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Combining QD-FRET and Microfluidics to Monitor DNA Nanocomplex Self-Assembly in Real-Time

Advances in genomics continue to fuel the development of therapeutics that can target pathogenesis at the cellular and molecular level. Typically ...

Duke University

Johns Hopkins University

&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x8005;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4F7F;&#x7528;&#x8D85;&#x58F0; &#xFF08;&#x6211;&#x4EEC;&#xFF09; &#x6765;&#x76D1;&#x89C6;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5BFC;&#x7BA1;&#x8840;&#x7BA1;&#x57FA;&#x56E0;&#x5FAE;&#x7403;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x53CC;&#x4E73;&#x5316;&#x6280;&#x672F;&#x6765;&#x5C01;&#x88C5; DNA &#x8D28;&#x7C92;&#x7F16;&#x7801;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x5199;&#x4E86;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x53EF;&#x751F;&#x7269;&#x964D;&#x89E3;&#x5FAE;&#x7403; &#xFF08;&#x5E73;&#x5747;&#x76F4;&#x5F84; 5 microm&#xFF09;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F20;&#x9012;&#x5BFC;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x5FAE;&#x7403;&#x88AB;&#x672C;&#x5730;&#x4F20;&#x9001;&#x5230;&#x5DE6;&#x80A1;&#x52A8;&#x8109;&#x58C1;&#x7684;&#x516D;&#x4E2A;&#x732A; &#xFF1B;&#x5BF9;&#x4FA7;&#x52A8;&#x8109;&#x4E0D;&#x4E0E;&#x5FAE;&#x7403;&#x6CE8;&#x5165;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x62C5;&#x4EFB;&#x8D1F;&#x63A7;&#x5236;&#x8239;&#x53EA;&#x3002;&#x4F20;&#x9012;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x8FDB;&#x884C;&#x76D1;&#x7763;&#x4E0E;&#x6362;&#x80FD;&#x5668;&#x7684;&#x9AD8;&#x9891; (8-15-MHz) &#x7F8E;&#x56FD;&#x3002;&#x7F8E;&#x56FD;&#x4E0E;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7684;&#x6548;&#x529B;&#x88AB;&#x76F8;&#x6BD4;&#x76D1;&#x6D4B;&#x4E0E;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x5316;&#x6297; GFP &#x67D3;&#x8272;&#x7684;&#x6548;&#x529B;&#x3002;&#x56F4;&#x7ED5;&#x6574;&#x4E2A;&#x8840;&#x7BA1;&#x58C1;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x5FC3;&#x8154;&quot;&#x661F;&#x72B6;&quot;&#x53F7;&#x662F;&#x5728;&#x7F8E;&#x56FD;&#x770B;&#x5230;&#x548C;&#x4E0E;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x5316;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x57FA;&#x56E0;&#x5FAE;&#x7403;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x76F8;&#x5173;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7F8E;&#x56FD;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x76D1;&#x6D4B;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5BFC;&#x7BA1;&#x8840;&#x7BA1;&#x57FA;&#x56E0;&#x5FAE;&#x7403;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;

&#x5728;&#x7F8E;&#x56FD;&#x4F53;&#x5185;&#x76D1;&#x6D4B;&#x4E2D;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5BFC;&#x7BA1;&#x7684;&#x732A;&#x57FA;&#x56E0;&#x5FAE;&#x7403;&#x8840;&#x7BA1;&#x8FD0;&#x9001;&#xFF1A; &#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x3002;

In this study, the authors tested the feasibility of using ultrasonography (US) to monitor catheter-based vascular gene microsphere delivery. Polymeric biodegradable microspheres (mean diameter, 5 microm) were prepared by using a double-emulsion technique to encapsulate DNA-plasmid-encoding green fluorescent protein (GFP) genes. With use of gene-delivery catheters, GFP microspheres were locally delivered into the left femoral arterial walls of six pigs; the contralateral arteries were not infused with microspheres and thus served as negative control vessels. The delivery procedures were monitored with high-frequency (8-15-MHz) transducer US. The effectiveness of monitoring with US was compared with the effectiveness of monitoring with immunohistochemical anti-GFP staining. A highly echogenic "star burst" sign around the entire vessel wall was seen at US and correlated with immunohistochemical findings that showed the destination of the gene microspheres. Study results demonstrate the potential of US for monitoring catheter-based vascular gene microsphere delivery in vivo.

In vivo US monitoring of catheter-based vascular delivery of gene microspheres in pigs: feasibility.

Dans cette &eacute;tude, les auteurs ont test&eacute; la faisabilit&eacute; d&#39;utiliser l&#39;&eacute;chographie pour surveiller la livraison de microsph&egrave;res &agrave; base de cath&eacute;ter vasculaire g&egrave;ne. Des microsph&egrave;res biod&eacute;gradables polym&eacute;riques (diam&egrave;tre moyen, 5 microm) ont &eacute;t&eacute; pr&eacute;par&eacute;s en utilisant une technique de double-&eacute;mulsion pour encapsuler l&#39;ADN plasmidique-codage des g&egrave;nes de la prot&eacute;ine fluorescente verte (GFP). Avec l&#39;utilisation de cath&eacute;ters administration d&#39;un g&egrave;ne, les microsph&egrave;res GFP ont &eacute;t&eacute; livr&eacute;s localement dans la paroi art&eacute;rielle f&eacute;morale gauche de six porcs ; les art&egrave;res controlat&eacute;rales non impr&eacute;gn&eacute;s de microsph&egrave;res et ainsi servis comme t&eacute;moin n&eacute;gatif. Les proc&eacute;dures de livraison ont &eacute;t&eacute; suivis avec transducteur haute fr&eacute;quence (8-15 MHz) U.S.. L&#39;efficacit&eacute; de la surveillance avec nous a &eacute;t&eacute; compar&eacute;e &agrave; l&#39;efficacit&eacute; de la surveillance avec la coloration immunohistochimique anti-GFP. Un signe tr&egrave;s &eacute;chog&egrave;ne &laquo; star burst &raquo; autour de la paroi du vaisseau entier a &eacute;t&eacute; observ&eacute; chez nous et de r&eacute;sultats immunohistochimiques montrant la destination des microsph&egrave;res de g&egrave;ne. R&eacute;sultats de l&#39;&eacute;tude d&eacute;montrent le potentiel de nous pour le suivi de livraison de microsph&egrave;res &agrave; base de cath&eacute;ter vasculaire g&egrave;ne in vivo.

Surveillance in vivo U.S. de cath&eacute;ter vasculaire livraison des microsph&egrave;res de g&egrave;ne chez le porc : faisabilit&eacute;.

In-vivo-&#xDC;berwachung von US-Katheter-basierte vaskul&#xE4;re Abgabe von Gen-Mikrosph&#xE4;ren in Schweinen: Machbarkeit.

In questo studio, gli autori hanno testato la fattibilit&agrave; dell&#39;utilizzo di ultrasonografia (US) per monitorare la consegna di microsfere basati su catetere vascolare gene. Polimeriche biodegradabili microsfere (diametro medio, 5 microm) sono state preparate utilizzando una tecnica di doppio-emulsione per incapsulare il DNA del plasmide-codifica dei geni della proteina fluorescente verde (GFP). Con l&#39;uso di cateteri gene-consegna, microsfere di GFP localmente sono state consegnate nelle pareti delle arterie femorali sinistra di sei maiali; le arterie controlaterale non erano infuso con microsfere e cos&igrave; servite come navi di controllo negativo. Le procedure di consegna sono state monitorate con trasduttore ad alta frequenza (8-15 MHz) U.S.. L&#39;efficacia del monitoraggio con noi &egrave; stato confrontato con l&#39;efficacia del monitoraggio con la colorazione immunoistochimica anti-GFP. Un segno altamente ecogena &quot;burst star&quot; intorno alla parete intera nave &egrave; stato visto a noi e correlato con i risultati immunoistochimici che mostrava la destinazione delle microsfere di gene. Risultati dello studio dimostrano il potenziale di noi per il monitoraggio di consegna di microsfere basati su catetere vascolare genica in vivo.

In vivo U.S. monitoraggio basati su catetere vascolare consegna del gene microsfere nei suini: fattibilit&agrave;.

&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x8457;&#x8005;&#x3089;&#x8D85;&#x97F3;&#x6CE2;&#x691C;&#x67FB; &#xFF08;&#x7C73;&#x56FD;&#xFF09; &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7403;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30FC;&#x30C6;&#x30EB; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x8840;&#x7BA1;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5C0E;&#x5165;&#x306E;&#x76E3;&#x8996;&#x306E;&#x5B9F;&#x73FE;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x751F;&#x5206;&#x89E3;&#x6027;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x5FAE;&#x7C92;&#x5B50; (&#x5E73;&#x5747;&#x76F4;&#x5F84; 5 microm) &#x306F;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (GFP) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; DNA &#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C9; &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x30C0;&#x30D6;&#x30EB; &#x30A8;&#x30DE;&#x30EB;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x4F5C;&#x88FD;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30EA;&#x30FC; &#x30AB;&#x30C6;&#x30FC;&#x30C6;&#x30EB;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3068;&#x3001;GFP &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30A2;&#x306F;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x3067;&#x516D;&#x3064;&#x306E;&#x8C5A;&#x306E;&#x5DE6;&#x5927;&#x817F;&#x52D5;&#x8108;&#x306E;&#x58C1;&#x306B;&#x7D0D;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;;&#x5BFE;&#x5074;&#x52D5;&#x8108;&#x306A;&#x3044;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7403;&#x4F53;&#x3092;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x8239;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x52D9;&#x3081;&#x305F;&#x3002;&#x914D;&#x4FE1;&#x624B;&#x7D9A;&#x304D; &#xFF08;8-15 MHz&#xFF09; &#x9AD8;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;&#x7C73;&#x56FD;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x3068;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x53CD; GFP &#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x67D3;&#x8272;&#x3068;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x58C1;&#x306E;&#x5468;&#x308A;&#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x30A8;&#x30B3;&#x30FC;&#x300C;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; &#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x300D;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30F3;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x3092;&#x898B;&#x3066;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30A2;&#x306E;&#x5148;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x6240;&#x898B;&#x3068;&#x3088;&#x304F;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; in vivo &#x8840;&#x7BA1;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AB;&#x30C6;&#x30FC;&#x30C6;&#x30EB; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7403;&#x914D;&#x4FE1;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Vivo &#x7C73;&#x56FD;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30A2;&#x8C5A;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x914D;&#x9054;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30FC;&#x30C6;&#x30EB; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;: &#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;

&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC800;&#xC790; &#xCD08;&#xC74C;&#xD30C; (&#xBBF8;&#xAD6D;)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE74; &#xD14C; &#xD130; &#xAE30;&#xBC18; &#xD608;&#xAD00; &#xC720;&#xC804;&#xC790; microsphere &#xBC30;&#xB2EC; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC758; &#xD0C0;&#xB2F9;&#xC131;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xC0DD; &#xBD84;&#xD574;&#xC131; microspheres (&#xD3C9;&#xADE0; &#xC9C1;&#xACBD;, 5 microm) &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP) &#xC720;&#xC804;&#xC790; DNA &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xCEA1;&#xC290;&#xD654; &#xD558; &#xB354;&#xBE14; &#xC720;&#xC81C; &#xAE30;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC900;&#xBE44; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xB2EC; &#xCE74; &#xD14C; &#xD130;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;, GFP microspheres &#xB85C;&#xCEEC; 6 &#xB3FC;&#xC9C0;; &#xC67C;&#xCABD;&#xB41C; &#xB300; &#xD1F4; &#xB3D9;&#xB9E5; &#xBCBD;&#xC5D0; &#xC804;&#xB2EC; &#xD588;&#xB2E4; contralateral &#xB3D9;&#xB9E5; microspheres &#xC8FC;&#xC785; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC120;&#xBC15;&#xC744; &#xC5ED;&#xC784;. &#xBC30;&#xB2EC; &#xC808;&#xCC28;&#xB294; &#xACE0;&#xC8FC;&#xD30C; (8-15 m h z) &#xBCC0;&#xD658;&#xAE30; &#xBBF8;&#xAD6D;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xAD6D;&#xC640; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131; immunohistochemical &#xC548;&#xD2F0; GFP &#xC5BC;&#xB8E9;&#xACFC; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xD608;&#xAD00; &#xBCBD; &#xC8FC;&#xC704; &#xB192;&#xC740; echogenic &quot;&#xC2A4;&#xD0C0; &#xBC84;&#xC2A4;&#xD2B8;&quot; &#xAE30;&#xD638;&#xB294; &#xBBF8;&#xAD6D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF8; &#xD558;&#xC640; &#xC720;&#xC804;&#xC790; microspheres &#xB300;&#xC0C1; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; immunohistochemical &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00;. &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD608;&#xAD00; &#xC9C4; &#xCE74; &#xD14C; &#xD130; &#xAE30;&#xBC18; microsphere &#xBC30;&#xB2EC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBBF8;&#xAD6D;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC785;&#xC99D;.

Vivo &#xBBF8;&#xAD6D; &#xC720;&#xC804;&#xC790; microspheres &#xB3FC;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD608;&#xAD00; &#xC804;&#xB2EC; &#xCE74; &#xD14C; &#xD130; &#xAE30;&#xBC18; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;: &#xD0C0;&#xB2F9;&#xC131;.

En este estudio, los autores probaron la viabilidad de utilizar la ultrasonograf&iacute;a (US) para supervisar la entrega de microesferas basadas en cat&eacute;ter vascular gene. Se prepararon microesferas biodegradables polim&eacute;ricas (di&aacute;metro medio, 5 microm) usando una t&eacute;cnica de doble emulsi&oacute;n para encapsular ADN pl&aacute;smido-codificaci&oacute;n de genes de la prote&iacute;na fluorescente verde (GFP). Con el uso de cat&eacute;teres de gene-entrega, GFP microesferas fueron entregadas localmente en las paredes arteriales femorales izquierdas de seis cerdos; las arterias contralaterales no fueron infundidas con microesferas y sirve as&iacute; como embarcaciones de control negativo. Los procedimientos de entrega fueron controlados con transductor de alta frecuencia (8-15-MHz) U.S.. Se compar&oacute; la efectividad de la supervisi&oacute;n con Estados Unidos con la efectividad de la supervisi&oacute;n con tinci&oacute;n de inmunohistoqu&iacute;mica anti-GFP. Un signo altamente ecog&eacute;nica &quot;estallido de estrellas&quot; alrededor de la pared del vaso entero fue visto en Estados Unidos y correlacionado con resultados immunohistochemical que demostraron el destino de las microesferas de gene. Resultados del estudio demuestran el potencial de Estados Unidos para supervisar la entrega de microesferas basadas en cat&eacute;ter vascular g&eacute;nica in vivo.

En vivo U.S. monitoreo de cat&eacute;ter vascular entrega de microesferas de gene en cerdos: viabilidad.

&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x5149;&#x5B66;&#x6210;&#x50CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8840;&#x7BA1;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x6216;&#x7EA2;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;RFP&#xFF09;&#xFF0C;&#x5E76;&#x901A;&#x8FC7;&#x9A7E;&#x9A76;&#x5176;&#x5E76;&#x53D1;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x53CC;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x68C0;&#x6D4B;&#x540E;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x5165;&#x52A8;&#x8109;&#x540C;&#x65F6;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C; RFP &#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6D89;&#x53CA;&#x5230;&#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x8377;&#x8026;&#x5408;&#x5668;&#x4EF6;&#x76F8;&#x673A;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8367;&#x5149;&#xFF0C;&#x5149;&#x7EA4;&#x7684;&#x5149;&#x7EA4;&#x63A2;&#x9488;&#x4F20;&#x8F93;&#x5149;&#xFF0C;&#x548C;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x7B5B;&#x9009;&#x5668;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x533A;&#x5206;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x6807;&#x8BB0;&#x3002;&#x5728;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5411;&#x91CF;&#x88AB;&#x672C;&#x5730;&#x4F20;&#x9001;&#x5230;&#x76EE;&#x6807;&#x52A8;&#x8109;&#xFF0C;&#x800C; nonfluorescent &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x5230;&#x5BF9;&#x4FA7;&#x52A8;&#x8109;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6DF1;&#x6C34;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;&#x753B;&#x9762;&#x663E;&#x793A;&#x660E;&#x4EAE;&#x8367;&#x5149;&#x4E0D;&#x540C;&#x9886;&#x57DF;&#x4ECE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C; RFP &#x6CBF;&#x52B1;&#x78C1; &#xFF1B; &#x76EE;&#x6807;&#x52A8;&#x8109;&#x6CA1;&#x6709;&#x5916;&#x6E90;&#x8367;&#x5149;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5728;&#x63A7;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x3002;&#x4ECE;&#x5355;&#x548C;&#x53CC;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x8F7D;&#x4F53;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x52A8;&#x8109;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x8D85;&#x8FC7;&#x4ECE;&#x63A7;&#x4EF6;&#x7684;&#x81EA;&#x4F53;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x5171;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C; RFP &#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x4F7F;&#x7528;&#x5149;&#x5B66;&#x6210;&#x50CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#x540C;&#x65F6;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x5141;&#x8BB8;&#x5728;&#x8109;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8981;&#x76D1;&#x89C6;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x5176;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x5149;&#x5B66;&#x6210;&#x50CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x52A8;&#x8109;&#x53CC;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

We evaluate the in vivo use of an optical imaging method to detect the vascular expression of green fluorescent protein (GFP) or red fluorescent protein (RFP), and to detect the simultaneous expression of GFP and RFP after transduction into arteries by a dual-promoter lentiviral vector driving their concurrent expression. This method involves using a charge-coupled device camera to detect fluorescence, a fiber optic probe to transmit light, and optical filters to distinguish each marker. In animal models, these vectors are locally delivered to target arteries, whereas the gene for a nonfluorescent cell-surface protein is transduced into contralateral arteries as the sham control. The images show distinct areas of bright fluorescence from GFP and RFP along the target arteries on excitation; no exogenous fluorescence is observed in the controls. Measured signal intensities from arteries transduced with the single- and dual-promoter vectors exceed the autofluorescence signal from the controls. Transgene expression of GFP and RFP in vivo is confirmed with confocal microscopy. We demonstrate the use of an optical imaging method to concurrently detect two distinct fluorescent proteins, potentially permitting the expression of multiple transgenes and their localization in the vasculature to be monitored.

Detection of dual-gene expression in arteries using an optical imaging method.

Nous &eacute;valuons l&#39;utilisation in vivo d&#39;une m&eacute;thode d&#39;imagerie optique pour d&eacute;tecter l&#39;expression vasculaire de la prot&eacute;ine fluorescente verte (GFP) ou la prot&eacute;ine fluorescente rouge (DP) et pour d&eacute;tecter l&#39;expression simultan&eacute;e de la GFP et DP apr&egrave;s transduction dans les art&egrave;res par un vecteur lentiviral dual-promoteur leur expression simultan&eacute;e au volant. Cette m&eacute;thode consiste &agrave; l&#39;aide d&#39;un appareil de charge - coupled device pour d&eacute;tecter la fluorescence, une sonde de fibre optique pour transmettre la lumi&egrave;re et optiques des filtres permettant de distinguer chaque marqueur. Dans des mod&egrave;les animaux, ces vecteurs sont localement livr&eacute;s aux art&egrave;res de cible, tandis que le g&egrave;ne codant pour une prot&eacute;ine de surface cellulaire fluorescent est transduite dans les art&egrave;res controlat&eacute;rales sous le contr&ocirc;le de l&#39;imposture. Les images montrent des zones distinctes de fluorescence brillante de GFP et DP le long des art&egrave;res de cible sur l&#39;excitation ; aucune fluorescence exog&egrave;ne n&#39;est observ&eacute;e chez les t&eacute;moins. Intensit&eacute; du signal mesur&eacute; des art&egrave;res transduites avec les vecteurs de promoteur en simple et en double d&eacute;passe le signal de l&#39;autofluorescence des contr&ocirc;les. Transgene expression de GFP et DP in vivo est confirm&eacute;e par microscopie confocale. Nous d&eacute;montrons l&#39;utilisation d&#39;une m&eacute;thode d&#39;imagerie optique pour d&eacute;tecter simultan&eacute;ment les deux prot&eacute;ines fluorescentes distinctes, potentiellement permettant l&#39;expression des transg&egrave;nes multiples et leur localisation dans le syst&egrave;me vasculaire &agrave; surveiller.

D&eacute;tection de double-gene expression dans les art&egrave;res &agrave; l&#39;aide d&#39;une m&eacute;thode d&#39;imagerie optique.

Nachweis von Dual-Genexpression in Arterien unter Verwendung eines optischen Bildgebungsverfahren.

Valutare l&#39;uso di un metodo di imaging ottico per rilevare l&#39;espressione della proteina fluorescente verde (GFP) o la proteina fluorescente rossa (RFP) vascolare e di rilevare l&#39;espressione simultanea di GFP e RFP dopo trasduzione nelle arterie da un vettore lentivirale dual-promotore guidare loro espressione simultanee in vivo. Questo metodo comporta l&#39;uso di una fotocamera di charge - coupled device per rilevare la fluorescenza, una sonda di fibra ottica per la trasmissione di luce e ottici filtri per distinguere ogni marcatore. In modelli animali, questi vettori vengono recapitati localmente alle arterie di destinazione, considerando che il gene per una proteina di superficie cellulare nonfluorescent &egrave; transduced nelle arterie controlaterale come il controllo sham. Le immagini mostrano aree distinte di fluorescenza brillante da GFP e RFP lungo le arterie di destinazione sull&#39;eccitazione; alcuna fluorescenza esogeno non &egrave; osservato nei controlli. Intensit&agrave; del segnale misurato dalle arterie transduced con i vettori di singolo e doppio-promotore supera il segnale di autofluorescenza dai controlli. Espressione del transgene di GFP e RFP in vivo &egrave; confermata con la microscopia confocale. Dimostriamo che l&#39;uso di un metodo di imaging ottico per rilevare contemporaneamente due distinte proteine fluorescenti, potenzialmente permettendo l&#39;espressione dei transgeni multiple e loro localizzazione nel sistema vascolare da monitorare.

Rilevamento di dual-gene expression in arterie utilizzando un metodo di imaging ottico.

&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (GFP) &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8D64;&#x8272;&#x3051;&#x3044;&#x5149;&#x305F;&#x3093;&#x3071;&#x304F;&#x8CEA; (RFP) &#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x3001;&#x52D5;&#x8108;&#x306B;&#x4F1D;&#x9054;&#x5F8C;&#x306E; GFP &#x3068; RFP &#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x767A;&#x73FE;&#x540C;&#x6642;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x904B;&#x8EE2;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6CD5;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x3001;&#x9001;&#x4FE1;&#x306E;&#x5404;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5149;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5149;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x5149;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC;&#x578B;&#x5149;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B; ccd &#x30AB;&#x30E1;&#x30E9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x6210;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5BFE;&#x5074;&#x52D5;&#x8108;&#x306B;&#x30B7;&#x30E3;&#x30E0; &#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5C0E;&#x5165;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB; &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x52D5;&#x8108;&#x306B;&#x914D;&#x4FE1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x753B;&#x50CF;&#x660E;&#x77AD;&#x306A;&#x533A;&#x57DF;&#x306E;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x86CD;&#x5149; GFP &#x3068; RFP &#x304B;&#x3089;&#x52B1;&#x8D77;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x52D5;&#x8108;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x8868;&#x793A;;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x86CD;&#x5149;&#x304C;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5F37;&#x5EA6;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x3068;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x52D5;&#x8108;&#x304B;&#x3089;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x81EA;&#x767A;&#x86CD;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B; GFP &#x3068; RFP in vivo &#x3067;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x8840;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8907;&#x6570; transgenes &#x3068;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8A31;&#x305B;&#x3070;&#x540C;&#x6642;&#x306B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6CD5;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;&#x5149;&#x5B66;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x52D5;&#x8108;&#x5185;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP) &#xB610;&#xB294; &#xBE68;&#xAC04;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (RFP)&#xC758; &#xD608;&#xAD00; &#xC2DD; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC2DD; &#xC6B4;&#xC804; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xBAA8;&#xD130; lentiviral &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB3D9;&#xB9E5;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD658; &#xD6C4; GFP&#xC640; RFP&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC2DD; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xAD11;&#xD559; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD3C9;&#xAC00;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xD615;&#xAD11;, &#xAC01; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB97C; &#xAD6C;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC00;&#xBCCD;&#xACE0; &#xAD11;&#xD559; &#xD544;&#xD130; &#xC804;&#xC1A1; &#xC12C;&#xC720; &#xAD11;&#xD559; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC804; &#xD558; &#xACB0;&#xD569; &#xC18C;&#xC790; &#xCE74;&#xBA54;&#xB77C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; nonfluorescent &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xAC00;&#xC9DC; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xB85C; contralateral &#xB3D9;&#xB9E5;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBC18;&#xBA74; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCA1;&#xD130; &#xB300;&#xC0C1; &#xB3D9;&#xB9E5;&#xC5D0; &#xB85C;&#xCEEC;&#xB85C; &#xBC30;&#xB2EC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC5EC;&#xAE30;;&#xC5D0; &#xB300;&#xC0C1; &#xB3D9;&#xB9E5;&#xC744; &#xB530;&#xB77C; GFP&#xC640; RFP&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1D;&#xC740; &#xD615;&#xAD11;&#xC758; &#xACE0;&#xC720; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC544;&#xB2C8; exogenous &#xD615;&#xAD11; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xBC0F; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xBAA8;&#xD130; &#xBCA1;&#xD130;&#xC640; &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB3D9;&#xB9E5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC15;&#xB3C4; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0;&#xC11C; autofluorescence &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xCD08;&#xACFC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Transgene &#xD45C;&#xD604;&#xC758; GFP&#xC640; RFP vivo&#xC5D0;&#xC11C; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xD560; &#xD608;&#xAD00;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; transgenes&#xC640; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC2DD;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xAC80;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xAD11;&#xD559; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAD11;&#xD559; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB3D9;&#xB9E5;&#xC5D0; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;.

Evaluamos el uso in vivo de un m&eacute;todo de imagen &oacute;ptico para detectar la expresi&oacute;n vascular de la prote&iacute;na fluorescente verde (GFP) o prote&iacute;na fluorescente roja (RFP) y para detectar la expresi&oacute;n simult&aacute;nea de GFP y RFP despu&eacute;s de transducci&oacute;n en arterias por un vector lentivirales dual-promotor conducir su expresi&oacute;n concurrente. Este m&eacute;todo implica el uso de una c&aacute;mara de charge - coupled device para detectar fluorescencia, una sonda de fibra &oacute;ptica para transmitir luz y &oacute;pticos filtros para distinguir cada marcador. En modelos animales, estos vectores se entregan localmente a las arterias de destino, mientras que el gen para una prote&iacute;na de superficie celular nonfluorescent es transduced en arterias contralaterales como el control de la farsa. Las im&aacute;genes muestran &aacute;reas distintas de fluorescencia brillante de GFP y RFP a lo largo de las arterias de destino en la excitaci&oacute;n; ninguna fluorescencia ex&oacute;gena se observa en los controles. Intensidades de la se&ntilde;al medida de arterias transduced con los vectores de la solo - y doble-promotor excedan la autofluorescencia se&ntilde;al de los controles. Expresi&oacute;n del transg&eacute;n de GFP y RFP in vivo se confirma con microscop&iacute;a confocal. Se demuestra el uso de un m&eacute;todo de imagen &oacute;ptico para detectar simult&aacute;neamente dos distintas prote&iacute;nas fluorescentes, que potencialmente permite la expresi&oacute;n de m&uacute;ltiples transgenes y su localizaci&oacute;n en la vasculatura monitorizada.

Detecci&oacute;n de doble-genes en arterias utilizando un m&eacute;todo de imagen &oacute;ptico.

&#x9486;&#x55B7;&#x9178;&#x4E8C;&#x4E59;&#x70EF;&#x4E09;&#x80FA; (GD-DTPA) &#x88AB;&#x5C01;&#x88C5;&#x5230;&#x53EF;&#x751F;&#x7269;&#x964D;&#x89E3;&#xFF0C;&#x9ECF;&#x9644;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x5FAE;&#x7C92;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x65E0;&#x521B;&#x6027;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F7D;&#x5DE5;&#x5177;&#x672C;&#x5730;&#x8180;&#x80F1;&#x704C;&#x6CE8;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x3002;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x5242;&#x5C01;&#x88C5;&#x53CA;&#x91CA;&#x836F;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3001; T(1) &#x677E;&#x5F1B;&#x7387;&#x548C;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x5EA6;&#x589E;&#x5F3A;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x5FAE;&#x7C92;&#x3002;Gd-DTPA &#x52A0;&#x8F7D;&#x5230;&#x5FAE;&#x7C92;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x662F; 14.3 + /-0.6 &#x676F;/mg &#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x5FAE;&#x7C92;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684; T(1) &#x677E;&#x5F1B;&#x7387;&#x8868;&#x660E; Gd DPTA &#x5185;&#x5BB9;&#x76F4;&#x63A5;&#x4F9D;&#x8D56;&#x3002;1.5 T &#x548C; 4.7T &#x5148;&#x751F;&#x626B;&#x63CF;&#x4EEA;&#x7528;&#x4E8E;&#x56FE;&#x50CF;&#x4E0E; Gd-DTPA &#x52A0;&#x8F7D;&#x5FAE;&#x7C92;&#x4F53;&#x5185;&#x6CE8;&#x5165;&#x5C0F;&#x9F20;&#x56CA; intravesically&#x3002;MR &#x56FE;&#x50CF;&#x663E;&#x793A;&#x73AF;&#x5F62;&#x533A;&#x57DF;&#x589E;&#x5F3A;&#x523B;&#x5728;&#x8180;&#x80F1;&#x58C1;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x88AB;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E;&#x88AB;&#x4F18;&#x5148;&#x7C98;&#x9644;&#x4E8E;&#x7C98;&#x819C;&#x808C;&#x5C42;&#x886C;&#x780C;&#x7684;&#x5FAE;&#x7C92;&#x3002;&#x63A7;&#x4EF6;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x5C55;&#x793A;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x8FD9;&#x79CD;&#x589E;&#x5F3A;&#x3002;&#x4ECE; post-instillation &#x56FE;&#x50CF;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x5F52;&#x4E00;&#x5316;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x90FD;&#x5927;&#x5F97;&#x591A; &#xFF08;P &lt; 0.05&#xFF09; &#x6BD4; pre-instillation &#x56FE;&#x50CF;&#x3002;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x5EA6;&#x589E;&#x5F3A;&#x81F3;&#x5C11; 5 &#x5929;&#x540E;&#x521D;&#x59CB;&#x704C;&#x8F93;&#xFF0C;&#x6307;&#x51FA;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x52A0;&#x5F3A;&#x51CF;&#x5C11;&#x7531;&#x4E8E;&#x5FAE;&#x7C92;&#x9000;&#x5316;&#x6216;&#x9ECF;&#x819C;&#x91CD;&#x5EFA;&#x3002;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x5C01;&#x88C5;&#x9486;&#x7684;&#x53EF;&#x751F;&#x7269;&#x964D;&#x89E3;&#xFF0C;&#x9ECF;&#x9644;&#x5FAE;&#x7C92;&#x5206;&#x5E03;&#x6210;&#x529F;&#x662F;&#x4E0E; MRI &#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7C92;&#x5B50;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x4EA4;&#x8D27;&#x65F6;&#x95F4;&#x4E0A;&#x548C;&#x7A7A;&#x95F4;&#x4E0A;&#x76D1;&#x89C6;&#x901A;&#x8FC7;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x3002;

&#x5148;&#x751F;&#x7684;&#x53EF;&#x751F;&#x7269;&#x964D;&#x89E3;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x5FAE;&#x7C92;&#x7684;&#x5F71;&#x50CF;&#xFF1A; &#x6F5C;&#x5728;&#x76D1;&#x6D4B;&#x5C40;&#x90E8;&#x7ED9;&#x836F;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

Gadolinium diethylenetriamine pentaacetic acid (Gd-DTPA) was encapsulated into biodegradable, bioadhesive polymeric microparticles to enable noninvasive monitoring of their local intravesical delivery with MRI. The microparticles were characterized by contrast agent encapsulation and release kinetics, T(1) relaxation rates, and contrast enhancement in vivo. The level of Gd-DTPA loading into microparticles was 14.3 +/- 0.6 mug/mg polymer. The measured T(1) relaxation rates of the microparticles showed a direct dependence on Gd-DPTA content. Both 1.5T and 4.7T MR scanners were used to image murine bladders instilled intravesically with Gd-DTPA-loaded particles in vivo. MR images showed ring-shaped regions of enhancement inscribing the bladder wall, which were attributed to the microparticles that were preferentially adherent to the mucosa lining the urothelium. The images of controls exhibited no such enhancement. The normalized signal intensities measured from post-instillation images were significantly greater (P < 0.05) than those in the pre-instillation images. Contrast enhancement was observed for at least 5 days after the initial instillation, although the enhancement decreased due to microparticle degradation or mucosa renewal. The localized distribution of biodegradable, bioadhesive microparticles encapsulating Gd-DTPA was successfully visualized with MRI in vivo, allowing particle-mediated delivery to be temporally and spatially monitored noninvasively.

MR imaging of biodegradable polymeric microparticles: a potential method of monitoring local drug delivery.

Acide de pentaacetic di&eacute;thyl&egrave;netriamine gadolinium (Gd-DTPA) &eacute;tait renferm&eacute; dans des microparticules polym&eacute;riques Bioadh&eacute;sif biod&eacute;gradable, afin de permettre une surveillance non invasive de leur livraison locale intrav&eacute;sicale avec IRM. Les microparticules sont caract&eacute;ris&eacute;s par l&#39;agent de contraste encapsulation et la lib&eacute;ration cin&eacute;tique, T(1) taux de relaxation et am&eacute;lioration du contraste in vivo. Le niveau de chargement en microparticules de Gd-DTPA a &eacute;t&eacute; de 14,3 +/-0,6 polym&egrave;re tasse/mg. Le taux de relaxation T(1) mesur&eacute;e des microparticules ont montr&eacute; une d&eacute;pendance directe sur le contenu de la Gd-DPTA. Scanners de Monsieur fois 1. 5 t et 4.7T servaient &agrave; image Sicale murine vessies instill&eacute;es avec Gd-DTPA-charg&eacute; de particules in vivo. M. images montrent les r&eacute;gions en forme d&#39;anneau de renforcement de la paroi de la vessie, l&#39;inscription qui ont &eacute;t&eacute; attribu&eacute;es pour les microparticules qui &eacute;taient pr&eacute;f&eacute;rentiellement adh&eacute;rentes &agrave; la muqueuse tapissant l&#39;uroth&eacute;lium. Les images des contr&ocirc;les n&#39;expos&eacute;es telle aucune am&eacute;lioration. Les intensit&eacute;s du signal normalis&eacute; mesur&eacute;es &agrave; partir des images de l&#39;&eacute;t&eacute; &eacute;taient significativement plus &eacute;lev&eacute;es (P 0,05 &lt;) que celles dans les images de pre-instillation. Am&eacute;lioration du contraste a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e pendant au moins 5 jours apr&egrave;s l&#39;instillation initiale, bien que la mise en valeur a diminu&eacute; en raison de renouvellement de d&eacute;gradation ou de la muqueuse au moyen de microparticules. La distribution localis&eacute;e de microparticules de Bioadh&eacute;sif biod&eacute;gradable, encapsulation de Gd-DTPA a &eacute;t&eacute; visualis&eacute;e avec succ&egrave;s par l&#39;IRM in vivo, permettant la distribution induite par la particule temporellement et spatialement surveillance non invasive.

M. formation image des microparticules polym&egrave;res biod&eacute;gradables : une m&eacute;thode potentielle de surveillance locale de m&eacute;dicaments.

MR-Bildgebung von biologisch abbaubaren polymeren Mikropartikeln: eine potentielle Verfahren zur &#xDC;berwachung local drug delivery.

Acido di dietilentriamminopentaacetico dietilentriammina gadolinio (Gd-DTPA) &egrave; stata incapsulata in biodegradabili, bioadesivi microparticelle polimeriche per abilitare il monitoraggio non invasivo della loro consegna locale intravescicale con MRI. Le microparticelle sono state caratterizzate da cinetica di incapsulamento e rilascio di agente di contrasto, tariffe di relax T(1) e contrast enhancement in vivo. Il livello di Gd-DTPA caricamento in microparticelle era 14,3 + 0,6 polimero mug/mg. Le tariffe di relax T(1) misurate delle microparticelle ha mostrato una dipendenza diretta sul contenuto del Gd-DPTA. Scanner Signor sia 1, 5t e 4.7T sono stati utilizzati per immagine intravesically murino vesciche instillati con particelle di Gd-DTPA-caricato in vivo. Signor immagini hanno mostrato regioni a forma di anello di enhancement inscrivere la parete della vescica, che sono stati attribuiti a microparticelle che erano preferenzialmente aderente alla mucosa fodera il urothelium. Le immagini dei controlli non esposti tale miglioramento. L&#39;intensit&agrave; di segnale normalizzato misurata dalle immagini di post-instillation sono stati significativamente maggiore (P &lt; 0,05) rispetto a quelli nelle immagini pre-instillation. Contrast enhancement &egrave; stata osservata per almeno 5 giorni dopo l&#39;instillazione iniziale, anche se il miglioramento &egrave; diminuito a causa di rinnovo di degrado o mucosa di microparticelle. La distribuzione localizzata di microparticelle di bioadesive biodegradabile, incapsulamento di Gd-DTPA era correttamente visualizzata con MRI in vivo, permettendo la consegna delle particelle-mediata essere temporalmente e spazialmente monitorate in modo non invasivo.

MR imaging di microparticelle polimeriche biodegradabili: un metodo potenziale di monitoraggio locale drug delivery.

&#x30AC;&#x30C9;&#x30EA;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0; diethylenetriamine pentaacetic &#x9178; (GD-DTPA) &#x305D;&#x306E; MRI &#x306B;&#x8180;&#x80F1;&#x5185;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x914D;&#x4FE1;&#x306E;&#x975E;&#x4FB5;&#x8972;&#x7684;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x5206;&#x89E3;&#x6027;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x63A5;&#x7740;&#x306E;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x5FAE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306B;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5FAE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8; &#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8; &#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x5316;&#x53CA;&#x3073;&#x653E;&#x51FA;&#x52D5;&#x614B;&#x3001;T(1) &#x7DE9;&#x548C;&#x7387;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x5F37;&#x8ABF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;GD-DTPA &#x5FAE;&#x7C92;&#x5B50;&#x3078;&#x306E;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; 14.3 &plusmn; 0.6 &#x30DE;&#x30B0;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;/mg &#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5FAE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A; T(1) &#x7DE9;&#x548C;&#x7387; Gd &#x3042;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;1.5 T &#x3068; 4.7T &#x6C0F;&#x306E;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30CA;&#x30FC; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x8180;&#x80F1;&#x6CE8;&#x5165;&#x6BCE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E; in vivo Gd DTPA &#x30ED;&#x30FC;&#x30C9; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;MR &#x753B;&#x50CF;&#x3001;&#x4F53;&#x5916;&#x30E9;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x7C98;&#x819C;&#x306B;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x4ED8;&#x7740;&#x3057;&#x305F;&#x5FAE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x72B6;&#x9818;&#x57DF;&#x5F37;&#x5316;&#x8180;&#x80F1;&#x58C1;&#x3092;&#x5185;&#x63A5;&#x306E;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x62E1;&#x5F35;&#x3092;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;Post-instillation &#x753B;&#x50CF;&#x304B;&#x3089;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x6B63;&#x898F;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5F37;&#x5EA6;&#x304C;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x9AD8;&#x304B;&#x3063;&#x305F; &#xFF08;P 0.05 &lt;) pre-instillation &#x753B;&#x50CF;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x3002;&#x5F37;&#x5316;&#x5FAE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7C98;&#x819C;&#x306E;&#x30EA;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30A2;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x6CE8;&#x5165;&#x5F8C; 5 &#x65E5;&#x9593;&#x306B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x5F37;&#x8ABF;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;GD-DTPA &#x3092;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x5206;&#x89E3;&#x6027;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x63A5;&#x7740;&#x5FAE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x5206;&#x5E03;&#x306F;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x3001;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x975E;&#x4FB5;&#x8972;&#x7684;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x7C92;&#x5B50;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x914D;&#x4FE1;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x306E; MRI &#x3067;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3057;&#x305F;.

MR &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x751F;&#x5206;&#x89E3;&#x6027;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x5FAE;&#x7C92;&#x5B50;: &#x5C40;&#x6240;&#x85AC;&#x7269;&#x914D;&#x9001;&#x3092;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30FC;&#x3059;&#x308B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#xAC00;&#xB3CC;&#xB9AC;&#xB284; diethylenetriamine pentaacetic &#xC0B0; (Gd-DTPA)&#xB294; MRI &#xAC00;&#xC9C4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB85C;&#xCEEC; intravesical &#xBC30;&#xB2EC; &#xBE44; &#xCE68; &#xD22C; &#xC801;&#xC778; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC0DD; &#xBD84;&#xD574;&#xC131;, bioadhesive &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xBBF8;&#xC5D0; &#xCEA1;&#xC290;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBBF8; &#xD588;&#xB2E4; &#xB300;&#xBE44; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; &#xCEA1;&#xC290;&#xD654; &#xBC0F; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;, T(1) &#xC774;&#xC644; &#xC18D;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xB300;&#xBE44; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Gd-DTPA &#xB4A4;&#xC5D0; &#xB85C;&#xB4DC; &#xC218;&#xC900; &plusmn; 0.6 &#xB0AF; &#xC9DD;/mg &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38; 14.3 &#xD588;&#xB2E4;. &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; T(1) &#xC774;&#xC644; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB4A4;&#xC758; Gd DPTA &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC758;&#xC874;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. 1.5T &#xBC0F; 4.7T &#xBBF8;&#xC2A4;&#xD130; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB108; Gd DTPA &#xB85C;&#xB4DC; &#xC785;&#xC790; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; murine bladders intravesically &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xC2A4;&#xD130; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; urothelium &#xC548; &#xAC10; &#xC810; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xBD80;&#xCC29; &#xD55C; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;&#xB294; &#xBC29;&#xAD11; &#xBCBD;&#xC744; &#xC0C8; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC758; &#xACE0;&#xB9AC; &#xBAA8;&#xC591;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;. &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xAC19;&#xC740; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC815;&#xADDC;&#xD654; &#xB41C; &#xC2E0;&#xD638; &#xB18D;&#xB3C4; &#xCE21;&#xC815; post-instillation &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xD070; &#xD588;&#xB2E4; (P &lt; 0.05) pre-instillation &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;. &#xB300;&#xBE44; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xD5A5;&#xC0C1; microparticle &#xC800;&#xD558; &#xB610;&#xB294; &#xC810; &#xB9C9; &#xAC31;&#xC2E0;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCD08;&#xAE30; &#xC8FC;&#xC785; &#xD6C4; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 5 &#xC77C; &#xB3D9;&#xC548; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Gd-DTPA&#xB97C; &#xCEA1;&#xC290;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD; &#xBD84;&#xD574;&#xC131;, bioadhesive &#xBBF8;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xBC30;&#xD3EC;&#xB294; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; MRI vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xBC0F; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xD560; noninvasively &#xC785;&#xC790; &#xC911;&#xC7AC; &#xBC30;&#xB2EC; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;.

&#xBBF8;&#xC2A4;&#xD130; &#xC0DD; &#xBD84;&#xD574;&#xC131; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xBBF8;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;: &#xC9C0;&#xC5ED; &#xB9C8;&#xC57D; &#xBC30;&#xB2EC; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;.

&Aacute;cido de gadolinio diethylenetriamine pentaacetic (Gd-DTPA) fue encapsulado en micropart&iacute;culas polim&eacute;ricas biodegradables, de bioadhesivo para permitir el monitoreo no invasivo de su entrega local intravesical con MRI. Las micropart&iacute;culas se caracterizaron por la cin&eacute;tica de encapsulaci&oacute;n y liberaci&oacute;n de agente de contraste, tasas de relajaci&oacute;n T(1) y realce del contraste en vivo. El nivel de carga en micropart&iacute;culas de Gd-DTPA fue 14.3 +/-0,6 pol&iacute;mero taza/mg. Las tarifas de relajaci&oacute;n T(1) medidas de las micropart&iacute;culas mostraron una dependencia directa de contenido de Gd-DTPA. Esc&aacute;neres de Se&ntilde;or 1.5T tanto 4.7T se utilizaron para intravesically murino vejigas infundidos con Gd-DTPA-cargado de part&iacute;culas in vivo de la imagen. Sr. im&aacute;genes demostr&oacute; regiones del realce de la pared de la vejiga, la inscripci&oacute;n en forma de anillo que fueron atribuidas a las micropart&iacute;culas que fueron preferentemente adherentes a la mucosa que recubre el urotelio. Las im&aacute;genes de los controles no exhibieron ninguna tal realce. Las intensidades de la se&ntilde;al normalizada medidas de im&aacute;genes post-instillation fueron significativamente mayores (P 0.05 &lt;) que en las im&aacute;genes de pre-instillation. Realce del contraste se observ&oacute; durante al menos 5 d&iacute;as despu&eacute;s de la instilaci&oacute;n inicial, aunque la mejora disminuy&oacute; debido a la renovaci&oacute;n de degradaci&oacute;n o mucosa de micropart&iacute;culas. La distribuci&oacute;n localizada de micropart&iacute;culas de bioadhesivo biodegradables, encapsulando Gd-DTPA con &eacute;xito fue visualizada con MRI en vivo, permitiendo que la part&iacute;cula-mediado entrega temporal y espacialmente monitorizada no invasor.

Sr. proyecci&oacute;n de imagen de micropart&iacute;culas polim&eacute;ricas biodegradables: un m&eacute;todo potencial de monitoreo local del f&aacute;rmaco.

&#x6700;&#x8FD1;&#x4ECE;&#x52A8;&#x7269;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x80FD;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5BF9;&#x5FC3;&#x808C;&#x7684;&#x635F;&#x4F24;&#xFF0C;&#x534F;&#x52A9;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x7F51;&#x7AD9;&#x9996;&#x9875;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E8B;&#x540E;&#x7EC4;&#x7EC7;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x7814;&#x7A76;&#x90FD;&#x6839;&#x636E;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5B66;&#x89E3;&#x91CA;&#x6700;&#x8FD1;&#x5DF2;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x8FA9;&#x8BBA;&#x3002;

&#x540C;&#x79CD;&#x5F02;&#x4F53;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x95F4;&#x5145;&#x8D28;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5411;&#x5FC3;&#x808C;&#x6897;&#x6B7B;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;

Recent results from animal studies suggest that stem cells may be able to home to sites of myocardial injury to assist in tissue regeneration. However, the histological interpretation of postmortem tissue, on which many of these studies are based, has recently been widely debated.

Dynamic imaging of allogeneic mesenchymal stem cells trafficking to myocardial infarction.

Des r&eacute;sultats r&eacute;cents provenant d&#39;&eacute;tudes animales sugg&egrave;rent que les cellules souches peuvent &ecirc;tre capables &agrave; domicile pour les sites des l&eacute;sions myocardiques afin d&#39;aider &agrave; la r&eacute;g&eacute;n&eacute;ration des tissus. Cependant, l&#39;interpr&eacute;tation histologique des tissus post-mortem, sur lequel bon nombre de ces &eacute;tudes sont bas&eacute;s, a r&eacute;cemment &eacute;t&eacute; largement d&eacute;battue.

Imagerie dynamique d&#39;allog&eacute;niques cellules souches m&eacute;senchymateuses, traite de l&#39;infarctus du myocarde.

Dynamische Bildgebung von allogenen mesenchymalen Stammzellen Handel von Myokardinfarkt.

Recenti risultati da studi su animali suggeriscono che le cellule staminali possono essere in grado di casa ai luoghi della ferita del miocardio per aiutare nella rigenerazione dei tessuti. Tuttavia, l&#39;interpretazione istologica di tessuto post-mortem, su cui molti di questi studi si basano, recentemente &egrave; stata ampiamente dibattuta.

Imaging dinamico delle cellule staminali mesenchimali allogeniche traffico per infarto del miocardio.

&#x52D5;&#x7269;&#x7814;&#x7A76;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x30DB;&#x30FC;&#x30E0;&#x7D44;&#x7E54;&#x518D;&#x751F;&#x3092;&#x652F;&#x63F4;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x50B7;&#x5BB3;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x57FA;&#x6E96;&#x3068;&#x3001;&#x6B7B;&#x5F8C;&#x306E;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x5B66;&#x7684;&#x89E3;&#x91C8;&#x6700;&#x8FD1;&#x5E83;&#x304F;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xCD5C;&#xADFC; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC870;&#xC9C1; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC744; &#xC2EC;&#xADFC; &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB85C; &#xD648;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C;&#xD558;&#xB294;, &#xC0AC;&#xD6C4; &#xC870;&#xC9C1; &#xC870;&#xC9C1;&#xD559; &#xD574;&#xC11D; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xB17C;&#xC758; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2EC;&#xADFC; &#xACBD;&#xC0C9;&#xC5D0; &#xBC00;&#xB9E4; allogeneic &#xC911;&#xAC04; &#xC5FD; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;.

Resultados recientes de estudios en animales sugieren que las c&eacute;lulas madre pueden ser capaces de hogar a sitios de lesi&oacute;n mioc&aacute;rdica para ayudar en la regeneraci&oacute;n de los tejidos. Sin embargo, la interpretaci&oacute;n histol&oacute;gica del tejido post mortem, en que muchos de estos estudios se basan, ha recientemente ampliamente debatida.

Proyecci&oacute;n de imagen din&aacute;mica de trasplante alog&eacute;nicas c&eacute;lulas madre mesenquimales con infarto de miocardio.

&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7EC4;&#x6210;&#x548C;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50; DNA nanocomplexes&#xFF0C;&#x7531;&#x51B7;&#x51DD;&#x8D28;&#x7C92; DNA &#x4E0E;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x901A;&#x8FC7;&#x9759;&#x7535;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x547D;&#x8FD0;&#x3002;&#x5408;&#x7406;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F7D;&#x4F53;&#x5C06;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EC5;&#x4E0E;&#x673A;&#x68B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x7684;&#x901F;&#x7387;&#x9650;&#x5236;&#x7684;&#x975E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x7EC4;&#x6210;&#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x52A8;&#x6001;&#x7684; nanocomplexes&#xFF0C;&#x8D28;&#x7C92;&#x4E0E;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x8F7D;&#x4F53;&#x5728; nanocomplexes &#x5185;&#x7684;&#x88AB;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E0E;&#x91CF;&#x5B50;&#x70B9; &#xFF08;&#x91CF;&#x5B50;&#xFF09; &#x548C;&#x6709;&#x673A;&#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x6599;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x4E3A;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x4F9B;&#x3001; &#x53D7;&#x4F53;&#x5BF9;&#x3002;QD &#x4ECB;&#x5BFC;&#x97F3;&#x54C1;&#x7684;&#x9AD8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5230;&#x566A;&#x97F3;&#x6BD4;&#x7387;&#x542F;&#x7528;&#x7CBE;&#x786E;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x7EB3;&#x7C73;&#x72B6;&#x6001;&#x5728;&#x5355;&#x7C92;&#x5B50;&#x4E00;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x9488;&#x5BF9;&#x5404;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x79BB;&#x6563;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x5206;&#x5E03;&#x548C;&#x62C6;&#x5305;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5185;&#x7684; nanocomplexes &#x53EF;&#x80FD;&#x56E0;&#x6B64;&#x6BEB;&#x4E0D;&#x542B;&#x7CCA;&#x5730;&#x8DDF;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;QD &#x97F3;&#x54C1;&#x662F; nanocomplexes &#x7684;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x654F;&#x611F;&#x548C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x786E;&#x5B9A;&#x7EC4;&#x6210;&#x548C;&#x52A8;&#x6001;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4F20;&#x8F93;&#x671F;&#x95F4;&#xFF0C;&#x51E1;&#x53EF;&#x80FD;&#x786E;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F20;&#x9012;&#x969C;&#x788D;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4F18;&#x5316;&#x3002;

&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x548C;&#x62C6;&#x5305;&#x7684; DNA nanocomplexes &#x91CF;&#x5B50;&#x70B9;&#x62C5;&#x5FE7;&#x7684;&#x3002;

We demonstrate a highly sensitive method to characterize the structural composition and intracellular fate of polymeric DNA nanocomplexes, formed by condensing plasmid DNA with cationic polymers through electrostatic interactions. Rational design of more efficient polymeric gene carriers will be possible only with mechanistic insights of the rate-limiting steps in the non-viral gene transfer process. To characterize the composition and binding dynamics of nanocomplexes, plasmid and its polymer carrier within nanocomplexes were labeled with quantum dots (QDs) and fluorescent organic dyes, respectively, as a donor and acceptor pair for fluorescence resonance energy transfer (FRET). The high signal-to-noise ratio in QD-mediated FRET enabled precise detection of discrete changes in nanocomplex state at the single-particle level, against various intracellular microenvironments. The distribution and unpacking of individual nanocomplexes within cells could thus be unambiguously followed by fluorescence microscopy. QD-FRET is a highly sensitive and quantitative method to determine the composition and dynamic stability of nanocomplexes during intracellular transport, where barriers to gene delivery may be identified to facilitate gene carrier optimization.

Evaluating the intracellular stability and unpacking of DNA nanocomplexes by quantum dots-FRET.

Nous d&#xE9;montrons une m&#xE9;thode tr&#xE8;s sensible pour caract&#xE9;riser la composition structurelle et le destin intracellulaire de nanocomplexes ADN polym&#xE8;res, form&#xE9;s par condensation d&#x26;#39;ADN plasmidique avec des polym&#xE8;res cationiques &#xE0; travers des interactions &#xE9;lectrostatiques. Conception rationnelle de plus efficaces porteurs de g&#xE8;nes polym&#xE8;res sera possible uniquement avec les mod&#xE8;les m&#xE9;canistiques des &#xE9;tapes de limitation de vitesse dans le processus de non-virale de transfert de g&#xE8;nes. Pour caract&#xE9;riser la composition et la dynamique de liaison de nanocomplexes, plasmide et son support polym&#xE8;re dans nanocomplexes ont &#xE9;t&#xE9; marqu&#xE9;es avec des points quantiques (BQs) et des colorants organiques fluorescents, respectivement, en tant que donateur et une paire accepteur pour le transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance de fluorescence (FRET). Le rapport signal-bruit dans QD m&#xE9;di&#xE9;e FRET activ&#xE9; d&#xE9;tection pr&#xE9;cise des changements dans l&#x26;#39;&#xE9;tat discr&#xE8;tes nanocomplexe au niveau unique de particules, contre diff&#xE9;rents micro-environnements intracellulaires. La distribution et le d&#xE9;ballage de nanocomplexes individuelles dans les cellules pourraient donc &#xEA;tre clairement suivie par microscopie &#xE0; fluorescence. QD-FRET est une m&#xE9;thode tr&#xE8;s sensible et quantitative afin de d&#xE9;terminer la composition et la stabilit&#xE9; dynamique de nanocomplexes pendant le transport intracellulaire, o&#xF9; les obstacles &#xE0; la livraison de g&#xE8;nes peuvent &#xEA;tre identifi&#xE9;s pour faciliter l&#x26;#39;optimisation porteur du g&#xE8;ne.

&#xC9;valuation de la stabilit&#xE9; intracellulaire et D&#xE9;ballage de nanocomplexes ADN par Quantum Dots-FRET

Wir zeigen eine hochempfindliche Methode, um die strukturelle Zusammensetzung und intrazellul&auml;re Schicksal von Polymeren DNA Nanokomplexe, gebildet durch Kondensation von Plasmid-DNA mit kationischen Polymeren durch elektrostatische Wechselwirkungen charakterisieren. Rationales Design effizienter Polymeren gen-Tr&auml;ger ist nur mit mechanistische Einblicke der geschwindigkeitsbestimmende Schritte in der nicht-virale Gentransfer-&Uuml;bertragung m&ouml;glich. Um die Zusammensetzung und die Bindung Dynamik der Nanokomplexe zu charakterisieren, wurden Plasmid und seine Polymer Frachtf&uuml;hrer Nanokomplexe mit Quantenpunkte (QDs) und fluoreszierende organische Farbstoffe, bzw. als Donor und Akzeptor-Paar f&uuml;r Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer (FRET) bezeichnet. Das hohe Signal-Rausch-Verh&auml;ltnis in QD-vermittelte FRET aktiviert pr&auml;zise Erkennung von diskreten &Auml;nderungen in Nanokomplexe Zustand auf Einzel-Partikel-Ebene gegen verschiedene intrazellul&auml;re Mikroumgebungen. Die Verteilung und Auspacken von einzelnen Nanokomplexe innerhalb von Zellen k&ouml;nnten somit eindeutig Fluoreszenzmikroskopie folgen. QD-Bund ist eine hochempfindliche und quantitative Methode zur Bestimmung der Zusammensetzung und dynamische Stabilit&auml;t des Nanokomplexe beim intrazellul&auml;ren Transport, wo k&ouml;nnen Handelshemmnisse gen Lieferung festgestellt werden, Gen-Tr&auml;ger-Optimierung zu erleichtern.

Bewertung der intrazellul&auml;ren Stabilit&auml;t und Auspacken von DNA Nanokomplexe von Quantum Dots-FRET.

Mostriamo un metodo altamente sensibile per caratterizzare la composizione strutturale e destino intracellulare di polimerico DNA nanocomplexes, formata da condensazione del DNA del plasmide con polimeri cationici attraverso interazioni elettrostatiche. Design razionale dei vettori polimerici gene pi&ugrave; efficienti sar&agrave; possibile solo con intuizioni meccanicistiche degli step tasso che limita il processo di trasferimento del gene non-virale. Per caratterizzare la composizione e le dinamiche di associazione di nanocomplexes, del plasmide e il relativo elemento portante di polimero all&#39;interno di nanocomplexes sono stati etichettati con punti quantici (QDs) e coloranti fluorescenti organici, rispettivamente, come una coppia donatore-accettore per fluorescenza resonance energy transfer (FRET). L&#39;elevato rapporto segnale-rumore in FRET QD-mediata abilitato precisa rilevazione dei cambiamenti discreti nello stato di nanocomplesso a livello di singola particella, contro vari microambienti intracellulare. La distribuzione e disimballaggio dei nanocomplexes individuali all&#39;interno delle cellule potrebbe cos&igrave; essere inequivocabilmente seguite da microscopia di fluorescenza. QD-FRET &egrave; un metodo altamente sensibile e quantitativo per determinare la composizione e la stabilit&agrave; dinamica di nanocomplexes durante il trasporto intracellulare, dove le barriere alla consegna del gene possono essere identificate per facilitare l&#39;ottimizzazione di portatore del gene.

Valutare la stabilit&agrave; intracellulare ed estrazione di DNA nanocomplexes da quantum dots-FRET.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x9759;&#x96FB;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x6027;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;DNA&#x3092;&#x51DD;&#x7E2E;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x7D44;&#x6210;&#x3068;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;DNA nanocomplexes&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x904B;&#x547D;&#x3092;&#x3001;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x5408;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5C0E;&#x5165;&#x904E;&#x7A0B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F8B;&#x901F;&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; nanocomplexes&#x5185;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x3068;nanocomplexes&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30A2;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;FRET&#xFF09;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;QD&#xFF09;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x6709;&#x6A5F;&#x8272;&#x7D20;&#x3067;&#x6A19;&#x8B58;&#x3057;&#x305F;&#x3002; QD-&#x5A92;&#x4ECB;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5BFE;&#x96D1;&#x97F3;&#x6BD4;&#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x7C92;&#x5B50;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x30CA;&#x30CE;&#x8907;&#x5408;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x96E2;&#x6563;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x691C;&#x51FA;&#x3092;FRET&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x500B;&#x3005;&#x306E;nanocomplexes&#x306E;&#x914D;&#x5E03;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5C55;&#x958B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x7D9A;&#x304F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; QD-FRET&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30EA;&#x30FC;&#x3078;&#x306E;&#x969C;&#x58C1;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x9593;&#x3001;nanocomplexes&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x3068;&#x52D5;&#x7684;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x3067;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x3001;&#x91CF;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x308B;DNA Nanocomplexes&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D1;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;-FRET

&#xAD6C;&#xC870; &#xAD6C;&#xC131;&#xACFC; &#xC815;&#xC804;&#xAE30; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38;&#xC640; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; DNA &#xC751;&#xCD95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; DNA nanocomplexes&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC6B4;&#xBA85;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0AC;&#xC5C5;&#xC790;&#xC758; &#xD569;&#xB9AC;&#xC801; &#xC124;&#xACC4; &#xBE44; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC81C;&#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860; &#xC801;&#xC778; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD6C;&#xC131; &#xBC0F; nanocomplexes&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC5ED;&#xD559; &#xD2B9;&#xC131;, &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC640; nanocomplexes &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38; &#xCE90;&#xB9AC;&#xC5B4; &#xD588;&#xB2E4;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5B4; &#xC591;&#xC790; &#xC810; (QDs) &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xC720;&#xAE30; &#xC5FC;&#xB8CC;, &#xAC01;&#xAC01; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; (FRET)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xC640; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; &#xC30D;&#xC73C;&#xB85C;. &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; qd&#xB294; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xC2E0;&#xD638; &#xB300; &#xC7A1;&#xC74C; &#xBE44;&#xC728; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; microenvironments&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC785;&#xC790; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; nanocomplex &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC774;&#xC0B0;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xD0D0;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xD3EC; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBCC4; nanocomplexes&#xC758; &#xC555;&#xCD95;&#xC744; &#xD478;&#xB294; &#xC218; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xB4A4; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;. Qd&#xB294; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC804;&#xC1A1; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xAD6C;&#xC131; &#xBC0F; nanocomplexes&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD558;&#xACE0; &#xC591;&#xC801; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE90;&#xB9AC;&#xC5B4; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC30;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xC7A5;&#xBCBD;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC5B4;&#xB514;.

&#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; DNA nanocomplexes&#xC758; &#xC591;&#xC790; &#xC810; &#xB4E4; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xD558; &#xC5EC; &#xC555;&#xCD95; &#xD480;&#xAE30;.

Se demuestra un m&#xE9;todo altamente sensible para caracterizar la composici&#xF3;n estructural y el destino intracelular de ADN nanocomplexes polim&#xE9;ricos, formado por condensaci&#xF3;n de ADN pl&#xE1;smido con pol&#xED;meros cati&#xF3;nicos a trav&#xE9;s de interacciones electrost&#xE1;ticas. Dise&#xF1;o racional de los portadores del gen m&#xE1;s eficientes polim&#xE9;ricos s&#xF3;lo ser&#xE1; posible con ideas mecanicistas de los pasos de limitaci&#xF3;n de la velocidad en el proceso de genes no virales de transferencia. Para caracterizar la composici&#xF3;n y la din&#xE1;mica de uni&#xF3;n de nanocomplexes, pl&#xE1;smido y su compa&#xF1;&#xED;a de pol&#xED;mero dentro nanocomplexes fueron marcadas con puntos cu&#xE1;nticos (puntos cu&#xE1;nticos) y colorantes fluorescentes org&#xE1;nicos, respectivamente, como donante y aceptor de pares para la transferencia de energ&#xED;a de resonancia fluorescente (FRET). La alta relaci&#xF3;n se&#xF1;al-ruido en QD mediada por FRET habilitada la detecci&#xF3;n precisa de cambios discretos en el estado de nanocomplex en el nivel de una sola part&#xED;cula, en contra de diversos microambientes intracelulares. La distribuci&#xF3;n y el desembalaje de nanocomplexes individuales dentro de c&#xE9;lulas as&#xED; podr&#xED;a ser inequ&#xED;vocamente seguido por microscop&#xED;a de fluorescencia. QD-FRET es un m&#xE9;todo altamente sensible y cuantitativo para determinar la composici&#xF3;n y la estabilidad din&#xE1;mica de nanocomplexes durante el transporte intracelular, donde las barreras a la entrega de genes pueden ser identificados para facilitar la optimizaci&#xF3;n de portador del gen.

La evaluaci&#xF3;n de la estabilidad intracelular y desembalaje de Nanocomplexes de ADN por puntos cu&#xE1;nticos-FRET

&#x91CF;&#x5B50;&#x70B9;-&#x97F3;&#x54C1;&#x4E0D;&#x6269;&#x97F3;&#x7684;&#x6838;&#x9178;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x7EB3;&#x7C73;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x3002;

Quantum-dots-FRET nanosensors for detecting unamplified nucleic acids by single molecule detection.

Quantum dots-frettes nano-capteurs pour la d&eacute;tection des acides nucl&eacute;iques non amplifi&eacute;es par la d&eacute;tection de mol&eacute;cules simples.

Quanten-Punkte-FRET Nanosensoren und zum Erkennen von unverst&auml;rkt Nukleins&auml;uren von Einzelmolek&uuml;l-Erkennung.

Quantum-dots-FRET nanosensori per la rilevazione di acidi nucleici amplificati dal rilevamento di singola molecola.

&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8; &#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8; &#x30CA;&#x30CE;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x5897;&#x5E45;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x6838;&#x9178;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5358;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3002;

&#xC591;&#xC790; &#xC810;&#xC744; FRET nanosensors unamplified &#xD575; &#xC0B0; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790; &#xAC80;&#xCD9C; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC80;&#xCD9C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Quantum-puntos-FRET nanosensores para la detecci&oacute;n de unamplified de &aacute;cidos nucleicos por detecci&oacute;n sola mol&eacute;cula.

&#x975E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x6311;&#x6218;&#x4E86;&#x89E3;&#x673A;&#x68B0;&#x7684;&#x901F;&#x7387;&#x9650;&#x5236;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;&#x5728; polyplex &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x969C;&#x788D;&#x662F;&#x53CA;&#x65F6;&#x6253;&#x5F00;&#x5185;&#x4F7F;&#x76EE;&#x6807;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x9AD8;&#x6548;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x4E3A;&#x89E3;&#x653E; DNA &#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x5305;&#x88C5;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x8D28;&#x7C92; DNA &#x548C;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F7D;&#x4F53;&#x88AB;&#x5355;&#x72EC;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E0E;&#x91CF;&#x5B50;&#x70B9; &#xFF08;&#x91CF;&#x5B50;&#xFF09; &#x548C; Cy5 &#x67D3;&#x6599;&#x3001; &#x5206;&#x522B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x4F9B;&#x3001; &#x53D7;&#x4F53;&#x5BF9;&#x3002;QD &#x4ECB;&#x5BFC;&#x97F3;&#x54C1;&#x7684;&#x9AD8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5230;&#x566A;&#x97F3;&#x6BD4;&#x7387;&#x5728; polyplex &#x7A33;&#x5B9A;&#x4E2D;&#x542F;&#x7528;&#x79BB;&#x6563;&#x53D8;&#x5316;&#x654F;&#x611F;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x5438;&#x6536;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7; QD &#x97F3;&#x54C1;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x89E3;&#x79BB;&#x662F;&#x968F;&#x7740;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x63A8;&#x79FB;&#x6240;&#x62CD;&#x6444;&#x5230;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;&#x4ECE;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x56FE;&#x50CF;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x8FDC;&#x85E4;/&#x6EB6;&#x9176;&#xFF0C;&#x6E38;&#x79BB;&#xFF0C;&#x548C;&#x6838;&#x8F66;&#x53A2;&#x5185;&#x91CA;&#x653E;&#x8D28;&#x7C92;&#x5206;&#x5E03;&#x5F62;&#x6210;&#x6784;&#x5EFA;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E09;&#x5BA4;&#x4E00;&#x9636;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;&#x62C6;&#x5305;&#x7684;&#x58F3;&#x805A;&#x7CD6;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684; Polyplex&#xFF0C;&#x805A;&#x4E59;&#x70EF;&#x4E9A;&#x80FA;&#x548C; polyphosphoramidate &#x88AB;&#x6BD4;&#x8F83;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x53D1;&#x73B0;&#x5173;&#x8054;&#x597D;&#x4E0E;&#x8F6C;&#x67D3;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;QD &#x97F3;&#x54C1;&#x542F;&#x7528;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684; polyplex &#x548C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x56FE;&#x50CF;&#x7684;&#x91CF;&#x5316;&#x662F;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x5B66;&#x4E60;&#x673A;&#x5236;&#x53C2;&#x4E0E; polyplex &#x62C6;&#x5305;&#x548C;&#x8D29;&#x8FD0;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9884;&#x8BA1;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8FD8;&#x5C06;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3002;

&#x5B9A;&#x91CF;&#x6BD4;&#x8F83;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x62C6;&#x5305;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x4ECE;&#x91CF;&#x5B50;&#x70B9;&#x97F3;&#x54C1;&#x6784;&#x9020;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;

A major challenge for non-viral gene delivery is gaining a mechanistic understanding of the rate-limiting steps. A critical barrier in polyplex-mediated gene delivery is the timely unpacking of polyplexes within the target cell to liberate DNA for efficient gene transfer. In this study, the component plasmid DNA and polymeric gene carrier were individually labeled with quantum dots (QDs) and Cy5 dyes, respectively, as a donor and acceptor pair for fluorescence resonance energy transfer (FRET). The high signal-to-noise ratio in QD-mediated FRET enabled sensitive detection of discrete changes in polyplex stability. The intracellular uptake and dissociation of polyplexes through QD-FRET was captured over time by confocal microscopy. From quantitative image-based analysis, distributions of released plasmid within the endo/lysosomal, cytosolic, and nuclear compartments formed the basis for constructing a three-compartment first-order kinetics model. Polyplex unpacking kinetics for chitosan, polyethylenimine, and polyphosphoramidate were compared and found to correlate well with transfection efficiencies. Thus, QD-FRET-enabled detection of polyplex stability combined with image-based quantification is a valuable method for studying mechanisms involved in polyplex unpacking and trafficking within live cells. We anticipate that this method will also aid the design of more efficient gene carriers.

Quantitative comparison of intracellular unpacking kinetics of polyplexes by a model constructed from quantum dot-FRET.

Un d&#xE9;fi majeur pour la livraison de g&#xE8;nes non-virale gagne une compr&#xE9;hension m&#xE9;caniste des &#xE9;tapes de limitation de vitesse. Une barri&#xE8;re critique dans apport de g&#xE8;ne polyplexe &#xE0; m&#xE9;diation est le temps de d&#xE9;ballage de polyplexes dans la cellule cible pour lib&#xE9;rer l&#x26;#39;ADN pour le transfert efficace de g&#xE8;nes. Dans cette &#xE9;tude, l&#x26;#39;ADN plasmidique et composante porteur du g&#xE8;ne ont &#xE9;t&#xE9; polym&#xE8;re &#xE9;tiquet&#xE9;es individuellement avec des points quantiques (BQs) et Cy5 colorants, respectivement, en tant que donateur et une paire accepteur pour le transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance de fluorescence (FRET). Le rapport signal-bruit dans QD-m&#xE9;diation FRET permis la d&#xE9;tection sensible des changements discrets dans la stabilit&#xE9; polyplexe. L&#x26;#39;absorption intracellulaire et la dissociation de polyplexes &#xE0; QD-FRET a &#xE9;t&#xE9; captur&#xE9; au cours du temps par microscopie confocale. De l&#x26;#39;analyse quantitative bas&#xE9;e sur l&#x26;#39;image, les distributions de plasmide a publi&#xE9; dans les compartiments endo / lysosomes, cytosolique et nucl&#xE9;aire a constitu&#xE9; la base pour construire un &#xE0; trois compartiments, premier ordre du mod&#xE8;le cin&#xE9;tique. Polyplex d&#xE9;ballage cin&#xE9;tique de chitosane, poly&#xE9;thyl&#xE8;nimine, et polyphosphoramidate ont &#xE9;t&#xE9; compar&#xE9;s et a trouv&#xE9; une bonne corr&#xE9;lation avec l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de transfection. Ainsi, QD-FRET-enabled de d&#xE9;tection de la stabilit&#xE9; polyplexe combin&#xE9;e avec l&#x26;#39;image bas&#xE9;e sur la quantification est une m&#xE9;thode utile pour &#xE9;tudier les m&#xE9;canismes impliqu&#xE9;s dans polyplexe d&#xE9;ballage et le trafic au sein de cellules vivantes. Nous pr&#xE9;voyons que cette m&#xE9;thode aidera &#xE9;galement la conception des porteurs du g&#xE8;ne plus efficaces.

Comparaison quantitative de la cin&#xE9;tique intracellulaire D&#xE9;ballage de polyplexes par un mod&#xE8;le construit &#xE0; partir de Quantum Dot-FRET

Eine gro&szlig;e Herausforderung f&uuml;r nicht-virale Gentransfer-Lieferung gewinnt eine mechanistische Verst&auml;ndnis der geschwindigkeitsbestimmende Schritte. Eine wichtige Barriere Polyplex-vermittelte gen Lieferung ist die rechtzeitige Auspacken von Polyplexes innerhalb der Zielzelle DNA f&uuml;r effiziente Gentransfer zu befreien. In dieser Studie wurden die Komponente Plasmid-DNA und Polymeren gen Tr&auml;ger individuell mit Quantenpunkte (QDs) und Cy5 Farbstoffe, bzw. als Donor und Akzeptor-Paar f&uuml;r Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer (FRET) bezeichnet. Das hohe Signal-Rausch-Verh&auml;ltnis in QD-vermittelte FRET aktiviert empfindlichen Nachweis von diskreten &Auml;nderungen in Polyplex Stabilit&auml;t. Die intrazellul&auml;re Aufnahme und Dissoziation von Polyplexes durch QD-FRET geriet im Laufe der Zeit confocal Mikroskopie. Aus quantitativen bildbasierte Analyse gebildet Verteilungen von ver&ouml;ffentlichten Plasmid innerhalb der Endo/lysosomale, Zytosolische, nukleare F&auml;cher und die Grundlage f&uuml;r den Bau eines drei-Fach erster Ordnung Kinetik-Modells. Polyplex Auspacken Kinetik f&uuml;r Chitosan, wurden Polyethylenimin und Polyphosphoramidate verglichen und korrelieren gut mit Transfektion Effizienz gefunden. QD-FRET-f&auml;higen Nachweisvon Polyplex Stabilit&auml;t kombiniert mit Image-basierte Quantifizierung deshalb eine wertvolle Methode f&uuml;r einstudieren Mechanismen Polyplex Auspacken und Menschenhandel in lebenden Zellen beteiligt. Wir erwarten, dass diese Methode auch die Gestaltung effizienter gen Tr&auml;ger helfen werden.

Quantitativer Vergleich der intrazellul&auml;ren Auspacken Kinetik der Polyplexes durch ein Modell gebaut von Quantum Dot-FRET.

Una sfida importante per la consegna del gene non-virale sta guadagnando una comprensione meccanicistica dei passi di limitazione della velocit&agrave;. Una barriera critica in consegna polyplex-mediata del gene &egrave; il disimballaggio tempestivo di polyplexes all&#39;interno della cellula bersaglio per liberare il DNA per trasferimento genico efficiente. In questo studio, il DNA del plasmide componente e vettore polimerico gene sono state individualmente etichettati con punti quantici (QDs) e Cy5 coloranti, rispettivamente, come una coppia donatore-accettore per fluorescenza resonance energy transfer (FRET). L&#39;elevato rapporto segnale-rumore in FRET QD-mediata abilitato sensibili rilevazione dei cambiamenti discreti in polyplex stabilit&agrave;. L&#39;uptake intracellulare e la dissociazione del polyplexes attraverso QD-FRET fu catturato nel corso del tempo da microscopia confocal. Dall&#39;analisi quantitativa basata su immagine, distribuzioni di plasmide rilasciato all&#39;interno dell&#39;endo/lisosomiale, citosolica e compartimenti nucleari ha costituito la base per la costruzione di un modello di tre-vano cinetica di primo ordine. Polyplex disimballaggio cinetica per chitosano, polyethylenimine e polyphosphoramidate erano rispetto e trovato per correlare bene con efficienza di trasfezione. Cos&igrave;, QD-FRET-enabled rilevamento di stabilit&agrave; polyplex combinato con quantificazione image-based &egrave; un prezioso metodo per studi i meccanismi coinvolti in polyplex disimballaggio e il traffico all&#39;interno di cellule vive. Anticipiamo che questo metodo sar&agrave; di aiuto anche il disegno dei vettori gene pi&ugrave; efficienti.

Confronto quantitativo della cinetica di disimballaggio intracellulare di polyplexes di un modello costruito da quantum dot-FRET.

&#x975E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x8AB2;&#x984C;&#x306F;&#x3001;&#x5F8B;&#x901F;&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x5F97;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5A92;&#x4ECB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x969C;&#x58C1;&#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;polyplexes&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D1;&#x30C3;&#x30AF;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30EA;&#x30FC;&#x3067;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5C0E;&#x5165;&#x7528;&#x306E;DNA&#x3092;&#x89E3;&#x653E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;DNA&#x3068;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;FRET&#xFF09;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;QD&#xFF09;&#x3068;Cy5&#x8272;&#x7D20;&#x3067;&#x6A19;&#x8B58;&#x3057;&#x305F;&#x3002; QD-&#x5A92;&#x4ECB;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5BFE;&#x96D1;&#x97F3;&#x6BD4;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x96E2;&#x6563;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x306A;&#x691C;&#x51FA;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x305F;FRET&#x3002; QD-FRET&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3068;polyplexes&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x306F;&#x3001;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x304B;&#x3051;&#x3066;&#x6355;&#x7372;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x753B;&#x50CF;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x9060;&#x85E4;/&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3001;&#x6838;&#x306E;&#x533A;&#x753B;&#x5185;&#x3067;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;3&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x4E00;&#x6B21;&#x53CD;&#x5FDC;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AD;&#x30C8;&#x30B5;&#x30F3;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x53CA;&#x3073;polyphosphoramidate&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D1;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x52B9;&#x7387;&#x3068;&#x3088;&#x304F;&#x76F8;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5206;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;QD-FRET&#x5BFE;&#x5FDC;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x200B;&#x200B;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x89E3;&#x51CD;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3084;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3092;&#x652F;&#x63F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x671F;&#x5F85;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x91CF;&#x5B50;-FRET&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;Polyplexes&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x958B;&#x68B1;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F03;

&#xBE44; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xB3C4;&#xC804; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC81C;&#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860; &#xC801;&#xC778; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xC5BB;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. Polyplex &#xC911;&#xC7AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBC29; &#xBCBD;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC774;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; DNA&#xB97C; &#xD574;&#xBC29; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xBAA9;&#xD45C; &#xC140; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; polyplexes&#xC758; &#xC555;&#xCD95;&#xC744; &#xD478;&#xB294; &#xC801;&#xC2DC;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; DNA &#xBC0F; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE90;&#xB9AC;&#xC5B4; &#xD588;&#xB2E4; &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC591;&#xC790; &#xC810; (QDs)&#xC640; Cy5 &#xC5FC;&#xB8CC; &#xAC01;&#xAC01; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; (FRET)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xC640; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; &#xC30D;. &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; qd&#xB294; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xC2E0;&#xD638; &#xB300; &#xC7A1;&#xC74C; &#xBE44;&#xC728; polyplex &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC758; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xAC10;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAE00;&#xADC0;&#xC640; qd&#xB294; FRET&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; polyplexes&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB294; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC774; &#xC9C0;&#xB0A8;&#xC5D0; &#xCCB4;&#xD3EC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC591;&#xC801; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5D4; &#xB3C4;/lysosomal, cytosolic, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD575; &#xAD6C;&#xD68D; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC758; &#xBC30;&#xD3EC;&#xD310; 3 &#xC2E4; 1 &#xCC28; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xBAA8;&#xB378; &#xAD6C;&#xCD95;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xD615;&#xC131;. &#xD0A4;&#xD1A0; &#xC0B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xD480;&#xACE0; Polyplex, polyethylenimine, polyphosphoramidate &#xBE44;&#xAD50; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; transfection &#xD6A8;&#xC728; &#xC798; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; polyplex &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC758; qd&#xB294; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC10;&#xC9C0; &#xACF5;&#xBD80; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; polyplex &#xD480;&#xACE0; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC00;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95; &#xB610;&#xD55C; &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0AC;&#xC5C5;&#xC790;&#xC758; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC744; &#xC6D0;&#xC870; &#xC608;&#xC0C1;.

Polyplexes &#xC591;&#xC790; &#xB3C4;&#xD2B8;-&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC555;&#xCD95; &#xD480;&#xAE30; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC758; &#xC591;&#xC801; &#xBE44;&#xAD50;.

Un gran desaf&#xED;o para la entrega de genes no virales est&#xE1; ganando una comprensi&#xF3;n mecanicista de los pasos limitaci&#xF3;n de la velocidad. Una barrera fundamental en la entrega de genes Polyplex mediada es el tiempo de desempacar polyplexes dentro de la c&#xE9;lula diana para liberar el ADN para la transferencia g&#xE9;nica eficiente. En este estudio, el componente de ADN pl&#xE1;smido portador del gen y el pol&#xED;mero fueron etiquetados individualmente con los puntos cu&#xE1;nticos (puntos cu&#xE1;nticos) y colorantes Cy5, respectivamente, como donante y aceptor de pares para la transferencia de energ&#xED;a de resonancia fluorescente (FRET). La alta relaci&#xF3;n se&#xF1;al-ruido en QD mediada por FRET permitido la detecci&#xF3;n sensible de los cambios discretos en la estabilidad Polyplex. La captaci&#xF3;n intracelular y la disociaci&#xF3;n de polyplexes trav&#xE9;s de QD-FRET fue capturado en el tiempo por microscop&#xED;a confocal. Desde el an&#xE1;lisis cuantitativo basado en im&#xE1;genes, las distribuciones de libertad pl&#xE1;smido dentro de los compartimientos endo / lisosomal, citos&#xF3;lica y nuclear fue la base para la construcci&#xF3;n de un compartimiento de tres de primer orden modelo cin&#xE9;tico. Polyplex desembalaje cin&#xE9;tica para quitosano, polietilenimina y polyphosphoramidate se compararon y se encontr&#xF3; que se correlacionan bien con eficacias de transfecci&#xF3;n. Por lo tanto, QD-FRET habilitado para la detecci&#xF3;n de la estabilidad Polyplex combinado con la imagen basada en la cuantificaci&#xF3;n es un m&#xE9;todo valioso para el estudio de mecanismos implicados en Polyplex desembalaje y el tr&#xE1;fico dentro de las c&#xE9;lulas vivas. Anticipamos que este m&#xE9;todo tambi&#xE9;n ayuda el dise&#xF1;o de los portadores del gen m&#xE1;s eficientes.

Comparaci&#xF3;n cuantitativa de la cin&#xE9;tica intracelular de desembalaje de polyplexes por un modelo construido a partir de Quantum Dot-FRET

&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x91CF;&#x5B50;&#x70B9;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; (QD &#x97F3;&#x54C1;) &#x65B0;&#x578B;&#x6536;&#x655B;&#x548C;&#x5FAE;&#x6D41;&#x4F53;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x54EA;&#x4E9B;&#x5206;&#x5B50;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x88AB;&#x7CBE;&#x786E;&#x5730;&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x76D1;&#x6D4B;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x91CF;&#x5B50;&#x70B9;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x97F3;&#x54C1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5176;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x81EA;&#x7EC4;&#x88C5;&#x7684;&#x5C42;&#x6D41;&#x5B9E;&#x65F6;&#x6BEB;&#x79D2;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x4E0B; DNA &#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;&#x7EB3;&#x7C73;&#x5149;&#x7535;&#x548C;&#x5FAE;&#x6D41;&#x4F53;&#x7684;&#x4E00;&#x4F53;&#x5316;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x7528;&#x4E8E;&#x9610;&#x53D1;&#x7684;&#x805A;&#x7535;&#x89E3;&#x8D28;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x9884;&#x8BA1;&#x5C06;&#x4E3A;&#x672A;&#x6765;&#x7684;&#x6838;&#x9178;&#x7597;&#x6CD5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x66F4;&#x597D;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x7EDF;&#x4E00;&#x548C;&#x53EF;&#x5B9A;&#x5236;&#x7684;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x5F3A;&#x5927;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x4ECB;&#x5BFC;&#x91CF;&#x5B50;&#x70B9;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x548C;&#x5FAE;&#x6D41;&#x4F53;&#x76D1;&#x6D4B; DNA polyplex &#x81EA;&#x7EC4;&#x88C5;&#x5728;&#x5B9E;&#x65F6;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x3002;

We present a novel convergence of quantum-dot-mediated fluorescence resonance energy transfer (QD-FRET) and microfluidics, through which molecular interactions were precisely controlled and monitored using highly sensitive quantum-dot-mediated FRET. We demonstrate its potential in studying the kinetics of self-assembly of DNA polyplexes under laminar flow in real time with millisecond resolution. The integration of nanophotonics and microfluidics offers a powerful tool for elucidating the formation of polyelectrolyte polyplexes, which is expected to provide better control and synthesis of uniform and customizable polyplexes for future nucleic acid-based therapeutics.

The convergence of quantum-dot-mediated fluorescence resonance energy transfer and microfluidics for monitoring DNA polyplex self-assembly in real time.

Nous pr&#xE9;sentons une convergence in&#xE9;dite de points quantiques &#xE0; m&#xE9;diation transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance de fluorescence (QD-FRET) et de la microfluidique, &#xE0; travers lequel les interactions mol&#xE9;culaires ont &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;cis&#xE9;ment contr&#xF4;l&#xE9; et surveill&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;aide tr&#xE8;s sensible des points quantiques &#xE0; m&#xE9;diation FRET. Nous d&#xE9;montrons son potentiel dans l&#x26;#39;&#xE9;tude de la cin&#xE9;tique de l&#x26;#39;auto-assemblage de polyplexes ADN sous flux laminaire en temps r&#xE9;el avec milliseconde. L&#x26;#39;int&#xE9;gration de la nanophotonique et la microfluidique offre un outil puissant pour &#xE9;lucider la formation des polyplexes poly&#xE9;lectrolytes, qui est cens&#xE9; assurer un meilleur contr&#xF4;le et une synth&#xE8;se des polyplexes uniformes et personnalisable pour les futures base d&#x26;#39;acides nucl&#xE9;iques th&#xE9;rapeutiques.

La convergence de Quantum-dot-m&#xE9;di&#xE9;e de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance de fluorescence et la microfluidique pour Polyplex ADN de surveillance auto-assemblage en temps r&#xE9;el

Pr&auml;sentieren wir Ihnen eine neuartige Konvergenz der Quantum-Dot-vermittelter Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer (QD-FRET) und Microfluidics, durch welche molekularen Wechselwirkungen waren genau gesteuert und &uuml;berwacht mit hochsensiblen Quantum-Dot-vermittelte FRET. Wir zeigen ihr Potential in die Kinetik der Selbstorganisation von DNA Polyplexes unter Laminar-Flow in Echtzeit mit einer Millisekunde Aufl&ouml;sung zu studieren. Die Integration der Nanophotonik und Mikrofluidik bietet ein leistungsf&auml;higes Werkzeug f&uuml;r die elucidating der Bildung von Polyelectrolyte Polyplexes, die erwartet wird, um bessere Kontrolle und Synthese von einheitlichen und anpassbare Polyplexes f&uuml;r zuk&uuml;nftige Nukleins&auml;ure-basierten Therapeutika bereitzustellen.

Die Konvergenz der Quantum-Dot-vermittelter Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer und Biochips zur &Uuml;berwachung der DNA Polyplex Selbstmontage in Echtzeit.

Vi presentiamo una romanzo convergenza di fluorescenza quantum-dot-mediata resonance energy transfer (QD-FRET) e microfluidica, attraverso la quale le interazioni molecolari sono stati precisamente controllato e monitorato tramite altamente sensibili FRET-quantum-dot-mediata. Dimostriamo le sue potenzialit&agrave; per studiare la cinetica di autoassemblaggio di DNA polyplexes sotto flusso laminare in tempo reale con risoluzione di millisecondo. L&#39;integrazione di nanofotonica e microfluidics offre un potente strumento per chiarire la formazione di polielettrolita polyplexes, che &egrave; previsto per fornire il migliore controllo e sintesi della polyplexes uniforme e personalizzabile per future terapie basate su acidi nucleici.

La convergenza tra il trasferimento di energia di risonanza di fluorescenza quantum-dot-mediata e microfluidica per monitoraggio polyplex DNA auto-assemblaggio in tempo reale.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x7CBE;&#x5BC6;&#x306B;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x3001;&#x6A5F;&#x5BC6;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;FRET&#x306E;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x76E3;&#x8996;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;QD-FRET&#xFF09;&#x3068;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A4;&#x30C7;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x53CE;&#x675F;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30EA;&#x79D2;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3067;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x306B;&#x5C64;&#x6D41;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;DNA polyplexes&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CA;&#x30CE;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30CB;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A4;&#x30C7;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x6838;&#x9178;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D71;&#x4E00;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30DE;&#x30A4;&#x30BA;polyplexes&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x826F;&#x3044;&#x5236;&#x5FA1;&#x3068;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x671F;&#x5F85;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x96FB;&#x89E3;&#x8CEA;polyplexes&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x3067;&#x306E;DNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x3068;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A4;&#x30C7;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x53CE;&#x675F;

&#xC120;&#xBB3C;&#xC774; &#xC591;&#xC790; &#xB3C4;&#xD2B8; &#xC911;&#xC7AC; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; (qd&#xB294;-&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;)&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC735;&#xD569; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; microfluidics &#xD588;&#xB2E4; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558; &#xACE0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC591;&#xC790; &#xC810;&#xC774; &#xC911;&#xC7AC; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; DNA polyplexes &#xBC00;&#xB9AC;&#xCD08; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xC640; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04;&#xC73C;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB958;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC790;&#xAE30; &#xC870;&#xB9BD;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80;&#xC5D0; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC785;&#xC99D;. Nanophotonics &#xD1B5;&#xD569; microfluidics elucidating &#xBBF8;&#xB798;&#xC758; &#xD575; &#xC0B0; &#xAE30;&#xBC18; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB354; &#xB098;&#xC740; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBC0F; &#xADE0;&#xC77C; &#xD558; &#xACE0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC790; &#xC9C0;&#xC815; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; polyplexes&#xC758; &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC608;&#xC815; &#xC774;&#xB2E4; &#xC804;&#xD574;&#xC9C8; polyplexes&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC591;&#xC790; &#xB3C4;&#xD2B8; &#xC911;&#xC7AC; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; &#xBC0F; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04;&#xC73C;&#xB85C; &#xC790;&#xAE30; &#xC870;&#xB9BD; DNA polyplex microfluidics&#xC758; &#xC735;&#xD569;.

Se presenta una convergencia de la novela de puntos cu&#xE1;nticos-mediada por la transferencia de energ&#xED;a de resonancia fluorescente (FRET-QD) y la microflu&#xED;dica, a trav&#xE9;s del cual las interacciones moleculares fueron controlados con precisi&#xF3;n y vigila por medio de alta sensibilidad de puntos cu&#xE1;nticos mediada por FRET. Nos demuestran su potencial en el estudio de la cin&#xE9;tica de auto-ensamblaje de polyplexes de ADN bajo flujo laminar en tiempo real con resoluci&#xF3;n de milisegundos. La integraci&#xF3;n de la nanofot&#xF3;nica y la microflu&#xED;dica ofrece una herramienta poderosa para dilucidar la formaci&#xF3;n de polyplexes polielectrolitos, que se espera de un mejor control y s&#xED;ntesis de polyplexes uniforme y personalizable para los futuros basados &#x200B;&#x200B;en el &#xE1;cido nucleico-terap&#xE9;uticos.

La convergencia de los puntos cu&#xE1;nticos-mediada por la transferencia y la energ&#xED;a de resonancia fluorescente microflu&#xED;dica para Polyplex el control de ADN auto-ensamblado en tiempo real

&#x7EB3;&#x7C73;&#x8F7D;&#x4F53; DNA &#x6D53;&#x7F29;&#x5230;&#x7A97;&#x4F53; nanocomplexes &#x7684;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x7EC4;&#x6210;&#x662F;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3002;&#x66F4;&#x9AD8;&#x6548;&#x7684;&#x975E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x5408;&#x7406;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EC5;&#x4EE5;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x673A;&#x68B0;&#x7406;&#x89E3;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x901F;&#x7387;&#x9650;&#x5236;&#x6B65;&#x9AA4;&#xFF0C;&#x5982;&#x6253;&#x5F00;&#x5305;&#x88C5;&#x7684;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x91CA;&#x653E; DNA &#x548C;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x7EB3;&#x7C73;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E24;&#x6B65;&#x91CF;&#x5B50;&#x70B9;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; (&#x4E24;&#x6B65; QD-&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x540C;&#x65F6;&#x548C;&#x65E0;&#x635F;&#x5206;&#x6790;&#x65B9;&#x6CD5; DNA &#x51DD;&#x805A;&#x548C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x8D28;&#x7C92; DNA&#xFF0C;&#x53CC;&#x6807;&#x6709; QD (525 nm &#x6392;&#x653E;) &#x548C;&#x6838;&#x9178;&#x67D3;&#x6599;&#x662F;&#x7EDC;&#x5408;&#x4E0E; Cy5 &#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;QD &#x6350;&#x52A9;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E2D;&#x95F4;&#x6838;&#x9178;&#x67D3;&#x6599;&#x9010;&#x6B65;&#x5230;&#x6700;&#x540E;&#x627F;&#x5151; Cy5 &#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3002;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684; DNA &#x51DD;&#x7ED3;&#x548C;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6548;&#x7387;&#x5B9A;&#x91CF;&#x8BA1;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6765;&#x533A;&#x5206;&#x5355;&#x4E2A;&#x7C92;&#x5B50;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5185;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x6B65;&#x6CD5; QD &#x97F3;&#x54C1;&#x540C;&#x65F6;&#x5141;&#x8BB8;&#x8FDB;&#x884C;&#x66F4;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684; DNA &#x91CA;&#x653E;&#x548C;&#x964D;&#x89E3;&#x53D1;&#x75C5;&#x3002;

&#x540C;&#x65F6;&#x975E;&#x4FB5;&#x88AD;&#x6027;&#x5206;&#x6790; DNA &#x51DD;&#x805A;&#x548C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x4E24;&#x6B65;&#x6CD5; QD &#x97F3;&#x54C1;&#x3002;

Nanoscale vectors comprised of cationic polymers that condense DNA to form nanocomplexes are promising options for gene transfer. The rational design of more efficient nonviral gene carriers will be possible only with better mechanistic understanding of the critical rate-limiting steps, such as nanocomplex unpacking to release DNA and degradation by nucleases. We present a two-step quantum dot fluorescence resonance energy transfer (two-step QD-FRET) approach to simultaneously and non-invasively analyze DNA condensation and stability. Plasmid DNA, double-labeled with QD (525 nm emission) and nucleic acid dyes, were complexed with Cy5-labeled cationic gene carriers. The QD donor drives energy transfer stepwise through the intermediate nucleic acid dye to the final acceptor Cy5. At least three distinct states of DNA condensation and integrity were distinguished in single particle manner and within cells by quantitative ratiometric analysis of energy transfer efficiencies. This novel two-step QD-FRET method allows for more detailed assessment of the onset of DNA release and degradation simultaneously.

Simultaneous Non-invasive Analysis of DNA Condensation and Stability by Two-step QD-FRET.

Vecteurs nanom&#xE9;triques compos&#xE9; de polym&#xE8;res cationiques que l&#x26;#39;ADN se condensent pour nanocomplexes forme sont des options prometteuses pour le transfert de g&#xE8;nes. La conception rationnelle de plus efficaces porteurs de g&#xE8;nes non viraux sera possible qu&#x26;#39;avec une meilleure compr&#xE9;hension m&#xE9;caniste des critiques de limitation de vitesse des mesures, comme nanocomplexe d&#xE9;ballage pour lib&#xE9;rer l&#x26;#39;ADN et de la d&#xE9;gradation par les nucl&#xE9;ases. Nous pr&#xE9;sentons une &#xE0; deux &#xE9;tapes de points quantiques de fluorescence par r&#xE9;sonance de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie (en deux &#xE9;tapes QD-FRET) approche &#xE0; la fois et de fa&#xE7;on non invasive d&#x26;#39;analyser la condensation de l&#x26;#39;ADN et la stabilit&#xE9;. L&#x26;#39;ADN plasmidique, double-&#xE9;tiquet&#xE9;s avec QD (525 nm d&#x26;#39;&#xE9;mission) et des colorants acides nucl&#xE9;iques, ont &#xE9;t&#xE9; complex&#xE9; avec Cy5-&#xE9;tiquet&#xE9;s porteurs du g&#xE8;ne cationiques. Le donneur QD entra&#xEE;ne un transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par &#xE9;tapes &#xE0; travers le colorant acide nucl&#xE9;ique interm&#xE9;diaire pour l&#x26;#39;accepteur final Cy5. Au moins trois &#xE9;tats distincts de la condensation de l&#x26;#39;ADN et l&#x26;#39;int&#xE9;grit&#xE9; ont &#xE9;t&#xE9; distingu&#xE9;s d&#x26;#39;une mani&#xE8;re unique de particules et &#xE0; l&#x26;#39;int&#xE9;rieur des cellules par l&#x26;#39;analyse quantitative de l&#x26;#39;efficacit&#xE9; ratiom&#xE9;trique de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie. Ce roman en deux &#xE9;tapes QD-FRET m&#xE9;thode permet une appr&#xE9;ciation plus d&#xE9;taill&#xE9;e de l&#x26;#39;apparition de la lib&#xE9;ration de l&#x26;#39;ADN et la d&#xE9;gradation simultan&#xE9;ment.

Simultan&#xE9;e analyse non invasive de la condensation de l&#x26;#39;ADN et de stabilit&#xE9; en deux &#xE9;tapes QD-FRET

Nanoskalige Vektoren bestehend aus kationische Polymere, die DNA in Form Nanokomplexe kondensieren sind vielversprechende Optionen Gentransfer. Das rationale Design von effizienter nonviral gen-Tr&auml;gern ist nur mit besser mechanistische Verst&auml;ndnis der kritischen geschwindigkeitsbestimmende Schritte, wie Nanokomplexe Auspacken um DNA und Abbau von Nukleasen Version m&ouml;glich. Wir pr&auml;sentieren einen zweistufigen Quantum Dot Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer (zweistufiger QD-FRET) Ansatz gleichzeitig und nicht-invasiv Analyse DNA-Kondensation und Stabilit&auml;t. Plasmid-DNA, Doppel-beschriftet mit QD (525 nm Emission) und Nukleins&auml;ure-Farbstoffe, komplexiert mit kationischen gen Cy5 beschriftet wurden. Der QD-Spender Laufwerke Energietransfer schrittweise durch die Mittelstufe Nukleins&auml;ure-Farbstoff auf der endg&uuml;ltigen Akzeptor Cy5. Mindestens drei verschiedene Staaten von DNA-Kondensation und Integrit&auml;t wurden in einzelne Teilchen Weise und innerhalb der Zellen durch quantitative ratiometrisch Analyse der &Uuml;bertragung Energieeffizienz ausgezeichnet. Diese neuartigen zweistufigen QD-FRET-Methode erm&ouml;glicht gleichzeitig eine eingehendere Beurteilung des Eintritts der DNA-Release und Abbau.

Simultane nichtinvasive Analyse von DNA-Kondensation und Stabilit&auml;t von zweistufigen QD-FRET.

Vettori su scala nanometrica composto di polimeri cationici che condensano il DNA a forma nanocomplexes sono promettenti le opzioni per il trasferimento genico. Il design razionale dei vettori virali gene pi&ugrave; efficienti sar&agrave; possibile solo con la migliore comprensione meccanicistica i passaggi di limitazione della velocit&agrave; critica, come nanocomplesso disimballaggio per rilasciare DNA e degrado dalle nucleasi. Vi presentiamo un quantum dot fluorescenza risonanza energia trasferimento (QD-FRET in due fasi) approccio in due fasi per analizzare simultaneamente e non-invasivo stabilit&agrave; e condensazione del DNA. DNA del plasmide, double-etichettato con QD (emissione 525 nm) e coloranti acidi nucleici, sono stati complessati con vettori gene cationico Cy5-etichettati. Il donatore QD unit&agrave; trasferimento di energia graduale attraverso il colorante acido nucleico intermedio per l&#39;accettore finale Cy5. Almeno tre distinti stati di condensazione del DNA e l&#39;integrit&agrave; si distinguevano in maniera singola particella e all&#39;interno delle cellule per analisi quantitativa raziometrici delle efficienze di trasferimento di energia. Questo metodo QD-FRET romanzo in due fasi permette una valutazione pi&ugrave; dettagliata dell&#39;insorgere del rilascio di DNA e di degradazione simultaneamente.

Simultanea analisi Non invasiva di condensazione del DNA e la stabilit&agrave; di due fasi QD-FRET.

&#x30CA;&#x30CE;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;nanocomplexes&#x306B;&#x51DD;&#x7E2E;DNA&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5C0E;&#x5165;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x30AA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x6027;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x975E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x5408;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306F;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5236;&#x9650;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;DNA&#x3084;&#x52A3;&#x5316;&#x3092;&#x89E3;&#x653E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x89E3;&#x51CD;&#x30CA;&#x30CE;&#x8907;&#x5408;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x826F;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x307F;&#x53EF;&#x80FD;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x975E;&#x4FB5;&#x8972;&#x7684;DNA&#x51DD;&#x7E2E;&#x3068;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;2&#x6BB5;QD-FRET&#xFF09;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;DNA&#x3001;QD&#xFF08;525 nm&#x306E;&#x767A;&#x5149;&#xFF09;&#x3068;&#x6838;&#x9178;&#x8272;&#x7D20;&#x3067;&#x4E8C;&#x91CD;&#x6A19;&#x8B58;&#x306F;&#x3001;Cy5&#x6A19;&#x8B58;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30A2;&#x3068;&#x8907;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; QD&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;Cy5&#x306B;&#x4E2D;&#x9593;&#x306E;&#x6838;&#x9178;&#x67D3;&#x6599;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x6BB5;&#x968E;&#x7684;&#x306A;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; DNA&#x306E;&#x51DD;&#x7E2E;&#x6027;&#x3068;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;3&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x72B6;&#x614B;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x4F1D;&#x9054;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x30EC;&#x30B7;&#x30AA;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x5F62;&#x3067;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x533A;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306F;&#x4E8C;&#x6BB5;QD-FRET&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;DNA&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x52A3;&#x5316;&#x306E;&#x767A;&#x75C7;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x8A55;&#x4FA1;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C4;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;QD-FRET&#x306B;&#x3088;&#x308B;DNA&#x51DD;&#x7E2E;&#x3068;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x975E;&#x4FB5;&#x8972;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;

&#xC591;&#xC2DD; nanocomplexes&#xC5D0; DNA&#xB97C; &#xC751;&#xCD95; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xB098;&#xB178; &#xBCA1;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xC635;&#xC158;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; nonviral &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0AC;&#xC5C5;&#xC790;&#xC758; &#xD569;&#xB9AC;&#xC801; &#xC124;&#xACC4; &#xAE30;&#xACC4; &#xC774;&#xD574; &#xB354; &#xB098;&#xC740; nanocomplex nucleases&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; DNA&#xC640; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xD480;&#xACE0; &#xAC19;&#xC740; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC81C;&#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xC591;&#xC790; &#xC810; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; (2 &#xB2E8;&#xACC4; qd&#xB294;-&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC811;&#xADFC;-invasively&#xC640; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; DNA &#xC751;&#xCD95; &#xBC0F; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC81C;&#xC2DC;. &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; DNA, qd&#xB294; &#xC774;&#xC911; &#xD45C;&#xC2DC; (525 nm &#xBC30;&#xCD9C;) &#xD575; &#xC0B0; &#xC5FC;&#xB8CC; complexed &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC720;&#xC804;&#xC790; Cy5 &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xD56D;&#xACF5;&#xC0AC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD588;&#xB2E4;. Qd&#xB294; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xCD5C;&#xC885; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; Cy5 stepwise &#xC911;&#xAC04; &#xD575; &#xC0B0; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574;. DNA &#xC751;&#xCD95; &#xBC0F; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;&#xC758; 3 &#xAC00;&#xC9C0; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB294; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; &#xD6A8;&#xC728;&#xC758; &#xC591;&#xC801; &#xBE44;&#xC728; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC785;&#xC790; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC0F; &#xC140; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xBCC4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC18C;&#xC124;&#xC740; 2 &#xB2E8;&#xACC4; qd&#xB294; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; DNA &#xC790;&#xB8CC;&#xC640; &#xC800;&#xD558; &#xBC1C;&#xBCD1;&#xC758; &#xB354; &#xC790;&#xC138;&#xD55C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB300; &#xD55C; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

DNA &#xC751;&#xCD95; &#xBC0F; 2 &#xB2E8;&#xACC4; qd&#xB294; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xD558; &#xC5EC; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xBE44; &#xCE68;&#xB7B5; &#xC801; &#xBD84;&#xC11D;.

Vectores nanoescala compuesto de pol&#xED;meros cati&#xF3;nicos que el ADN se condensan para formar nanocomplexes son opciones promisorias para la transferencia de genes. El dise&#xF1;o racional de los portadores de genes no virales m&#xE1;s eficientes s&#xF3;lo ser&#xE1; posible con la comprensi&#xF3;n mecanicista de los mejores cr&#xED;ticos de limitaci&#xF3;n de la velocidad los pasos, como nanocomplex desembalaje para liberar el ADN y la degradaci&#xF3;n por nucleasas. Se presenta una de dos pasos de puntos cu&#xE1;nticos de fluorescencia de resonancia de transferencia de energ&#xED;a (en dos etapas QD-FRET) enfoque para analizar de forma simult&#xE1;nea y no invasiva la condensaci&#xF3;n del ADN y la estabilidad. El ADN del pl&#xE1;smido, de doble etiquetado con QD (525 nm de emisi&#xF3;n) y colorantes de &#xE1;cidos nucleicos, se complejado con Cy5 marcado portadores del gen cati&#xF3;nicos. El donante QD impulsa la transferencia de energ&#xED;a por pasos a trav&#xE9;s del tinte &#xE1;cido nucleico intermedio para el aceptor final Cy5. Por lo menos tres estados distintos de condensaci&#xF3;n del ADN y la integridad fueron distinguidos en forma de part&#xED;culas individuales y dentro de las c&#xE9;lulas mediante el an&#xE1;lisis cuantitativo radiom&#xE9;trica de las eficiencias de transferencia de energ&#xED;a. Esta novela de dos pasos QD-FRET m&#xE9;todo permite una evaluaci&#xF3;n m&#xE1;s detallada del comienzo de la liberaci&#xF3;n y la degradaci&#xF3;n del ADN de forma simult&#xE1;nea.

Simult&#xE1;nea an&#xE1;lisis no invasivo de la condensaci&#xF3;n del ADN y la estabilidad de dos pasos QD-FRET

&#x53CC;&#x654F;&#x611F;&#x80F6;&#x675F;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7BA1;&#x5236; DNA &#x89E3;&#x5305;&#x548C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F20;&#x9012;&#x6548;&#x7387;&#x3002;

Dual-sensitive micellar nanoparticles regulate DNA unpacking and enhance gene-delivery efficiency.

Les nanoparticules micellaires double-sensibles R&#xE9;glementer l&#x26;#39;ADN D&#xE9;ballage et am&#xE9;liorer l&#x26;#39;efficacit&#xE9; Gene-livraison

Dual-Sensitive Mizellares Nanopartikel regulieren DNA Auspacken und Effizienzsteigerung von Gen-Lieferung.

Dual-sensibili micellare nanoparticelle regolano estrazione del DNA e migliorano l&#39;efficienza gene-consegna.

&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x654F;&#x611F;&#x30DF;&#x30BB;&#x30EB;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x958B;&#x68B1;DNA&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3057;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;

&#xB4C0;&#xC5BC; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; micellar &#xB098;&#xB178; DNA&#xB97C; &#xD480;&#xACE0; &#xC870;&#xC808; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xB2EC; &#xD6A8;&#xC728;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1;.

Hunter H. Chen

Biomedical Engineering

Duke University

Combining QD-FRET and Microfluidics to Monitor DNA Nanocomplex Self-Assembly in Real-Time