&#x6D41;&#xFF08;ICA&#xFF09;&#x306F;&#x3001;250nm&#x3067;66 nM&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;IC50&#x3068;&#x30CB;&#x30BD;&#x30EB;&#x30B8;&#x30D4;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;AdCaV1.2DHPi&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;ICA&#x306F;&#x3001;500 nM&#x306E;&#x30CB;&#x30BD;&#x30EB;&#x30B8;&#x30D4;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x308F;&#x305A;&#x304B;35&#xFF05;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;50&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C1;&#x30A2;&#x30BC;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;CaV1.2DHPi&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;AdCaV1.2DHPi&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x30CB;&#x30BD;&#x30EB;&#x30B8;&#x30D4;&#x30F3;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;ICA&#xFF08;12 PA / pF&#xFF09;&#x3068;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;Ca2 +&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;2&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;100&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;3  - &#x30A4;&#x30BD;&#x30D6;&#x30C1;&#x30EB;-1  - &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#xFF08;IBMX&#xFF09;&#x3001;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306F;&#x3001;&#x5F37;&#x304F;AdCaV1.2DHPi&#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;IBA&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; CD2 +&#x611F;&#x53D7;&#x6027;IBA&#x306F;&#x307E;&#x305F;AdCaV1.2DHPi&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x5FC3;&#x81D3;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x8A18;&#x9332;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;CaV1.2DHPi&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5FC3;&#x81D3;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x3068;&#x5C0F;&#x6587;&#x5B57;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x306A;&#x3044;L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6027;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;

&#xC2EC;&#xC7A5; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; Ca2 + &#xCC44;&#xB110; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xACE0; &#xADFC;&#xC721;&#xC758; &#xC218;&#xCD95;, &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xBC0F; &#xC804;&#xAE30; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778;. &#xB9C8;&#xC74C;&#xC5D0; L &#xD615; Ca2 + &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC18D;&#xC131; &#xB300; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; dihydropyridine (DHP)&#xC744; &#xD45C;&#xBA85;&#xD55C;-&#xC950; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes &#xBC0F; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; CaV1.2 &#xCC44;&#xB110;. &#xB2E4;&#xC74C; &#xACA9;&#xB9AC;&#xC640; &#xBB38;&#xD654;, &#xC140; LacZ &#xB610;&#xB294; &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (T1039Y &amp; Q1043M)&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; CaV1.2 &#xCC44;&#xB110; (CaV1.2DHPi)&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; nisoldipine &#xAC19;&#xC740; &#xC911;&#xB9BD; &#xBB34;&#xC2EC; DHP &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xCC44;&#xB110; &#xB80C;&#xB354;&#xB9C1;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; L &#xD615; Ca2 + &#xC804;&#xB958; (ICa) myocytes 66 nM &#xBC0F; 250&#xC5D0; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xBE14;&#xB85D;&#xC758; ic50&#xC640; nisoldipine&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xC874; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC800;&#xD574;&#xB294; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBE44;&#xD2B8; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; nM. &#xBC18;&#xBA74;, ICa Adcav1.2dhpi&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xB9CC; 35 %500 nM nisoldipine&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC; 50 microM diltiazem&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xCC28;&#xB2E8;. &#xACA9;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; Cav1.2dhpi&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; myocytes Adcav1.2dhpi&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; nisoldipine&#xC640; incubated &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xD070; ICa &#xD45C;&#xD604; (12 pA/pF) &#xD544;&#xB4DC; &#xC790;&#xADF9; &#xC911; Ca2 + &#xACFC;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, 2 microM forskolin&#xACFC; 100 microM 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX)&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; Adcav1.2dhpi&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; IBa &#xC99D;&#xAC00;. C d 2&#xB97C; +-&#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; Iba&#xB294; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xAC8C;&#xC7AC; Adcav1.2dhpi&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xAE30;&#xB85D; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Cav1.2dhpi&#xC758; &#xC2DD; &#xC2EC;&#xC7A5; myocyte &#xBC0F; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Adenoviral &#xC911;&#xC7AC; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes &#xBC0F; &#xAC8C;&#xC7AC; dihydropyridine&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; L-&#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;.

Cardiacos dependientes del voltaje canales de Ca2 + regular la concentraci&#xF3;n de Ca2 + intracelular y por lo tanto esencial para la contracci&#xF3;n muscular, la activaci&#xF3;n del segundo mensajero, la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica y se&#xF1;alizaci&#xF3;n el&#xE9;ctrica. Como un primer paso en el acceso a las propiedades estructurales contra funcionales del tipo L de Ca2 + del canal en el coraz&#xF3;n, hemos expresado una dihidropiridina (DHP) y min&#xFA;sculas Cav1.2 canal en los miocitos ventriculares de rata y los fibroblastos. Tras el aislamiento y la cultura, las c&#xE9;lulas fueron infectadas con adenovirus, ya sea expresando LacZ o un mutante Cav1.2 canal (CaV1.2DHPi) que contiene la doble mutaci&#xF3;n (T1039Y y Q1043M). Esta mutaci&#xF3;n hace que el canal insensible a DHP compuestos neutros tales como nisoldipina. La c&#xE9;lula entera, L-Ca2 + tipo corriente (ICa) medido en los miocitos de control se inhibi&#xF3; de una manera dependiente de la concentraci&#xF3;n por nisoldipina con un IC50 de 66 nM y el bloque completo a 250 nm. En contraste, ICA en c&#xE9;lulas infectadas con AdCaV1.2DHPi fue inhibida por s&#xF3;lo el 35% por 500 nM nisoldipina pero completamente bloqueada por 50 microM diltiazem. Con el fin de estudiar CaV1.2DHPi en forma aislada, miocitos infectados con AdCaV1.2DHPi se incubaron con nisoldipino. En estas condiciones las c&#xE9;lulas expresan un gran Ica (12 pA / pF) y se muestran los transitorios de Ca2 + durante la estimulaci&#xF3;n de campo. Adem&#xE1;s, la adici&#xF3;n de 2 microM forskolina y 100 microM 3-isobutil-1-metilxantina (IBMX), para estimular la prote&#xED;na quinasa A IBA, un fuerte incremento en las c&#xE9;lulas infectadas por AdCaV1.2DHPi. Un Cd2 + sensible IBA se registr&#xF3; tambi&#xE9;n en los fibroblastos card&#xED;acos infectados con AdCaV1.2DHPi. Por lo tanto, la expresi&#xF3;n de CaV1.2DHPi ser&#xE1; una herramienta importante en los estudios de los miocitos card&#xED;acos y la funci&#xF3;n de los fibroblastos.

Mediada por adenovirus Expresi&#xF3;n de Dihidropiridina insensibles a los canales de calcio tipo L en los miocitos ventriculares card&#xED;acos y fibroblastos

&#x5FC3;&#x810F;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8C03;&#x8282;&#x5FC3;&#x808C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x673A;&#x7535;&#x3001; &#x5316;&#x5DE5;&#x3001; &#x4E92;&#x52A8;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x786E;&#x5B9A;&#x548C;&#x8FA8;&#x522B;&#x65B0;&#x751F;&#x5927;&#x9F20;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7; K(+) (Kv) &#x6E20;&#x9053;&#x3002;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5B89;&#x6392;&#x7684;&#x819C;&#x7247;&#x94B3;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#xFF0C;&#x4E09;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x6027;&#x3001; &#x5916;&#x5411; K(+) &#x7535;&#x6D41;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E2D;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x793A;&#x5F53;&#x524D;&#x77AC;&#x53D8;&#x5916;&#x5411; K(+) (I(to)) &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6F5C;&#x80FD;&#x79EF;&#x6781;&#x5230;-40 &#x5728; mV &#x548C;&#x90E8;&#x5206;&#x706D;&#x6D3B;&#x671F;&#x95F4;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x7535;&#x538B;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;I(to) &#x6291;&#x5236;&#x6297;&#x5FC3;&#x5F8B;&#x5931;&#x5E38;&#x7684;&#x4EE3;&#x7406; flecainide &#xFF08;100 microM&#xFF09; &#x548C; BaCl(2) &#xFF08;1 &#x6BEB;&#x7C73;&#xFF09; &#x4F46;&#x4E0D;&#x53D7; 4-&#x6C28;&#x57FA;&#x5421;&#x5576; &#xFF08;4 AP &#xFF1B; 0.5 &#x548C; 1 &#x6BEB;&#x7C73;&#xFF09;&#x3002;&#x6570;&#x91CF;&#x8F83;&#x5C11;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E0D;&#x540C;&#xFF0C;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x6574;&#x6D41; K(+) &#x7535;&#x6D41; [I(K) &#x5FEB;&#x901F; &#xFF08;I(Kf)) &#x548C; I(K) &#x6162; (I(Ks))] &#x5F3A;&#x70C8;&#x53D7;&#x963B; 4 AP.&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4F5B;&#x6CE2; 12-&#x8089;&#x8C46;&#x853B;&#x9178;&#x916F; 13-&#x4E59;&#x9178;&#x916F;&#xFF0C;&#x523A;&#x6FC0;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C (PKC)&#x3001; &#x6291;&#x5236; I(to)&#xFF0C;&#x4F46;&#x5BF9; I(Kf) &#x548C; I(Ks) &#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x5206;&#x6790;&#x53D1;&#x73B0; Kv1.4&#x3001; Kv1.2&#x3001; Kv1.5&#x3001; Kv2.1 &#x7684; &alpha;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; Kv4.2 &#x6216; Kv1.6 &alpha;-&#x4E9A;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x9884;&#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x5E26; 4 AP &#x6291;&#x5236;&#x8840;&#x7BA1;&#x7D27;&#x5F20;&#x7D20; II &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7ECF;&#x52A8;&#x5458;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x5FC3;&#x810F;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; Kv &#x6E20;&#x9053;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x7684;&#x7535;&#x6C14;/&#x5316;&#x5B66;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

&#x65B0;&#x751F;&#x5927;&#x9F20;&#x5FC3;&#x810F;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7; K + &#x901A;&#x9053;&#xFF1A; &#x6682;&#x6001;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C.&#x7531;&#x5916;&#x5411;&#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;

Cardiac fibroblasts regulate myocardial development via mechanical, chemical, and electrical interactions with associated cardiomyocytes. The goal of this study was to identify and characterize voltage-gated K(+) (Kv) channels in neonatal rat ventricular fibroblasts. With the use of the whole cell arrangement of the patch-clamp technique, three types of voltage-gated, outward K(+) currents were measured in the cultured fibroblasts. The majority of cells expressed a transient outward K(+) current (I(to)) that activated at potentials positive to -40 mV and partially inactivated during depolarizing voltage steps. I(to) was inhibited by the antiarrhythmic agent flecainide (100 microM) and BaCl(2) (1 mM) but was unaffected by 4-aminopyridine (4-AP; 0.5 and 1 mM). A smaller number of cells expressed one of two types of kinetically distinct, delayed-rectifier K(+) currents [I(K) fast (I(Kf)) and I(K) slow (I(Ks))] that were strongly blocked by 4-AP. Application of phorbol 12-myristate 13-acetate, to stimulate protein kinase C (PKC), inhibited I(to) but had no effect on I(Kf) and I(Ks). Immunoblot analysis revealed the presence of Kv1.4, Kv1.2, Kv1.5, and Kv2.1 alpha-subunits but not Kv4.2 or Kv1.6 alpha-subunits in the fibroblasts. Finally, pretreatment of the cells with 4-AP inhibited angiotensin II-induced intracellular Ca(2+) mobilization. Thus neonatal cardiac fibroblasts express at least three different Kv channels that may contribute to electrical/chemical signaling in these cells.

Neonatal rat cardiac fibroblasts express three types of voltage-gated K+ channels: regulation of a transient outward current by protein kinase C.

Fibroblastes cardiaques r&#xE9;guler le d&#xE9;veloppement du myocarde par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire m&#xE9;canique, chimique, et les interactions &#xE9;lectriques avec les cardiomyocytes associ&#xE9;s. Le but de cette &#xE9;tude &#xE9;tait d&#x26;#39;identifier et de caract&#xE9;riser voltage-d&#xE9;pendants K (+) (Kv) des canaux dans les fibroblastes n&#xE9;onatales ventriculaires de rats. Avec l&#x26;#39;utilisation de l&#x26;#39;agencement de cellules enti&#xE8;res de la technique du patch-clamp, trois types de courants voltage-d&#xE9;pendant, K vers l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur (+) ont &#xE9;t&#xE9; mesur&#xE9;es dans les fibroblastes en culture. La majorit&#xE9; des cellules expriment un K sortant transitoire (+) courant (I (&#xE0;)) qui a activ&#xE9; &#xE0; des potentiels positifs &#xE0; -40 mV et partiellement inactiv&#xE9;e au cours de d&#xE9;polarisation des &#xE9;chelons de tension. I () a &#xE9;t&#xE9; inhib&#xE9;e par le fl&#xE9;ca&#xEF;nide antiarythmique (100 microM) et BaCl (2) (1 mM), mais n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; affect&#xE9;e par la 4-aminopyridine (4-AP; 0,5 et 1 mM). Un plus petit nombre de cellules a exprim&#xE9; l&#x26;#39;un des deux types de cin&#xE9;tiquement distinctes, retard&#xE9;e redresseur K (+) courants [I (K) rapide (I (Kf)) et I (K) lent (I (Ks))] qui ont &#xE9;t&#xE9; fortement bloqu&#xE9; par la 4-AP. Application de phorbol 12-myristate 13-ac&#xE9;tate, de stimuler la prot&#xE9;ine kinase C (PKC), a inhib&#xE9; les I (&#xE0;), mais n&#x26;#39;a eu aucun effet sur I (Kf) et I (Ks). Analyse immunoblot a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; la pr&#xE9;sence de Kv1.4, Kv1.2, Kv1.5, et Kv2.1 sous-unit&#xE9;s alpha, mais pas Kv4.2 ou Kv1.6 sous-unit&#xE9;s alpha dans les fibroblastes. Enfin, le pr&#xE9;traitement des cellules avec la 4-AP inhib&#xE9; l&#x26;#39;angiotensine II induite par le Ca (2 +) la mobilisation. Ainsi fibroblastes cardiaques n&#xE9;onatales expriment au moins trois canaux Kv diff&#xE9;rents qui peuvent contribuer &#xE0; &#xE9;lectrique / signalisation chimique dans ces cellules.

Fibroblastes cardiaques de rats n&#xE9;onatals exprimer trois types de voltage-d&#xE9;pendants canaux K +: R&#xE8;glement d&#x26;#39;un courant transitoire sortant par la prot&#xE9;ine kinase C

Kardiale Fibroblasten Regeln myokardiale Entwicklung &uuml;ber mechanische, chemische und elektrische Wechselwirkungen mit zugeordneten Cardiomyocytes. Das Ziel dieser Studie war zu identifizieren und Spannung-Gating K(+) (Kv) Kan&auml;le in neonatalen Ratte ventrikul&auml;re Fibroblasten zu charakterisieren. Mit dem Einsatz der gesamten Zelle Anordnung der die Patch-Clamp-Technik wurden drei Arten von Spannung-Gating, nach au&szlig;en K(+) Str&ouml;mungen in der kultivierten Fibroblasten gemessen. Die meisten Zellen ausgedr&uuml;ckt eine vor&uuml;bergehende &auml;u&szlig;erliche K(+) aktuelle (I(to)), die bei Potenziale von-40 positive aktiviert mV und teilweise inaktivierte w&auml;hrend depolarisierende Spannung Schritte. I(to) wurde durch die arrhythmischen Agent Flecainid (100 MicroM) gehemmt und BaCl(2) (1 mM), wurde aber von 4-Pyridinamin unber&uuml;hrt (4-AP; 0,5 und 1 mM). Eine kleinere Anzahl von Zellen ausgedr&uuml;ckt eine der zwei Arten von kinetisch getrennte, verz&ouml;gert-Gleichrichter K(+) Str&ouml;mungen [I(K) schnell (I(Kf)) und I(K) (I(Ks)) langsam], die 4-AP. Anwendung der Phorbol 12-Isopropylmyristat 13-Acetat, Proteinkinase C (PKC) stimulieren stark geblockt wurden, I(to) gehemmt, aber hatte keine Auswirkungen auf I(Kf) und I(Ks). Immunoblot Analyse ergab das Vorhandensein von Kv1.4, Kv1.2, Kv1.5 und Kv2.1 Alpha-Untereinheiten aber nicht Kv4.2 oder Kv1.6 Alpha-Untereinheiten in den Fibroblasten. Schlie&szlig;lich Vorbehandlung der Zellen mit 4-AP gehemmt Angiotensin II-induzierte intrazellul&auml;re Ca(2+) Mobilisierung. So dr&uuml;cken die neonatale kardiale Fibroblasten mindestens drei verschiedenen Kv-Kan&auml;le, die zu Elektrische/chemische Signale in diesen Zellen beitragen k&ouml;nnen.

Neonatalen Ratte kardialen Fibroblasten schnelles drei Arten von Spannung-Gating K + Kan&auml;le: Verordnung &uuml;ber eine vor&uuml;bergehende nach au&szlig;en laufenden durch Proteinkinase C.

Fibroblasti cardiaci regolano lo sviluppo del miocardio tramite interazioni meccaniche, chimiche ed elettriche con cardiomyocytes associato. L&#39;obiettivo di questo studio era di identificare e caratterizzare la tensione-gated canali K(+) (Kv) nei fibroblasti ventricolare neonatali del ratto. Con l&#39;uso della disposizione intera cellula della tecnica patch-clamp, tre tipi di correnti K(+) tensione-gated, verso l&#39;esterno sono stati misurati in colture di fibroblasti. La maggior parte delle cellule ha espresso un transitorio verso l&#39;esterno K(+) corrente (I(to)) che attivano a potenziali positivi di -40 mV e parzialmente inattivato durante depolarizzante passaggi di tensione. I(to) &egrave; stato inibito dall&#39;agente antiaritmico flecainide (100 microM) e BaCl(2) (1 mM) ma &egrave; stato influenzato da 4-aminopiridina (4-AP; 0,5 e 1 mM). Un numero minore di cellule espresso uno dei due tipi di cineticamente distinti, in ritardo-raddrizzatore K(+) correnti [I(K) veloce (I(Kf)) e I(K) lento (I(Ks))] che erano fortemente bloccate da appart. 4-applicazione del forbolo miristato 12 13-acetato, per stimolare la protein chinasi C (PKC), inibiscono I(to) ma ha avuto alcun effetto sulla I(Kf) e I(Ks). Immunoblot analisi hanno rivelato la presenza della subunit&agrave; alfa Kv1.4, Kv1.2, Kv1.5 e Kv2.1 ma non Kv4.2 o Kv1.6 alfa subunit&agrave; nei fibroblasti. Infine, il pretrattamento delle cellule con mobilizzazione 4-AP inibito angiotensina II-indotta intracellulare Ca(2+). Cos&igrave; neonatali fibroblasti cardiaci esprimono almeno tre differenti canali Kv che possono contribuire a elettrico/chimico di segnalazione in queste cellule.

Fibroblasti cardiaci neonatali del ratto esprimono tre tipi di canali K + voltaggio-dipendenti: regolamento di un transitorio di corrente verso l&#39;esterno dalla proteina chinasi C.

&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;K&#xFF08;+&#xFF09;&#xFF08;KV&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x6CD5;&#x306E;&#x30DB;&#x30FC;&#x30EB;&#x30BB;&#x30EB;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3001;&#x5916;&#x5411;&#x304D;K&#xFF08;+&#xFF09;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;3&#x7A2E;&#x985E;&#x304C;&#x57F9;&#x990A;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x5916;&#x5411;&#x304D;K&#xFF08;+&#xFF09;&#x96FB;&#x6D41;&#xFF08;I&#xFF08;&#x3078;&#xFF09;&#xFF09;&#x306F;-40 mV&#x306B;&#x6B63;&#x306E;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3067;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x96FB;&#x5727;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x6642;&#x306B;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3002;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x79C1;&#x306F;&#xFF08;&#x306B;&#xFF09;&#x6297;&#x4E0D;&#x6574;&#x8108;&#x85AC;&#x30D5;&#x30EC;&#x30AB;&#x30A4;&#x30CB;&#x30C9;&#xFF08;100&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xFF09;&#x3068;BaCl&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF08;1 mm&#xFF09;&#x3067;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;4  - &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#xFF08;4-AP&#x3001;0.5&#x304A;&#x3088;&#x3073;1 mM&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3001;&#x9045;&#x5EF6;&#x6574;&#x6D41;K&#xFF08;+&#xFF09;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;[&#x9045;&#x3044;I&#xFF08;K&#xFF09;&#x9AD8;&#x901F;&#xFF08;I&#xFF08;KF&#xFF09;&#xFF09;&#x3068;I&#xFF08;K&#xFF09;&#xFF08;I&#xFF08;KS&#xFF09;&#xFF09;]&#x3092;&#x5F37;&#x304F;&#x3057;&#x305F;4-AP&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30FC;&#x30EB;12  - &#x30DF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30C8;13  - &#x30A2;&#x30BB;&#x30C6;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#xFF08;PKC&#xFF09;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x79C1;&#x3092;&#xFF08;&#x306B;&#xFF09;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x79C1;&#x306F;&#xFF08;KF&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;I&#xFF08;KS&#xFF09;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;Kv1.4&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306F;&#x3001;Kv1.2&#x3001;Kv1.5&#x3001;Kv2.1&#x3068;&#x3B1;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;Kv4.2&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Kv1.6&#x306E;&#x3B1;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;4-AP&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B8;&#x30AA;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;II&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x52D5;&#x54E1;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;/&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x306A;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x4E09;&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x305F;Kv&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x5916;&#x5411;&#x304D;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#xFF1A;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x81D3;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;K +&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;3&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;

&#xC2EC;&#xC7A5; &#xAC8C;&#xC7AC; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; cardiomyocytes&#xC640; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xD654;&#xD559;&#xACFC; &#xC804;&#xAE30; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2EC;&#xADFC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xADDC;&#xC81C;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC950; &#xC2EC; &#xC2E4; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; K(+) (Kv) &#xCC44;&#xB110; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xBC30;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xC6A9; K(+) &#xC804;&#xB958; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0;, &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE21;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xB2E4;&#xC218;&#xC758; &#xC140; &#xD45C;&#xD604; &#xD604;&#xC7AC; &#xACFC;&#xB3C4; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; K(+) (I(to))-40 &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Mv&#xC640; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4E4;&#xBA74;&#xC11C; &#xC804;&#xC555; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0AC;. I(to)&#xB294; antiarrhythmic &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; flecainide (100 microM)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xBC0F; BaCl(2) (1mm) &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; 4-aminopyridine&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; (4 AP; 0.5 &#xBC0F; 1 m m). &#xC140; &#xC218;&#xAC00; &#xD45C;&#xD604; &#xC9C0; &#xBCC4;&#xAC1C;, &#xC9C0;&#xC5F0; &#xC815;&#xB958;&#xAE30; K(+) &#xC804;&#xB958; [I(K) &#xACE0;&#xC18D; (I(Kf)) &#xBC0F; I(K) (I(Ks)) &#xCC9C;&#xCC9C;&#xD788;] &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C (PKC)&#xB97C; phorbol 12-myristate 13-&#xCD08; &#xC0B0;&#xC758; 4 AP. &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB41C;, I(to) &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; i(kf)&#xC640; i(ks)&#xC5D0; &#xC544;&#xBB34;&#xB7F0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4; &#xB450; &#xC885;&#xB958; &#xC911; &#xD558;&#xB098;. Immunoblot &#xBD84;&#xC11D; Kv1.4, Kv1.2, Kv1.5, &#xBC0F; Kv2.1 &#xC54C;&#xD30C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC18C; &#xD558;&#xC9C0; Kv4.2 &#xB610;&#xB294; Kv1.6 &#xC54C;&#xD30C;-&#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xAC8C;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, 4-AP &#xC800;&#xD574; angiotensin II &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xB3D9;&#xC6D0; &#xB41C; &#xC140;&#xC758; &#xC804;&#xCC98;&#xB9AC;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xAC8C;&#xC7AC; &#xC804;&#xAE30;/&#xD654;&#xD559;&#xC774;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; k v &#xCC44;&#xB110; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4;.

&#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC950; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xAC8C;&#xC7AC; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; K + &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC720;&#xD615;: &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; c.&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD604;&#xC7AC; &#xACFC;&#xB3C4;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;

Fibroblastos cardiacos regular el desarrollo del miocardio a trav&#xE9;s de medios mec&#xE1;nicos, qu&#xED;micos, el&#xE9;ctricos y de las interacciones con los cardiomiocitos asociados. El objetivo de este estudio fue identificar y caracterizar por voltaje K (+) (Kv) canales en fibroblastos de ratas neonatales ventriculares. Con el uso de la disposici&#xF3;n de c&#xE9;lulas enteras de la t&#xE9;cnica de parche-abrazadera, tres tipos de corrientes voltaje, K hacia el exterior (+) se midieron en los fibroblastos cultivados. La mayor&#xED;a de las c&#xE9;lulas expresan un K transitoria hacia el exterior (+) actual (I (a)) que activan a potenciales positivos a -40 mV y parcialmente inactivada durante la despolarizaci&#xF3;n escalones de tensi&#xF3;n. I (a) fue inhibida por la flecainida agente antiarr&#xED;tmico (100 microM) y BaCl (2) (1 mM), pero no se vio afectada por 4-aminopiridina (4-AP; 0,5 mM y 1). Un n&#xFA;mero menor de c&#xE9;lulas expres&#xF3; uno de los dos tipos de cin&#xE9;tica distinta, retardada rectificador de K (+) las corrientes [I (K) r&#xE1;pido (I (Kf)) y (K) lento (I (K))] que fueron fuertemente bloqueada por 4-AP. Aplicaci&#xF3;n de forbol 12-miristato 13-acetato, para estimular la prote&#xED;na quinasa C (PKC), inhibi&#xF3; I (a), pero no tuvo ning&#xFA;n efecto sobre I (KF) y I (Ks). El an&#xE1;lisis por inmunotransferencia revel&#xF3; la presencia de Kv1.4, Kv1.2, Kv1.5, Kv2.1 y subunidades alfa pero no Kv4.2 o Kv1.6 subunidades alfa en los fibroblastos. Finalmente, el pretratamiento de las c&#xE9;lulas con 4-AP inhibi&#xF3; la angiotensina II inducida intracelular de Ca (2 +) movilizaci&#xF3;n. As&#xED;, los fibroblastos card&#xED;acos neonatales expresar al menos tres canales Kv diferentes que pueden contribuir a el&#xE9;ctrico / se&#xF1;alizaci&#xF3;n qu&#xED;mica de estas c&#xE9;lulas.

Los fibroblastos cardiacos neonatales de rata expresan tres tipos de voltaje-gated canales de K +: Regulaci&#xF3;n de la corriente transitoria de salida por la prote&#xED;na quinasa C

G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53; (GPCRs) &#x8868;&#x793A;&#x6700;&#x5927;&#x7684;&#x8DE8;&#x819C;&#x53D7;&#x4F53;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x3002;&#x8BB8;&#x591A;&#x8FD9;&#x4E9B; GPCRs &#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x91CF; 3&#39;&#xFF0C;5&#39;-&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7; &#xFF08;cAMP&#xFF09; &#x4F20;&#x8FBE;&#x4E86;&#x5176;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5FC3;&#x8868;&#x793A;&#x8D85;&#x8FC7; 100 GPCRs&#xFF0C;&#x7EA6;&#x6709;&#x4E09;&#x5206;&#x4E4B;&#x4E00;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B; GPCRs &#x4E3A;&#x836F;&#x7269;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x5C1A;&#x672A;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x9879;&#x76EE;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x542F;&#x52A8;&#x76D1;&#x6D4B;&#x8425;&#x5FC3;&#x5728;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x7B5B;&#x9009;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x65B0;&#x751F;&#x5927;&#x9F20;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x5B64;&#x7ACB;&#x548C;&#x57F9;&#x517B;&#x4E0A;&#x6298;&#x5C04;&#x7387; (&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7247;&#x94B3;&#x8BB0;&#x5F55;&#xFF09; &#x6216; 96 &#x4E95;&#x677F; (&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x677F;&#x8BFB;&#x5361;&#x5668;&#x6D4B;&#x91CF;&#xFF09;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x611F;&#x67D3;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2; &beta;-&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x82F7;&#x9176; (AdLacZ) &#x6216;&#x7A81;&#x53D8;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x95E8;&#x63A7; (CNG) &#x901A;&#x9053;&#x5305;&#x542B;&#x53CC;&#x7A81;&#x53D8; C460W/E583M (AdCNG)&#x3002;2 MicroM &#x773C;&#x538B;&#x5347;&#x9AD8;&#x548C;&#x9EC4;&#x560C;&#x5464; 100 microM 3-&#x5F02;&#x4E01;&#x57FA;-1-&#x7532;&#x57FA;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x8425;&#x5730;&#xFF0C;&#x53E6;&#x5916;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5F53;&#x524D; AdCNG &#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x3002;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8367;&#x5149; Ca &#x6307;&#x793A;&#x5668;&#x8367;&#x5149; 4 &#x52A0;&#x8F7D;&#xFF0C;&#x773C;&#x538B;&#x5347;&#x9AD8;&#x3001; &#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x3001; &#x53BB;&#x7532;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x3001; &#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x5F02;&#x4E19;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x523A;&#x6FC0;&#x589E;&#x52A0; CNG &#x901A;&#x9053;&#x901A;&#x8FC7; Ca &#x6D8C;&#x5165;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6307;&#x793A;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;CNG &#x6E20;&#x9053;&#x968F;&#x65F6;&#x5728;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x793A;&#xFF0C;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x5229;&#x7528;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x7B5B;&#x9009;&#x5316;&#x9A8C;&#x7684;&#x80DE;&#x5185;&#x8425;&#x4E2D;&#x3002;

&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x76D1;&#x6D4B;&#x5FC3;&#x810F;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x8425;&#x5730;&#x6C34;&#x5E73;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

G-protein-coupled receptors (GPCRs) represent the largest family of transmembrane receptors involved in cell signal transduction. Many of these GPCRs convey their pharmacological actions by regulating intracellular levels of 3',5'-cyclic adenosine monophosphate (cAMP). Although the heart expresses more than 100 GPCRs, drug agonists for approximately one third of these GPCRs have not been identified. The goal of this project was to initiate the development of a high-throughput screening assay for monitoring cAMP in the heart. Neonatal rat cardiac ventricular myocytes were isolated and cultured on coverslips (whole-cell patch clamp recording) or in 96-well plates (fluorescent imaging plate reader measurements). Cells were infected with adenovirus expressing either beta-galactosidase (AdLacZ) or a mutant cyclic nucleotide-gated (CNG) channel containing the double mutation C460W/E583M (AdCNG). Addition of 2 microM forskolin along with 100 microM 3-isobutyl-1-methylxanthine, to increase intracellular cAMP, activated a cation current in myocytes infected with the AdCNG. In myocytes loaded with the fluorescent Ca indicator Fluo-4, stimulation with forskolin, epinephrine, norepinephrine, or the beta-adrenergic receptor agonist isoproterenol increased the fluorescent signal indicative of Ca influx through the CNG channel. In conclusion, CNG channels are readily expressed in cultured cardiac myocytes and may be utilized in high-throughput screening assays of intracellular cAMP.

Development of a high-throughput assay for monitoring cAMP levels in cardiac ventricular myocytes.

G-r&#xE9;cepteurs coupl&#xE9;s aux prot&#xE9;ines (RCPG) repr&#xE9;sentent la plus grande famille de r&#xE9;cepteurs transmembranaires impliqu&#xE9;es dans la transduction du signal cellulaire. Beaucoup de ces RCPG transmettre leurs actions pharmacologiques par la r&#xE9;gulation des niveaux intracellulaires de 3 &#x26;#39;, 5&#x26;#39;-ad&#xE9;nosine monophosphate cyclique (AMPc). Bien que le coeur exprime plus de 100 RCPG, les agonistes de m&#xE9;dicaments pour environ un tiers de ces RCPG n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s. L&#x26;#39;objectif de ce projet &#xE9;tait d&#x26;#39;initier le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;un test de criblage &#xE0; haut d&#xE9;bit pour l&#x26;#39;AMPc surveillance dans le c&#x153;ur. N&#xE9;onatales de rat myocytes ventriculaires cardiaques ont &#xE9;t&#xE9; isol&#xE9;es et cultiv&#xE9;es sur des lamelles (&#xE0; cellules enti&#xE8;res d&#x26;#39;enregistrement de patch-clamp) ou en plaques &#xE0; 96 puits (fluorescentes mesures d&#x26;#39;imagerie lecteur de plaque). Les cellules ont &#xE9;t&#xE9; infect&#xE9;es par l&#x26;#39;ad&#xE9;novirus exprimant la b&#xEA;ta-galactosidase (AdLacZ) ou un mutant de nucl&#xE9;otides cycliques-d&#xE9;pendants (GNC) canal contenant la C460W/E583M double mutation (AdCNG). Addition de 2 microM forskoline avec 100 microM 3-isobutyl-1-m&#xE9;thylxanthine, pour augmenter l&#x26;#39;AMPc intracellulaire, un cation de courant activ&#xE9; dans des myocytes infect&#xE9;es par le AdCNG. Dans les myocytes charg&#xE9;s de la stimulation fluorescente Ca indicateur Fluo-4, avec de la forskoline, adr&#xE9;naline, noradr&#xE9;naline, ou le b&#xEA;ta-adr&#xE9;nergique isoprot&#xE9;r&#xE9;nol agoniste du r&#xE9;cepteur a augment&#xE9; le signal fluorescent indicative de l&#x26;#39;influx Ca par la voie GNC. En conclusion, les canaux CNG sont facilement exprim&#xE9; dans les cultures de myocytes cardiaques et peut &#xEA;tre utilis&#xE9; dans des essais de criblage &#xE0; haut d&#xE9;bit de l&#x26;#39;AMPc intracellulaire.

D&#xE9;veloppement d&#x26;#39;un test &#xE0; haut d&#xE9;bit pour les taux d&#x26;#39;AMPc dans les myocytes ventriculaires de surveillance cardiaque

G-Protein-gekoppelte Rezeptoren (GPCRs) stellen die gr&ouml;&szlig;te Familie von Transmembran-Rezeptoren Signaltransduktion der Zelle beteiligt. Viele von diesen GPCRs vermitteln ihre pharmakologischen Ma&szlig;nahmen durch die Regelung des intrazellul&auml;ren Ebenen von 3&#39;, 5&#39;-zyklisches Adenosinmonophosphat (cAMP). Obwohl das Herz mehr als 100 GPCRs ausdr&uuml;ckt, Droge-Agonisten f&uuml;r etwa ein Drittel dieser GPCRs nicht wurden. Das Ziel dieses Projektes war die Entwicklung einer High-Throughput-Screening-Tests zur &Uuml;berwachung der Lager im Herzen zu initiieren. Neonatalen Ratte kardiale ventrikul&auml;re Myocytes waren isoliert und kultiviert auf Deckgl&auml;sern (ganze Zellen Patch Clamp Aufnahme) oder in 96-Well-Platten (Neon imaging Platte Leser Messungen). Zellen wurden mit Adenoviren auszudr&uuml;cken entweder Beta-Galaktosidase (AdLacZ) oder ein mutant zyklische Nukleotid-Gating (CNG) Kanal mit die doppelte Mutation C460W/E583M (AdCNG) infiziert. Zusatz von 2 MicroM Forskolin zusammen mit 100 MicroM 3-Isobutyl-1-Methylxanthine, Steigerung der intrazellul&auml;ren cAMP, aktiviert eine kation aktuelle in Muskelzellen, die mit dem AdCNG infiziert. In Muskelzellen geladen mit fluoreszierenden Ca Indikator Fluo-4 erh&ouml;hte Stimulation mit Forskolin, Adrenalin, Noradrenalin oder die adrenergenen Rezeptor-Agonist-Isoproterenol das Fluoreszenzsignal Indikativ von Ca Zustrom durch die CNG-Kanal. Abschlie&szlig;end CNG-Kan&auml;le werden bereitwillig in kultivierten kardialen Myozyten ausgedr&uuml;ckt und in High-Throughput-Screening-Tests des intrazellul&auml;ren cAMP genutzt werden k&ouml;nnen.

Entwicklung eine Hochdurchsatz-Tests f&uuml;r die &Uuml;berwachung von cAMP Pegeln in kardiale ventrikul&auml;re Myocytes.

Recettori accoppiati a proteine G (GPCR) rappresentano la pi&ugrave; grande famiglia di recettori transmembrana coinvolti nella trasduzione dei segnali cellulari. Molti di questi GPCR trasmettere loro azioni farmacologiche regolando i livelli intracellulari di 3&#39;, 5&#39;-monofosfato di adenosina ciclico (cAMP). Anche se il cuore esprime pi&ugrave; di 100 GPCR, agonisti di droga per circa un terzo di questi GPCR non sono stati identificati. L&#39;obiettivo di questo progetto era di avviare lo sviluppo di un dosaggio di high-throughput screening per il monitoraggio di campo nel cuore. Miociti ventricolari cardiache neonatali del ratto sono state isolate e coltivate su vetrini coprioggetti (registrazione di cellule intere patch clamp) o in piastre da 96 pozzetti (imaging misurazioni lettore piastra fluorescente). Le cellule sono state infettate con adenovirus esprimendo la beta-galattosidasi (AdLacZ) o un mutante cyclic nucleotide-gated (CNG) canale contenente la mutazione doppia C460W/E583M (AdCNG). Aggiunta di 2 microM forskolina insieme a 100 microM 3-isobutil-1-methylxanthine, aumento di cAMP intracellulare, attivato un catione corrente in miociti infettati con il AdCNG. Nei miociti caricato con l&#39;indicatore di Ca fluorescente Fluo-4, stimolazione con forskolina, epinefrina, noradrenalina o le alterazioni recettore agonista isoproterenol aumentato l&#39;indicativo di segnale fluorescente di afflusso di Ca attraverso il canale CNG. In conclusione, canali CNG sono prontamente espresse nei miociti cardiaci colta e possono essere utilizzati in dosaggi di high-throughput screening di cAMP intracellulare.

Sviluppo di un dosaggio di alto-rendimento per il monitoraggio dei livelli di campi in miociti ventricolari cardiaci.

G-&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;GPCR&#xFF09;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;GPCR&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x3001;3 &#x26;#39;&#x3001;5&#x26;#39;-&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E00;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;cAMP&#xFF09;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4F1D;&#x3048;&#x308B;&#x3002;&#x5FC3;&#x81D3;&#x304C;100&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;GPCR&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;GPCR&#x306E;&#x7D04;3&#x5206;&#x306E;1&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;&#x5185;&#x306E;cAMP&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5358;&#x96E2;&#x3057;&#x3001;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#xFF08;&#x30DB;&#x30FC;&#x30EB;&#x30BB;&#x30EB;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x8A18;&#x9332;&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;96&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#xFF08;&#x86CD;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#xFF09;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x3B2;-&#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;AdLacZ&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;C460W/E583M&#xFF08;AdCNG&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#xFF08;CNG&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x611F;&#x67D3;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002; 100&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;3  - &#x30A4;&#x30BD;&#x30D6;&#x30C1;&#x30EB;-1  - &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;2&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;cAMP&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;AdCNG&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x6307;&#x6A19;&#x3067;&#x3042;&#x308B;Fluo-4&#x3001;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x3067;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x3001;&#x30A8;&#x30D4;&#x30CD;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x30CE;&#x30EB;&#x30A8;&#x30D4;&#x30CD;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3B2;-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30EC;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;CNG&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;Ca&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x86CD;&#x5149;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;CNG&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x57F9;&#x990A;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;cAMP&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;

&#x5FC3;&#x81D3;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;cAMP&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x958B;&#x767A;

G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GPCRs) &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD070; &#xAC00;&#xC871;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; Gpcrs&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC218;&#xC900;&#xC758; 3&#39;, 5&#39;-&#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; monophosphate (&#xCEA0;&#xD504;)&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC57D;&#xB9AC;&#xD559; &#xC801;&#xC778; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xC804;&#xB2EC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC74C; &#xD45C;&#xD604; 100 &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; GPCRs, &#xBE44;&#xB85D; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; Gpcrs&#xC758; &#xC57D; 3 &#xBD84;&#xC758; 1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; agonists &#xB9C8;&#xC57D; &#xD558;&#xC9C0; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC81D;&#xD2B8;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xC2EC;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCEA0;&#xD504;&#xB97C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC950; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes &#xACE0;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0;, 96-&#xC798; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; (&#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB9AC;&#xB354; &#xCE21;&#xC815;) &#xB610;&#xB294; coverslips (&#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xB179;&#xC74C;)&#xC5D0; &#xACBD;&#xC791;. &#xC140; &#xBCA0;&#xD0C0;-galactosidase (AdLacZ) &#xB610;&#xB294; &#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;-&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xAC1C;&#xD3D0; (CNG) &#xD1B5;&#xB85C; &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; C460W/E583M (AdCNG)&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 100 MicroM 3-isobutyl-1-methylxanthine, &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCEA0;&#xD504; &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xAED8; 2 microM forskolin&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xD604;&#xC7AC;&#xB294; Adcng&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. Myocytes &#xD615;&#xAD11; Ca &#xD45C;&#xC2DC;&#xAE30; Fluo-4&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xB85C;&#xB4DC;, forskolin, &#xD53C; &#xB124; &#xD504; &#xB9B0;, &#xB178;&#xB974;, &#xB610;&#xB294; beta-adrenergic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; isoproterenol &#xC790;&#xADF9; &#xD615;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638; &#xC9C0;&#xD45C; CNG &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Ca &#xC720;&#xC785;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, CNG &#xCC44;&#xB110; &#xC27D;&#xAC8C; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; &#xC2EC;&#xC7A5; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xB418; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCEA0;&#xD504;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC2A4;&#xB8E8;&#xD48B; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xD65C;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2EC;&#xC7A5; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xCEA0;&#xD504; &#xB808;&#xBCA8; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;.

G-receptores acoplados a prote&#xED;nas (GPCRs) constituyen la mayor familia de receptores transmembrana que participan en la transducci&#xF3;n de se&#xF1;al de celular. Muchos de estos GPCRs transmitir sus acciones farmacol&#xF3;gicas mediante la regulaci&#xF3;n de los niveles intracelulares de 3 &#x26;#39;, 5&#x26;#39;-monofosfato c&#xED;clico de adenosina (AMPc). Aunque el coraz&#xF3;n se expresa m&#xE1;s de 100 GPCRs, los agonistas de la droga de aproximadamente un tercio de estos GPCRs no han sido identificados. El objetivo de este proyecto era poner en marcha el desarrollo de un ensayo de cribado de alto rendimiento para la vigilancia de cAMP en el coraz&#xF3;n. Neonatales miocitos card&#xED;acos de ratas ventriculares se aislaron y cultivaron en cubreobjetos (c&#xE9;lulas enteras grabaci&#xF3;n patch clamp) o en placas de 96 pocillos (fluorescentes imagen mediciones lector de placas). Las c&#xE9;lulas fueron infectadas con adenovirus que manifieste su beta-galactosidasa (AdLacZ) o un mutante de nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos-cerrada (CNG) del canal que contiene el C460W/E583M doble mutaci&#xF3;n (AdCNG). La adici&#xF3;n de 2 microM forskolina junto con 100 microM 3-isobutil-1-metilxantina, para aumentar el AMPc intracelular, que se activa un cati&#xF3;n actual en miocitos infectados con el AdCNG. En los miocitos cargados con el fluorescente de la estimulaci&#xF3;n de Ca indicador de Fluo-4, con forskolina, epinefrina, norepinefrina, isoproterenol o el agonista beta-adren&#xE9;rgico aumentado la se&#xF1;al fluorescente indicativa de la afluencia de Ca a trav&#xE9;s del canal de GNC. En conclusi&#xF3;n, los canales de CNG se expresan f&#xE1;cilmente en cultivos de miocitos card&#xED;acos y puede ser utilizado en ensayos de selecci&#xF3;n de alto rendimiento de AMPc intracelular.

Desarrollo de un ensayo de alto rendimiento para los niveles de cAMP de vigilancia en los miocitos ventriculares card&#xED;acos

&#xFF08;I(K,Ach)) &#x8868;&#x793A;&#x836F;&#x7269;&#x6CBB;&#x7597;&#x5FC3;&#x623F;&#x98A4;&#x52A8; (&#x623F;&#x98A4;) &#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x9776;&#x70B9;&#x5FC3;&#x810F;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x6FC0;&#x6D3B; K(+) &#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x6B64;&#x901A;&#x9053;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x7684;&#x5185;&#x5411;&#x6574;&#x6D41; K(+) (GIRK) &#x901A;&#x9053;&#x8D85;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x5E76;&#x7531; GIRK1/4 &#xFF08;Kir3.1 &#x548C; Kir3.4&#xFF09; &#x4E9A;&#x57FA;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x5F00;&#x53D1;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x7B5B;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x5206;&#x6790;&#x67E5;&#x660E; GIRK1/4 &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x65B0;&#x53D7;&#x4F53;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x3002;&#x9F20;&#x6807;&#x5FC3;&#x623F; HL-1 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#xFF0C;&#x8868;&#x793A; GIRK1/4 &#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x88AB;&#x9540; 96 &#x4E95;&#x677F;&#x683C;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x6EE1;&#x8F7D;&#x8367;&#x5149;&#x819C;&#x7535;&#x4F4D;&#x654F;&#x611F;&#x67D3;&#x6599;&#x4E4B;&#x4E8C;-(1&#xFF0C;3-dibutylbarbituric acid) trimethine oxonol (DiBAC(4)(3)) &#x548C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x677F;&#x8BFB;&#x5361;&#x5668; &#xFF08;FLIPR&#xFF09;&#x3002;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x80C6;&#x78B1;&#x5BF9;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5E94;&#x7528;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x901A;&#x8FC7; GIRK1/4 &#x901A;&#x9053; K(+) &#x5C04;&#x6D41;&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x51CF;&#x5C11; (&#x80C6;&#x78B1;&#x4E0E;&#x63A7;&#x5236;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#xFF0C;Z&#39; &#x56E0;&#x5B50; = 0.5-0.6&#xFF09;&#x3002;GIRK1/4 &#x901A;&#x9053;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x662F; BaCl(2) &#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#xFF0C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x8DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x589E;&#x52A0; K(+) &#x7684;&#x9A71;&#x52A8;&#x529B;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7B5B;&#x9009; GIRK1/4 &#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x5230;&#x7684;&#x5F85;&#x9047;&#x4E0E;&#x5C0F;&#x590D;&#x5408;&#x56FE;&#x4E66;&#x9986;&#x7684; Na(+) &#x548C; K(+) &#x9891;&#x9053;&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#x3002;&#x963F;&#x7C73;&#x6D1B;&#x5229;&#x548C;&#x666E;&#x7F57;&#x5E15;&#x916E;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x88AB;&#x8BA4;&#x5B9A;&#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x5728;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5C0F;&#x4E8E; 1 &#x5FAE;&#x7C73;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;GIRK1/4 &#x901A;&#x9053;&#x68C0;&#x6D4B;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x65B0;&#x7684;&#x548C;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x4EE3;&#x7406;&#x5546;&#x6CBB;&#x7597;&#x623F;&#x98A4;&#x3002;

GIRK1/4 &#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x5B9E;&#x65F6;&#x7B5B;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

The cardiac acetylcholine-activated K(+) channel (I(K,Ach)) represents a novel target for drug therapy in the treatment of atrial fibrillation (AF). This channel is a member of the G-protein-coupled inward rectifier K(+) (GIRK) channel superfamily and is composed of the GIRK1/4 (Kir3.1 and Kir3.4) subunits. The goal of this study was to develop a cell-based screening assay for identifying new blockers of the GIRK1/4 channel. The mouse atrial HL-1 cell line, expressing the GIRK1/4 channel, was plated in 96-well plate format, loaded with the fluorescent membrane potential-sensitive dye bis-(1,3-dibutylbarbituric acid) trimethine oxonol (DiBAC(4)(3)) and measured using a fluorescent imaging plate reader (FLIPR). Application of the muscarinic agonist carbachol to the cells caused a rapid, time-dependent decrease in the fluorescent signal, indicative of K(+) efflux through the GIRK1/4 channel (carbachol vs. control solution, Z' factor = 0.5-0.6). The GIRK1/4 channel fluorescent signal was blocked by BaCl(2) and enhanced by increasing the driving force for K(+) across the cell membrane. To test the utility of the assay for screening GIRK1/4 channel blockers, cells were treated with a small compound library of Na(+) and K(+) channel modulators. Analogues of amiloride and propafenone were identified as channel blockers at concentrations less than 1 ÂµM. Thus, the GIRK1/4 channel assay may be used in the development of new and selective agents for treating AF.

A real-time screening assay for GIRK1/4 channel blockers.

Le cardiaque ac&#xE9;tylcholine activ&#xE9; K (+) canal (I (K, Ach)) repr&#xE9;sente une nouvelle cible pour la th&#xE9;rapie m&#xE9;dicamenteuse dans le traitement de la fibrillation auriculaire (FA). Cette cha&#xEE;ne est un membre de la prot&#xE9;ine G-K coupl&#xE9; int&#xE9;rieure redresseur (+) (Girk) superfamille canal et est compos&#xE9; des sous-unit&#xE9;s GIRK1 / 4 (Kir3.1 et Kir3.4). L&#x26;#39;objectif de cette &#xE9;tude &#xE9;tait de d&#xE9;velopper un test de d&#xE9;pistage bas&#xE9; sur des cellules pour identifier de nouveaux inhibiteurs de la voie GIRK1 / 4. La souris la ligne auriculaire HL-1 de cellules, exprimant le canal GIRK1 / 4, a &#xE9;t&#xE9; plaqu&#xE9; au format plaque de 96 puits, charg&#xE9; de la membrane fluorescente potentiel colorant sensible bis-(1,3-dibutylbarbituric acide) trim&#xE9;thine oxonol (DiBAC (4 ) (3)) et mesur&#xE9;es en utilisant un lecteur de fluorescence de plaque d&#x26;#39;imagerie (FLIPR). Application du carbachol agoniste muscarinique pour les cellules provoqu&#xE9;e une rapide, d&#xE9;pendant du temps diminution du signal fluorescent, l&#x26;#39;indicatif de K (+) &#xE0; travers le canal d&#x26;#39;efflux GIRK1 / 4 (vs carbachol solution de contr&#xF4;le, le facteur Z &#x26;#39;= 0,5-0,6) . Le signal GIRK1 / 4 canaux fluorescent a &#xE9;t&#xE9; bloqu&#xE9; par BaCl (2) et am&#xE9;lior&#xE9; en augmentant la force motrice pour K (+) &#xE0; travers la membrane cellulaire. Pour tester l&#x26;#39;utilit&#xE9; du test de criblage inhibiteurs des canaux GIRK1 / 4, les cellules ont &#xE9;t&#xE9; trait&#xE9;es avec une biblioth&#xE8;que de compos&#xE9;s modulateurs de canaux de petite Na (+) et K (+). Les analogues de l&#x26;#39;amiloride et la propaf&#xE9;none ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s comme les bloqueurs des canaux &#xE0; des concentrations inf&#xE9;rieures &#xE0; 1 uM. Ainsi, le dosage GIRK1 / 4 canaux peuvent &#xEA;tre utilis&#xE9;s dans le d&#xE9;veloppement de nouveaux agents et s&#xE9;lectif pour le traitement de la FA.

Un test de d&#xE9;pistage en temps r&#xE9;el pour Antagoniste GIRK1 / 4

Die kardiale Acetylcholin aktiviert K(+) Kanal (I(K,Ach)) stellt eine neuartige medikament&ouml;se Therapie in der Behandlung von Vorhofflimmern (AF). Dieser Kanal ist Mitglied der G-Protein-gekoppelter nach innen Gleichrichter K(+) (GIRK) Kanal &Uuml;berfamilie und besteht aus den Untereinheiten GIRK1/4 (Kir3.1 und Kir3.4). Das Ziel dieser Studie war eine zellbasierte Screening Assay zur Identifizierung von neuen Blocker des GIRK1/4 Kanal zu entwickeln. Die Maus Vorhofflimmern HL-1 Zelllinie, Ausdruck des GIRK1/4-Kanals, wurde plattiert in 96-Well-Plattenformat, geladen mit den fluoreszierenden Membrane Potential-empfindlichen Farbstoff BIZ-(1, 3-Dibutylbarbituric-S&auml;ure) Trimethine Oxonol (DiBAC(4)(3)) und gemessenen mit einer Leuchtstofflampe imaging Leseger&auml;t (FLIPR). Anwendung von der Muskarinischer Agonist-Carbachol zu den Zellen verursacht eine schnelle, zeitabh&auml;ngige Abnahme der das Fluoreszenzsignal, bezeichnend f&uuml;r K(+) Efflux durch den GIRK1/4-Kanal (Carbachol vs. Steuerungsl&ouml;sung, Z&#39; Faktor = 0.5-0.6). Die GIRK1/4-Kanal-Fluoreszenzsignal wurde durch BaCl(2) blockiert und durch die treibende Kraft f&uuml;r K(+) &uuml;ber der Zellmembran erh&ouml;hen verbessert. Um das Dienstprogramm des Tests f&uuml;r das screening von GIRK1/4-Kanal-Blocker zu testen, wurden Zellen mit einer kleinen zusammengesetzte Bibliothek von Na(+) und K(+) Kanal Modulatoren behandelt. Analoga von Amilorids und Propafenone wurden identifiziert, wie Kanal-Blocker bei Konzentrationen weniger als 1 &micro;M. So kann der GIRK1/4-Kanal-Assay in der Entwicklung von neuen und selektiven Agenten verwendet werden, zur Behandlung von AF.

Eine Echtzeit-Screening-Test zur GIRK1/4-Kanal-Blocker.

Il cardiaco canale K(+) attivato acetilcolina (I(K,Ach)) rappresenta un romanzo bersaglio per la terapia farmacologica nel trattamento della fibrillazione atriale (AF). Questo canale &egrave; un membro del raddrizzatore inward G-protein-coupled Superfamiglia canale K(+) (GIRK) ed &egrave; composto da una subunit&agrave; GIRK1/4 (Kir3.1 e Kir3.4). L&#39;obiettivo di questo studio era quello di sviluppare un test di screening basati su celle per identificare nuovi bloccanti del canale GIRK1/4. Il mouse atriale HL-1 linea cellulare, esprimendo il canale di GIRK1/4, &egrave; stata placcata in formato piastra 96 pozzetti, caricato con il potenziale sensibili colorante fluorescente membrana bis-(acido 1,3-dibutylbarbituric) trimethine oxonol (DiBAC(4)(3)) e misurato usando un fluorescente imaging lettore di piastra (FLIPR). Applicazione di Carbacolo l&#39;agonista muscarinico alle cellule ha causato una diminuzione rapida, tempo-dipendente del segnale fluorescente, indicativo di efflusso K(+) attraverso il canale di GIRK1/4 (Carbacolo vs. soluzione di controllo, Z&#39; fattore = 0,5-0,6). Il segnale fluorescente GIRK1/4 canali &egrave; stato bloccato da BaCl(2) e migliorato aumentando la forza trainante per K(+) attraverso la membrana cellulare. Per verificare l&#39;utilit&agrave; del test di screening bloccanti dei canali del GIRK1/4, le cellule sono state trattate con una piccola biblioteca composta di modulatori di canale Na(+) e K(+). Analoghi di amiloride e propafenone sono stati identificati come canale bloccanti a concentrazioni inferiore a 1 &micro;M. Cos&igrave;, il dosaggio di canale GIRK1/4 pu&ograve; essere utilizzato nello sviluppo di nuovi agenti selettivi per il trattamento AF.

Un test di screening in tempo reale per bloccanti dei canali del GIRK1/4.

&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;K&#xFF08;+&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;I&#xFF08;K&#x3001;ACH&#xFF09;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x623F;&#x7D30;&#x52D5;&#xFF08;AF&#xFF09;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x85AC;&#x7269;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;K&#xFF08;+&#xFF09;&#xFF08;GIRK&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;GIRK1 / 4&#xFF08;Kir3.1&#x3068;Kir3.4&#xFF09;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;GIRK1 / 4&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x85AC;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002; GIRK1 / 4&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5FC3;&#x623F;HL-1&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x819C;&#x96FB;&#x4F4D;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x8272;&#x7D20;&#x30D3;&#x30B9; - &#xFF08;1,3  -  dibutylbarbituric&#x9178;&#xFF09;&#x30C8;&#x30EA;&#x30E1;&#x30C1;&#x30F3;&#x30AA;&#x30AD;&#x30BD;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF08;DiBAC&#xFF08;4&#x3092;&#x642D;&#x8F09;&#x3057;&#x3001;96&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x64AD;&#x7A2E;&#x3057;&#x305F;&#xFF09;&#xFF08;3&#xFF09;&#xFF09;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#xFF08;FLIPR&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6027;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3001;GIRK1 / 4&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x5BFE;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#xB7;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;Z &#x26;#39;&#x56E0;&#x5B50;= 0.5&#x304B;&#x3089;0.6&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#xFF08;+&#xFF09;K&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6D41;&#x51FA;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002; GIRK1 / 4&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x86CD;&#x5149;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x304C;BaCl&#xFF08;2&#xFF09;&#x3067;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3092;&#x8D8A;&#x3048;&#x3066;K&#xFF08;+&#xFF09;&#x306E;&#x99C6;&#x52D5;&#x529B;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; GIRK1 / 4&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x906E;&#x65AD;&#x85AC;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;Na&#xFF08;+&#xFF09;&#x3068;K&#xFF08;+&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x5909;&#x8ABF;&#x5668;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x3067;&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CE;&#x30F3;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;1&#x3BC;m&#x672A;&#x6E80;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;GIRK1 / 4&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;AF&#x3092;&#x6CBB;&#x7642;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x9078;&#x629E;&#x5264;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

GIRK1 / 4&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x906E;&#x65AD;&#x85AC;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;

&#xC2EC;&#xC7A5; &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xD65C;&#xC131; K(+) &#xCC44;&#xB110; (I(K,Ach)) &#xC2EC; &#xBC29; &#xC138; &#xB3D9; (AF) &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D;&#xBB3C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xCC44;&#xB110; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC548;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958;&#xAE30; K(+) (GIRK) &#xCC44;&#xB110; superfamily&#xC758; &#xBA64;&#xBC84; &#xC774;&#xBA70; GIRK1/4 (Kir3.1 &#xBC0F; Kir3.4) &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; GIRK1/4 &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCC28;&#xB2E8;&#xAE30;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC140; &#xAE30;&#xBC18; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC2EC; HL-1 &#xC140; &#xB77C;&#xC778;, GIRK1/4 &#xCC44;&#xB110; &#xD45C;&#xD604; 96-&#xC798; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xD615;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD615;&#xAD11; &#xB9C9; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC5FC;&#xB8CC; bis-(1, 3-dibutylbarbituric &#xC0B0;) trimethine oxonol (Dibac(4)(3))&#xC640; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB9AC;&#xB354; (FLIPR)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE21;&#xC815; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB3C4;&#xAE08; &#xD588;&#xB2E4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140; muscarinic &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; carbachol&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xC778; GIRK1/4 &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; K(+) &#xACBD;&#xACFC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xD615;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xBE60;&#xB978; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC800;&#xD558; (carbachol &#xC81C;&#xC5B4; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;, Z &#xB300; &#39; &#xACC4;&#xC218; = 0.5-0.6). GIRK1/4 &#xCC44;&#xB110; &#xD615;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; Bacl(2)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; K(+)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD94;&#xC9C4;&#xB825;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xC5EC; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C;. GIRK1/4 &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C; &#xC0C1;&#xC601;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xB97C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC140; na(+)&#xC640; K(+) &#xCC44;&#xB110; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD588;&#xB2E4;. Analogues amiloride &#xBC0F; propafenone&#xC758; &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; 1 &micro; M&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, GIRK1/4 &#xCC44;&#xB110; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; AF &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC0F; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

GIRK1/4 &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;

La acetilcolina cardiaca activada por K (+) canal (I (K, Ach)) representa una nueva diana para la terapia farmacol&#xF3;gica en el tratamiento de la fibrilaci&#xF3;n auricular (FA). Este canal es un miembro de la prote&#xED;na G-acoplada hacia adentro K rectificador (+) (GIRK) superfamilia canal y se compone de las subunidades GIRK1 / 4 (Kir3.1 y Kir3.4). El objetivo de este estudio fue desarrollar un ensayo de cribado basado en c&#xE9;lulas para identificar nuevos bloqueadores del canal de GIRK1 / 4. El rat&#xF3;n auricular l&#xED;nea HL-1 de c&#xE9;lulas, que expresan el canal GIRK1 / 4, se sembr&#xF3; en formato de placa de 96 pocillos, cargado con la membrana fluorescente sensible al potencial colorante bis-(1,3-dibutylbarbituric &#xE1;cido) trimethine oxonol (DiBAC (4 ) (3)) y se mide utilizando un fluorescente im&#xE1;genes lector de placas (FLIPR). La aplicaci&#xF3;n del agonista muscar&#xED;nico carbacol a las c&#xE9;lulas causado una r&#xE1;pida, dependiente del tiempo disminuci&#xF3;n de la se&#xF1;al fluorescente, indicativa de K (+) a trav&#xE9;s del canal de flujo de salida GIRK1 / 4 (carbacol vs soluci&#xF3;n de control, el factor Z &#x26;#39;= 0,5 hasta 0.6) . La se&#xF1;al GIRK1 / 4 canal fluorescente fue bloqueado por BaCl (2) y mejora al aumentar la fuerza motriz para K (+) a trav&#xE9;s de la membrana celular. Para probar la utilidad del ensayo para la detecci&#xF3;n de GIRK1 / 4 bloqueadores de los canales, las c&#xE9;lulas fueron tratadas con un compuesto biblioteca peque&#xF1;a de moduladores de canales de Na (+) y K (+). Los an&#xE1;logos de amilorida y propafenona fueron identificados como bloqueadores de los canales en concentraciones de menos de 1 micra. Por lo tanto, el ensayo GIRK1 / 4 canal puede utilizarse en el desarrollo de nuevos agentes y selectivo para el tratamiento de la FA.

Un tiempo real de detecci&#xF3;n del ensayo de bloqueadores de canales GIRK1 / 4

G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x5185;&#x5411;&#x6574;&#x6D41; K(+) (GIRK) &#x6E20;&#x9053;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E86;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x65B0;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x65B0;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;GIRK &#x6E20;&#x9053;&#x6240;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5927;&#x91CF;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53; (GPCRs) &#x548C;&#x8C03;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; &beta; &#x80F0;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7535;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x795E;&#x7ECF;&#x75C5;&#x7406;&#x6027;&#x75BC;&#x75DB;&#x3001; &#x836F;&#x7269;&#x6210;&#x763E;&#x3001; &#x5FC3;&#x5F8B;&#x5931;&#x5E38;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x75C5;&#x7406;&#x751F;&#x7406;&#x6709;&#x7275;&#x8FDE; GIRK &#x901A;&#x9053;&#x529F;&#x80FD;&#x5F02;&#x5E38;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x4ECD;&#x7136;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x86EE;&#x8352;&#x4E4B;&#x5730;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x767D;&#x76AE;&#x4E66;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x7B5B;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x65B0;&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x5FC3;&#x810F; GIRK &#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x5782;&#x4F53; (AtT20) &#x548C;&#x8868;&#x793A; GIRK &#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x5FC3;&#x810F; (HL-1) &#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x57F9;&#x517B; 96 &#x4E95;&#x677F;&#xFF0C;oxonol &#x819C;&#x7535;&#x4F4D;&#x654F;&#x611F;&#x67D3;&#x6599;&#x4E0E;&#x52A0;&#x8F7D;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x677F;&#x8BFB;&#x5361;&#x5668;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; GPCRs &#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7; &#xFF1B; &#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x65F6;&#x95F4;&#x51CF;&#x5C11;&#x6307;&#x793A;&#x6027;&#x7684; K(+) &#x5C04;&#x6D41; GIRK &#x6E20;&#x9053; &#xFF08;&#x6C14;&#x76F8;&#x5316;&#x5B66;&#x8FD8;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#x4E0E;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;Z&#39;-&#x56E0;&#x5B50; = 0.5-0.7&#xFF09;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9884;&#x671F;&#x6B64;&#x4FE1;&#x53F7;&#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86; Ba(2+) &#x548C; GIRK &#x901A;&#x9053;&#x6BD2;&#x7D20; tertiapin-Q&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7B5B;&#x9009; GIRK &#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;5 &#x5206;&#x949F;&#x4E0E;&#x590D;&#x5408;&#x56FE;&#x4E66;&#x9986;&#x7684; Na(+) &#x548C; K(+) &#x9891;&#x9053;&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#x5B75;&#x5316;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x79BB;&#x5B50;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236;&#x5242; 5-(N,N-hexamethylene)-&#x963F;&#x7C73;&#x6D1B;&#x5229;&#x548C; SCH 28080 &#x7B49;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x53D7;&#x4F53;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x7684; sub micromolar &#x6D53;&#x5EA6; GIRK &#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x7B5B;&#x9009;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5C06;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x6269;&#x5927;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x836F;&#x7406;&#x5B66; GIRK &#x901A;&#x9053;&#x548C;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6; GIRK &#x75C5;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x65B0;&#x4EE3;&#x7406;&#x3002;

&#x9488;&#x5BF9; GIRK &#x6E20;&#x9053;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x65B0;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x5242;&#x3002;

G protein-coupled inward rectifier K(+) (GIRK) channels represent novel targets for the development of new therapeutic agents. GIRK channels are activated by a large number of G protein-coupled receptors (GPCRs) and regulate the electrical activity of neurons, cardiac myocytes, and Î²-pancreatic cells. Abnormalities in GIRK channel function have been implicated in the patho-physiology of neuropathic pain, drug addiction, cardiac arrhythmias, and other disorders. However, the pharmacology of these channels remains largely unexplored. In this paper we describe the development of a screening assay for identifying new modulators of neuronal and cardiac GIRK channels. Pituitary (AtT20) and cardiac (HL-1) cell lines expressing GIRK channels were cultured in 96-well plates, loaded with oxonol membrane potential-sensitive dyes and measured using a fluorescent imaging plate reader. Activation of the endogenous GPCRs in the cells caused a rapid, time-dependent decrease in the fluorescent signal; indicative of K(+) efflux through the GIRK channels (GPCR stimulation versus control, Z'-factorâ€‰=â€‰0.5-0.7). As expected this signal was inhibited by addition of Ba(2+) and the GIRK channel toxin tertiapin-Q. To test the utility of the assay for screening GIRK channel blockers, cells were incubated for 5â€‰min with a compound library of Na(+) and K(+) channel modulators. Ion transporter inhibitors such as 5-(N,N-hexamethylene)-amiloride and SCH-28080 were identified as blockers of the GIRK channel at sub-micromolar concentrations. Thus, the screening assay will be useful for expanding the limited pharmacology of the GIRK channel and in developing new agents for the treatment of GIRK channelopathies.

Targeting GIRK Channels for the Development of New Therapeutic Agents.

Coupl&#xE9; aux prot&#xE9;ines G vers l&#x26;#39;int&#xE9;rieur redresseur K (+) (Girk) canaux repr&#xE9;sentent de nouvelles cibles pour le d&#xE9;veloppement de nouveaux agents th&#xE9;rapeutiques. Canaux Girk sont activ&#xE9;s par un grand nombre de G r&#xE9;cepteurs coupl&#xE9;s aux prot&#xE9;ines (RCPG) et de r&#xE9;glementer l&#x26;#39;activit&#xE9; &#xE9;lectrique des neurones, les myocytes cardiaques, et &#x3B2;-pancr&#xE9;atiques des cellules. Des anomalies dans Girk canal de fonction ont &#xE9;t&#xE9; impliqu&#xE9;s dans la physiopathologie de la douleur neuropathique, la toxicomanie, les arythmies cardiaques, et d&#x26;#39;autres troubles. Toutefois, la pharmacologie de ces canaux reste largement inexplor&#xE9;. Dans cet article, nous d&#xE9;crivons le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;un test de d&#xE9;pistage pour identifier les nouveaux modulateurs de canaux Girk neuronales et cardiaques. Hypophysaire (AtT20) et cardiaque (HL-1) des lign&#xE9;es cellulaires exprimant les canaux Girk ont &#x200B;&#x200B;&#xE9;t&#xE9; cultiv&#xE9;es dans des plaques &#xE0; 96 puits, charg&#xE9; de oxonol potentiel de membrane des colorants sensibles et mesur&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;un lecteur de plaque d&#x26;#39;imagerie de fluorescence. Activation de l&#x26;#39;endog&#xE8;ne RCPG dans les cellules a provoqu&#xE9; une rapide, d&#xE9;pendant du temps diminution du signal fluorescent; indicatif de K (+) &#xE0; travers les canaux d&#x26;#39;efflux (Girk stimulation GPCR par rapport au contr&#xF4;le, Z&#x26;#39;-facteur = 0,5-0,7). Comme pr&#xE9;vu ce signal a &#xE9;t&#xE9; inhib&#xE9;e par l&#x26;#39;addition de Ba (2 +) et la toxine Girk canal tertiapin-Q. Pour tester l&#x26;#39;utilit&#xE9; du test de d&#xE9;pistage pour les bloqueurs de canaux Girk, les cellules ont &#xE9;t&#xE9; incub&#xE9;es pendant 5 min avec une biblioth&#xE8;que de compos&#xE9;s de modulateurs des canaux Na (+) et K (+). Inhibiteurs du transporteur d&#x26;#39;ions tels que le 5 - (N, N-hexam&#xE9;thyl&#xE8;ne) des amiloride et SCH-28080 ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s comme blocage de la cha&#xEE;ne &#xE0; Girk sous-micromolaire concentrations. Ainsi, le test de d&#xE9;pistage sera utile pour &#xE9;largir la pharmacologie limit&#xE9;e du canal Girk et dans le d&#xE9;veloppement de nouveaux agents pour le traitement des canalopathies Girk.

Ciblant les canaux Girk pour le d&#xE9;veloppement de nouveaux agents th&#xE9;rapeutiques

G-Protein-gekoppelter nach innen Gleichrichter K(+) (GIRK) Kan&auml;le stehen neue Ziele f&uuml;r die Entwicklung neuer Therapeutika. GIRK-Kan&auml;le sind durch eine gro&szlig;e Anzahl von G-Protein-gekoppelte Rezeptoren (GPCRs) aktiviert und die elektrische Aktivit&auml;t der Neuronen, kardiale Myozyten und &beta;-Pankreas-Zellen zu regulieren. Abweichungen in GIRK Kanal Funktion haben in der Patho-Physiologie der neuropathischen Schmerzen, Drogensucht, Herzrhythmusst&ouml;rungen und andere Erkrankungen verwickelt. Die Pharmakologie dieser Kan&auml;le bleibt jedoch weitgehend unerforscht. In diesem Artikel beschreiben wir die Entwicklung eines Screening-Tests f&uuml;r identifizieren neue Modulatoren der neuronalen und kardiale GIRK-Kan&auml;le. Hypophyse (AtT20) und kardiale (HL-1)-Zelllinien Ausdr&uuml;cken GIRK Kan&auml;le wurden in 96-Well Platten, geladen mit Oxonol Membrane Potential-empfindlichen Farbstoffen und mittels einer Leuchtstofflampe imaging Leseger&auml;t kultiviert. Aktivierung der endogenen GPCRs in den Zellen verursacht, die eine schnelle, zeitabh&auml;ngige Abnahme der das Fluoreszenzsignal. bezeichnend f&uuml;r K(+) Efflux durch die Kan&auml;le GIRK (GPCR Stimulierung gegen Kontrolle, Z&#39;-Faktor = 0.5-0.7). Erwartungsgem&auml;&szlig; wurde dieses Signal durch Zusatz von Ba(2+) und die GIRK Kanal Toxin Tertiapin-Q gehemmt. Um das Dienstprogramm des Tests f&uuml;r das screening von GIRK-Kanalblocker zu testen, wurden Zellen f&uuml;r 5 min mit einer zusammengesetzten Bibliothek von Na(+) und K(+) Kanal Modulatoren inkubiert. Ion-Transporter-Inhibitoren wie 5-(N,N-hexamethylene)-Amilorids und SCH-28080 wurden als Blocker des Kanals bei Sub-micromolar Konzentrationen GIRK identifiziert. Daher wird im Screening-Test f&uuml;r den Ausbau der begrenzten Pharmakologie der GIRK-Kanal und bei der Entwicklung neuer Wirkstoffe zur Behandlung von GIRK Channelopathies n&uuml;tzlich sein.

Targeting GIRK Kan&auml;le f&uuml;r die Entwicklung neuer Therapeutika.

G protein-coupled inward raddrizzatore K(+) (GIRK) canali rappresentano nuovi bersagli per lo sviluppo di nuovi agenti terapeutici. Canali GIRK sono attivati da un gran numero di recettori accoppiati a proteine G (GPCR) e regolano l&#39;attivit&agrave; elettrica dei neuroni, miociti cardiaci e cellule &beta;-pancreatiche. Anomalie in funzione dei canali GIRK sono stati implicati in patho-fisiologia del dolore neuropatico, tossicodipendenza, aritmie cardiache e altri disturbi. Tuttavia, la farmacologia di questi canali rimane in gran parte inesplorata. In questo documento descriviamo lo sviluppo di un test di screening per identificare nuovi modulatori dei canali GIRK neuronali e cardiaci. Ipofisi (AtT20) e cardiache (HL-1) linee di cellule che esprimono canali GIRK sono stati coltivati in piastre da 96 pozzetti, caricato con coloranti sensibili al potenziale della membrana di oxonol e misurato usando un fluorescente imaging lettore di piastra. Attivazione del GPCR endogeno nelle cellule ha causato una diminuzione rapida, tempo-dipendente del segnale fluorescente; indicativo di efflusso K(+) attraverso i canali GIRK (stimolazione GPCR versus controllo, Z&#39;-fattore = 0,5-0,7). Come previsto questo segnale &egrave; stato inibito tramite l&#39;aggiunta di Ba(2+) e il canale GIRK tossina tertiapin-Q. Per verificare l&#39;utilit&agrave; del test di screening bloccanti i canali GIRK, cellule sono state incubate per 5 min con una biblioteca composta di modulatori di canale Na(+) e K(+). Gli inibitori di trasportatore dello ione come 5-(N,N-hexamethylene)-amiloride e SCH-28080 furono identificati come bloccanti del canale GIRK a concentrazioni sub-micromolare. Cos&igrave;, il test di screening sar&agrave; utile per l&#39;espansione della farmacologia limitato del canale GIRK e nello sviluppo di nuovi agenti per il trattamento delle canalopatie GIRK.

Targeting canali GIRK per lo sviluppo di nuovi agenti terapeutici.

G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x578B;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;K&#xFF08;+&#xFF09;&#xFF08;GIRK&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x76EE;&#x6A19;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002; GIRK&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;GPCR&#xFF09;&#x306E;&#x591A;&#x6570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3001;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x3B2;-&#x81B5;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; GIRK&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x7570;&#x5E38;&#x304C;&#x795E;&#x7D4C;&#x56E0;&#x6027;&#x75BC;&#x75DB;&#x3001;&#x85AC;&#x7269;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x3001;&#x4E0D;&#x6574;&#x8108;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x75C5;&#x614B;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x672A;&#x8E0F;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x3084;&#x5FC3;&#x81D3;GIRK&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#xFF08;AtT20&#xFF09;&#x3068;&#x5FC3;&#x81D3;&#xFF08;HL-1&#xFF09;GIRK&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30AD;&#x30BD;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x819C;&#x96FB;&#x4F4D;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x8272;&#x7D20;&#x3092;&#x642D;&#x8F09;&#x3057;&#x3001;96&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; GIRK&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;GPCR&#x523A;&#x6FC0;&#x5BFE;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;Z &#x26;#39;&#x56E0;&#x5B50;= 0.5&#x304B;&#x3089;0.7&#xFF09;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;K&#xFF08;+&#xFF09;&#x306E;&#x6D41;&#x51FA;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;GPCR&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E88;&#x60F3;&#x901A;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x3001;BA&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3068;GIRK&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6BD2;&#x7D20;tertiapin-Q&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;GIRK&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x906E;&#x65AD;&#x85AC;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;Na&#xFF08;+&#xFF09;&#x3068;K&#xFF08;+&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x5909;&#x8ABF;&#x5668;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x3067;5&#x5206;&#x9593;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 5&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; - &#xFF08;N&#x3001;N-&#x30D8;&#x30AD;&#x30B5;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#xFF09;-&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x3068;SCH-28080&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30D6;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;GIRK&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;GIRK&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x3092;&#x62E1;&#x5927;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3068;GIRK&#x306E;channelopathies&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x85AC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x3067;&#x3042;&#x308D;&#x3046;&#x3002;

&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;GIRK&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;

G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC548;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958;&#xAE30; K(+) (GIRK) &#xCC44;&#xB110; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC81C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. GIRK &#xCC44;&#xB110; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GPCRs)&#xC758; &#xB2E4; &#xC218;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418; &#xACE0; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;, &#xC2EC;&#xC7A5; myocytes &#xBC0F; &beta;-&#xCDCC; &#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC804;&#xAE30;&#xC801; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C;. GIRK &#xCC44;&#xB110; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC774;&#xC0C1; patho-&#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559; neuropathic &#xACE0;&#xD1B5;, &#xB9C8;&#xC57D; &#xC911;&#xB3C5;, &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBD80;&#xC815;&#xB9E5;&#xACFC; &#xAE30;&#xD0C0; &#xC9C8;&#xD658;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC57D;&#xB9AC;&#xD559; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBBF8;&#xAC1C;&#xCC99; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB17C;&#xBB38;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBC0F; &#xC2EC;&#xC7A5; GIRK &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC124;&#xBA85;. &#xB1CC; &#xD558; &#xC218; &#xCCB4; (AtT20)&#xC640; &#xC2EC;&#xC7A5; (HL-1) &#xC140; &#xB77C;&#xC778; GIRK &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; 96-&#xC798; &#xBC88;&#xD638;&#xD310;, oxonol &#xB9C9; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC640; &#xB85C;&#xB4DC;&#xC640; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB9AC;&#xB354;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACBD;&#xC791; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC140;&#xC5D0; &#xC0DD; Gpcrs&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD615;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638;;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C;, &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAC10;&#xC18C; GIRK &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; K(+) &#xACBD;&#xACFC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; (&#xC81C;&#xC5B4;, Z &#xB300; GPCR &#xC790;&#xADF9; &#39;-&#xACC4;&#xC218; = 0.5-0.7). &#xC608;&#xC0C1; &#xB300;&#xB85C;&#xC774; &#xC2E0;&#xD638; ba(2+)&#xC640; GIRK &#xCC44;&#xB110; &#xB3C5; &#xC18C; tertiapin Q&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. GIRK &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C; &#xC0C1;&#xC601;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xB97C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC140; na(+)&#xC640; K(+) &#xCC44;&#xB110; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30;&#xC758; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC640; 5 &#xBD84; &#xB3D9;&#xC548; incubated &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC628; &#xC6B4;&#xC1A1;&#xC5C5; &#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; 5-(N,N-hexamethylene) amiloride SCH-28080 &#xB4F1; &#xD558;&#xC704; micromolar &#xB18D;&#xB3C4; GIRK &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB410;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC2EC;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xC57D;&#xB9AC;&#xD559; GIRK channelopathies&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; GIRK &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD655;&#xB300;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB420; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC81C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; GIRK &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Acoplados a prote&#xED;nas G K hacia el interior del rectificador (+) (GIRK) canales representan nuevas dianas para el desarrollo de nuevos agentes terap&#xE9;uticos. GIRK canales son activados por un gran n&#xFA;mero de G receptores acoplados a prote&#xED;nas (GPCRs) y regular la actividad el&#xE9;ctrica de las neuronas, miocitos card&#xED;acos y c&#xE9;lulas pancre&#xE1;ticas &#x3B2;-. Las anormalidades en la funci&#xF3;n del canal GIRK han sido implicados en la fisiopatolog&#xED;a del dolor neurop&#xE1;tico, la drogadicci&#xF3;n, arritmias card&#xED;acas y otros trastornos. Sin embargo, la farmacolog&#xED;a de estos canales sigue siendo en gran parte inexplorado. En este trabajo se describe el desarrollo de un ensayo de cribado para la identificaci&#xF3;n de nuevos moduladores de canales GIRK neuronales y cardiacas. Pituitaria (AtT20) y card&#xED;aca (HL-1) l&#xED;neas celulares que expresan canales GIRK se cultivaron en placas de 96 pocillos, cargado con oxonol membrana potencial tintes sensibles y midi&#xF3; utilizando un lector de im&#xE1;genes placa fluorescente. La activaci&#xF3;n de la end&#xF3;gena GPCRs en las c&#xE9;lulas causado una r&#xE1;pida, dependiente del tiempo disminuci&#xF3;n de la se&#xF1;al fluorescente; indicativa de K (+) a trav&#xE9;s de los canales de flujo de salida GIRK (estimulaci&#xF3;n GRCP frente a control, Z &#x26;#39;= factor 0,5-0,7). Como era de esperar esta se&#xF1;al se inhibi&#xF3; mediante la adici&#xF3;n de Ba (2 +) y la toxina GIRK canal tertiapin-Q. Para probar la utilidad del ensayo para los bloqueadores de los canales de detecci&#xF3;n GIRK, las c&#xE9;lulas se incubaron durante 5 min con una biblioteca de compuestos de moduladores de canales de Na (+) y K (+). Inhibidores de iones transportadores, tales como 5 - (N, N-hexametileno)-amilorida y SCH 28080-fueron identificados como bloqueadores del canal GIRK en sub-micromolar concentraciones. As&#xED;, el ensayo de selecci&#xF3;n ser&#xE1; &#xFA;til para la expansi&#xF3;n de la farmacolog&#xED;a limitada del canal GIRK y en el desarrollo de nuevos agentes para el tratamiento de canalopat&#xED;as GIRK.

Kenneth B. Walsh

Department of Pharmacology,
Physiology & Neuroscience,
Department of Pharmacology, Physiology & Neuroscience

University of South Carolina, School of Medicine

A Fluorescent Screening Assay for Identifying Modulators of GIRK Channels

Kenneth B. Walsh

Department of Pharmacology,Physiology & Neuroscience,Department of Pharmacology, Physiology & Neuroscience

University of South Carolina, School of Medicine

A Fluorescent Screening Assay for Identifying Modulators of GIRK Channels

Department of Pharmacology,
Physiology & Neuroscience,
Department of Pharmacology, Physiology & Neuroscience