Zakres naszych badań obejmuje modelową dolichoektazję w transgenicznym modelu myszy, aby zobaczyć maksymalny wpływ, jaki zmiany naczyniowe mają na patologię choroby Alzheimera. Jesteśmy w stanie wykazać, że pojedyncza dawka wstrzyknięcia elastazy do cisterna magna myszy może spowodować rozszerzenie do trzech miesięcy. Niewiele wiadomo o osobach, które cierpią zarówno na demencję naczyniową, jak i chorobę Alzheimera.
Mamy nadzieję, że uda nam się wypełnić tę lukę, powodując zmiany naczyniowe w tych transgenicznych modelach myszy, aby spróbować zrozumieć patogenezę tej formy demencji mieszanej. Wcześniejsze badania wykazały, że dylatacja trwa do dwóch tygodni. W naszym badaniu wykazaliśmy, że poszerzenie utrzymuje się do trzech miesięcy z niską śmiertelnością podczas naszego zabiegu chirurgicznego.
Udane poszerzenie dużego naczynia krwionośnego w modelu myszy transgenicznej daje nam możliwość przetestowania leków zapobiegających lub poprawiających zmiany naczyniowe w chorobie Alzheimera. Na początek umieść znieczuloną mysz na świeżej serwety chirurgicznej. Nałóż maść okulistyczną na oko zwierzęcia, aby zapobiec wysuszeniu.
Następnie wstrzyknąć metacam, a następnie 0,5 ml soli fizjologicznej podskórnie do myszy. Ogol szyję myszy u podstawy kości potylicznej i przetrzyj powierzchnię sterylnym PBS. Przenieś mysz do ramki stereotaktycznej w pozycji leżącej.
Umieść pasek na nos z ramki stereotaktycznej na górze myszy, aby zapewnić stabilność i upewnić się, że górne zęby są zamocowane. Ustaw głowę zwierzęcia pod kątem 120 stopni od ciała, aby podnieść i rozciągnąć kark. Następnie za pomocą sterylnej gazy oczyść miejsce operowane trzykrotnie peelingiem Betadine i 70% etanolem.
Następnie przetrzyj raz roztworem Betadyne. Za pomocą skalpela wykonaj małe 1 cm nacięcie. Ostrożnie przesuń skalpel wzdłuż linii środkowej, aby przeciąć mięśnie.
Za pomocą kleszczy delikatnie rozsuń mięśnie w lewo i w prawo, a następnie załaduj do strzykawki Hamilton 2,5 l elastazy, unikając pęcherzyków powietrza. Powoli włożyć strzykawkę skosem skierowanym do góry w środek cisterna magna. Po nakłuciu ostrożnie wycofaj skos, aby ułatwić uwolnienie niewielkiej ilości płynu mózgowo-rdzeniowego lub płynu mózgowo-rdzeniowego.
Następnie ponownie włóż skos do miejsca nakłucia i powoli wstrzyknij elastazę lub nośnik do cysterny magna, pozostawiając igłę na miejscu na jedną minutę, aby zapobiec wyciekowi elastazy. Po usunięciu skosu należy zamknąć miejsce nacięcia niewchłanialnym szwem chirurgicznym i wyłączyć znieczulenie. Wyjmij zwierzę z ramki stereotaktycznej i umieść je na poduszce grzewczej o temperaturze 37 C, aż mysz wyzdrowieje.
Na początek umieść znieczuloną mysz na chłonnym podkładzie lub pieluszce. Ściśnij palec myszy u nogi, aby potwierdzić ustanie odruchów. Za pomocą taśmy chirurgicznej zabezpiecz wszystkie kończyny z jamą klatki piersiowej skierowaną do góry.
Za pomocą pęsety i nożyczek ostrożnie otwórz jamę klatki piersiowej, aby odsłonić serce. Włóż igłę o rozmiarze 23 do lewej komory serca w celu perfuzji. Następnie wymieszać 5 ml roztworu mieszanki kauczuku silikonowego z 5 ml rozcieńczalnika w probówce o pojemności 50 ml.
Za pomocą igły połączonej z wężem o rozmiarze 23 wstrzyknij 10 ml zmieszanego związku do serca. Następnego dnia za pomocą cienkiej pęsety delikatnie usuń czaszkę myszy i umieść wyekstrahowany mózg w 4% paraformaldehydzie w temperaturze pokojowej. Po 24-godzinnej inkubacji umyj mózg trzy razy w PBS i przechowuj go w 30% sacharozie w temperaturze 4 C. Piktogramy mózgów zilustrowały powiększenie tętnicy podstawnej i zwiększoną krętość wokół koła Willisa po wstrzyknięciu elastazy w porównaniu z grupą kontrolną PBS.
W porównaniu z grupą kontrolną leczoną PBS, po pojedynczym wstrzyknięciu elastazy do cisterna magna trzymiesięcznych myszy zaobserwowano znaczne rozszerzenie naczyń krwionośnych, które utrzymywało się przez trzy miesiące.
