Mutagenesis and Analysis of Genetic Mutations in the GC-rich KISS1 Receptor Sequence Identified in Humans with Reproductive Disorders

The kisspeptin receptor (KISS1R) is a G protein-coupled receptor recognized as the trigger of puberty and a regulator of reproductive competence in ...

University of Miami Miller School of Medicine

&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x8C03;&#x67E5; Arg386Pro &#x7A81;&#x53D8;&#x5982;&#x4F55;&#x5EF6;&#x957F; kisspeptin&#xFF0C;&#x8D21;&#x732E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E2D;&#x67A2;&#x6027;&#x6027;&#x65E9;&#x719F;&#x7684;&#x543B;-1 &#x53D7;&#x4F53; (KISS1R) &#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x5171;&#x7126;&#x6210;&#x50CF;&#x4E0E;&#x6301;&#x7EED;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x8FBE; 5 h &#x4E3A;&#x819C;&#x6807;&#x5FD7;&#x663E;&#x793A;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (WT) KISS1R &#x5171;&#x7684;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x6CA1;&#x6709;&#x5171;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E0E;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x3002;&#x800C;&#x4E14;&#xFF0C;&#x901A;&#x5BB5;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6CBB;&#x7597;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD; WT KISS1R &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E00;&#x591C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6CBB;&#x7597;&#x589E;&#x52A0;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684; 24-fold&#x3002;WT &#x548C; Arg386Pro KISS1R &#x663E;&#x793A;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x65F6;&#x95F4;&#x5185;&#x5728;&#x523A;&#x6FC0;&#x540E;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x53D7;&#x4F53;&#x88AB;&#x56DE;&#x6536;&#x5230;&#x819C;&#x3002;Arg386Pro &#x7A81;&#x53D8;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x76F8;&#x5BF9;&#x5206;&#x5E03;&#x60C5;&#x51B5;&#x7684; KISS1R &#x819C;&#x548C;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684;&#x5206;&#x6570;&#x76F8;&#x6BD4; WT KISS1R &#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x6B64;&#x7A81;&#x53D8;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD; KISS1R &#x8D29;&#x5356;&#x7387;&#x8FBE; 120 &#x5206;&#x949F;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5982;&#x6B64;&#xFF0C;&#x603B; Arg386Pro KISS1R kisspeptin &#x523A;&#x6FC0;&#x7684; 120 &#x5206;&#x949F;&#x540E;&#x88AB;&#x5927;&#x5E45;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#x4E0E; WT &#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x5C01;&#x9501;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x56DE;&#x6536;&#x53D7;&#x4F53;&#x5360;&#x5230; kisspeptin &#x6B64;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x901F;&#x5EA6;&#x63D0;&#x9AD8;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6B64;&#x51C0;&#x589E;&#x52A0;&#x88AB;&#x6DD8;&#x6C70;&#x4E86;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x56E0;&#x6B64;&#x5F97;&#x5230;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF1A; 1&#xFF09; WT KISS1R &#x88AB;&#x964D;&#x7EA7; proteasomes&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53; &#xFF1B;2&#xFF09; WT &#x548C; Arg386Pro KISS1R &#x88AB;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x540E;&#x523A;&#x6FC0;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x662F;&#x56DE;&#x6536;&#x5230;&#x819C;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x964D;&#x7EA7; &#xFF1B;3&#xFF09; Arg386Pro &#x7A81;&#x53D8;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x7387;&#x7684; KISS1R &#x8D29;&#x5356; &mdash; &mdash; &#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5EF6;&#x957F; kisspeptin &#x54CD;&#x5E94;&#x901A;&#x8FC7;&#x51CF;&#x5C11; KISS1R &#x9000;&#x5316;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5BF9;&#x7A81;&#x53D8;&#x53D7;&#x4F53;&#x56DE;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x56DE;&#x6536;&#x7684;&#x51C0;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;

KISS1R &#x80DE;&#x5185;&#x8D29;&#x5356;&#x548C;&#x9000;&#x5316;&#xFF1A; Arg386Pro &#x75BE;&#x75C5;&#x76F8;&#x5173;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

The goal of this study was to investigate how the Arg386Pro mutation prolongs KiSS-1 receptor (KISS1R) responsiveness to kisspeptin, contributing to human central precocious puberty. Confocal imaging showed colocalization of wild-type (WT) KISS1R with a membrane marker, which persisted for up to 5 h of stimulation. Conversely, no colocalization with a lysosome marker was detected. Also, overnight treatment with a lysosome inhibitor did not affect WT KISS1R protein, whereas overnight treatment with a proteasome inhibitor increased protein levels by 24-fold. WT and Arg386Pro KISS1R showed time-dependent internalization upon stimulation. However, both receptors were recycled back to the membrane. The Arg386Pro mutation did not affect the relative distribution of KISS1R in membrane and internalized fractions when compared to WT KISS1R for up to 120 min of stimulation, demonstrating that this mutation does not affect KISS1R trafficking rate. Nonetheless, total Arg386Pro KISS1R was substantially increased compared with WT after 120 min of kisspeptin stimulation. This net increase was eliminated by blockade of detection of recycled receptors, demonstrating that recycled receptors account for the increased responsiveness of this mutant to kisspeptin. We therefore conclude the following: 1) WT KISS1R is degraded by proteasomes rather than lysosomes; 2) WT and Arg386Pro KISS1R are internalized upon stimulation, but most of the internalized receptors are recycled back to the membrane rather than degraded; 3) the Arg386Pro mutation does not affect the rate of KISS1R trafficking--instead, it prolongs responsiveness to kisspeptin by decreasing KISS1R degradation, resulting in the net increase on mutant receptor recycled back to the plasma membrane.

KISS1R intracellular trafficking and degradation: effect of the Arg386Pro disease-associated mutation.

L&#x26;#39;objectif de cette &#xE9;tude &#xE9;tait d&#x26;#39;examiner comment la mutation Arg386Pro prolonge KiSS-1 receptor (KISS1R) la r&#xE9;activit&#xE9; de kisspeptine, contribuant ainsi &#xE0; l&#x26;#39;homme la pubert&#xE9; pr&#xE9;coce centrale. Imagerie confocale a montr&#xE9; une colocalisation de type sauvage (WT) KISS1R avec un marqueur membranaire, qui a persist&#xE9; jusqu&#x26;#39;&#xE0; 5 h de stimulation. En revanche, aucune colocalisation avec un marqueur lysosome a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9;e. En outre, le traitement du jour au lendemain avec un inhibiteur de lysosome n&#x26;#39;a pas affect&#xE9; la prot&#xE9;ine KISS1R WT, alors que le traitement du jour au lendemain avec un inhibiteur de prot&#xE9;asome ont augment&#xE9; la teneur en prot&#xE9;ines de 24 fois. WT et Arg386Pro KISS1R montr&#xE9; d&#xE9;pendant du temps internalisation lors de la stimulation. Toutefois, les deux r&#xE9;cepteurs ont &#xE9;t&#xE9; recycl&#xE9;s &#xE0; la membrane. La mutation Arg386Pro n&#x26;#39;a pas affect&#xE9; la r&#xE9;partition relative des KISS1R dans la membrane et les fractions internalis&#xE9;es par rapport &#xE0; WT KISS1R pour un maximum de 120 minutes de stimulation, ce qui d&#xE9;montre que cette mutation n&#x26;#39;affecte pas le taux le trafic KISS1R. N&#xE9;anmoins, le total des Arg386Pro KISS1R a &#xE9;t&#xE9; sensiblement augment&#xE9; par rapport &#xE0; WT apr&#xE8;s 120 min de stimulation kisspeptine. Cette augmentation nette a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;limin&#xE9; par le blocus de la d&#xE9;tection de r&#xE9;cepteurs recycl&#xE9;s, ce qui d&#xE9;montre que compte recycl&#xE9; r&#xE9;cepteurs pour la r&#xE9;activit&#xE9; accrue de ce mutant &#xE0; kisspeptine. Nous concluons donc ce qui suit: 1) WT KISS1R est d&#xE9;grad&#xE9; par les prot&#xE9;asomes, plut&#xF4;t que des lysosomes; 2) WT et Arg386Pro KISS1R sont internalis&#xE9;s apr&#xE8;s stimulation, mais la plupart des r&#xE9;cepteurs internalis&#xE9;s sont recycl&#xE9;s &#xE0; la membrane plut&#xF4;t que d&#xE9;grad&#xE9;e; 3) la mutation Arg386Pro n&#x26;#39;affecte pas le taux de la traite des KISS1R - au lieu, il prolonge la r&#xE9;activit&#xE9; &#xE0; kisspeptine en diminuant la d&#xE9;gradation KISS1R, r&#xE9;sultant en l&#x26;#39;augmentation nette sur le r&#xE9;cepteur mutant recycl&#xE9;e vers la membrane plasmique.

KISS1R trafic intracellulaire et &#xE0; la d&#xE9;gradation: Effet de la Arg386Pro associ&#xE9;e &#xE0; la maladie Mutation

Ziel dieser Studie war es, zu untersuchen, wie die Arg386Pro-Mutation KiSS-1-Rezeptor (KISS1R) Reaktion auf Kisspeptin, einen Beitrag zur menschlichen zentrale Pubertas praecox verl&auml;ngert. Konfokale Bildgebung zeigte Kolokalisation von Wildtyp (WT) KISS1R mit einem Membran-Marker, die f&uuml;r bis zu 5 h der Stimulation andauerten. Umgekehrt wurde keine Kolokalisation mit einem Lysosom-Marker erkannt. Au&szlig;erdem beeinflusste &Uuml;bernachtung Behandlung mit einem Lysosom-Inhibitor nicht WT KISS1R-Protein, w&auml;hrend &Uuml;bernachtung Behandlung mit einem Proteasom-Inhibitor Protein-Ebene von 24-fold gestiegen. WT und Arg386Pro KISS1R zeigte zeitabh&auml;ngige Internalisierung auf Anregung. Allerdings waren beide Rezeptoren wiederverwendet werden, um die Membran zur&uuml;ck. Die Arg386Pro-Mutation hatte keine Auswirkungen auf die relative Verteilung der KISS1R in Membran und verinnerlichten Br&uuml;che im Vergleich zu den WT KISS1R f&uuml;r bis zu 120 min der Stimulation, demonstrieren, dass diese Mutation nicht KISS1R Menschenhandel Preise auswirkt. Dennoch konnte insgesamt Arg386Pro KISS1R gegen&uuml;ber WT nach 120 min von Kisspeptin Stimulation vervielfacht. Diese Nettozunahme schied durch Blockade der Erkennung von Recycling-Rezeptoren, demonstrieren, dass Recycling Rezeptoren f&uuml;r die Erh&ouml;hung der Reaktionsf&auml;higkeit von dieser Mutante auf Kisspeptin verantwortlich. Wir schlie&szlig;en daher Folgendes: 1) WT KISS1R wird beeintr&auml;chtigt durch Proteasomes anstatt Lysosomen; 2) WT und Arg386Pro KISS1R auf Anregung verinnerlicht sind, jedoch die meisten von den verinnerlichten Rezeptoren werden recycelt, zur&uuml;ck auf die Membrane, anstatt abgebaut; 3) die Arg386Pro-Mutation hat keinen Einfluss auf die Rate von KISS1R Menschenhandel--stattdessen es verl&auml;ngert Reaktionsf&auml;higkeit auf Kisspeptin absteigender KISS1R Erniedrigung, wodurch die net auf mutierten Rezeptor zur&uuml;ck zu der Plasmamembran wiederverwendet.

KiSS1R intrazellul&auml;re Menschenhandel und Abbau: Effekt der Arg386Pro Krankheit-assoziierten Mutation.

L&#39;obiettivo di questo studio era di indagare come la mutazione Arg386Pro prolunga la reattivit&agrave; del recettore (KISS1R) 1 bacio a kisspeptin, contribuendo alla pubert&agrave; precoce centrale umano. Imaging confocale ha mostrato la presenza di wild-type (WT) KISS1R con un marcatore di membrana, che ha persisto fino a 5 ore di stimolazione. Al contrario, &egrave; stata rilevata alcuna presenza con un pennarello lisosoma. Inoltre, durante la notte trattamento con un inibitore di lysosome non ha influito WT KISS1R proteine, considerando che durante la notte trattamento con un inibitore del proteasoma aumentati livelli di proteina da 24-fold. WT e Arg386Pro KISS1R ha mostrato interiorizzazione del tempo-dipendente dopo stimolazione. Tuttavia, entrambi i recettori sono stati riciclati torna a membrana. La mutazione Arg386Pro non intaccarono la relativa distribuzione di KISS1R nella membrana e frazioni interiorizzate rispetto al WT KISS1R per fino a 120 minuti di stimolazione, dimostrando che questa mutazione non influisce sul tasso di traffico KISS1R. Tuttavia, KISS1R Arg386Pro totale era sostanzialmente aumentato rispetto al WT dopo 120 min di stimolazione kisspeptin. Questo aumento netto &egrave; stato eliminato dal blocco di rilevazione dei recettori riciclati, dimostrando che i recettori riciclati account per la maggiore reattivit&agrave; di questa mutante a kisspeptin. Concludiamo dunque le seguenti: 1) WT KISS1R &egrave; degradato dai proteasomi anzich&eacute; lisosomi; 2) WT e Arg386Pro KISS1R sono interiorizzate dopo stimolazione, ma la maggior parte dei recettori interiorizzati vengono riciclata torna alla membrana piuttosto degradato; 3) la mutazione Arg386Pro non influenzano il tasso di KISS1R traffico - invece, prolunga reattivit&agrave; a kisspeptin diminuendo la degradazione di KISS1R, con conseguente aumento netto sul recettore mutante riciclato al membrana del plasma.

KISS1R traffico intracellulare e degrado: effetto della mutazione associata a malattia Arg386Pro.

&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;Arg386Pro&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x6027;&#x601D;&#x6625;&#x671F;&#x65E9;&#x767A;&#x75C7;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3057;&#x3001;&#x30AD;&#x30B9;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;KISS-1&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;KISS1R&#xFF09;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x3092;&#x5EF6;&#x9577;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;5&#x6642;&#x9593;&#x307E;&#x3067;&#x6301;&#x7D9A;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF08;WT&#xFF09;KISS1R&#x306E;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x306F;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3067;&#x4E00;&#x6669;&#x51E6;&#x7406;&#x304C;24&#x500D;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3067;&#x4E00;&#x6669;&#x51E6;&#x7406;&#x306F;&#x3001;WT KISS1R&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; WT&#x3068;Arg386Pro KISS1R&#x306F;&#x3001;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x6642;&#x9593;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x623B;&#x3063;&#x3066;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x304C;KISS1R&#x58F2;&#x8CB7;&#x7387;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x6700;&#x5927;120&#x5206;&#x9593;&#x3001;WT KISS1R&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;Arg386Pro&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x819C;&#x5185;&#x5728;&#x753B;&#x5206;&#x4E2D;&#x306E;KISS1R&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x5E03;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x5408;&#x8A08;Arg386Pro KISS1R&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x30AD;&#x30B9;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30F3;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;120&#x5206;&#x5F8C;&#x3001;WT&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D14;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x3001;&#x30AD;&#x30B9;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30A2;&#x30AB;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x5C01;&#x9396;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9664;&#x53BB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x6B21;&#x306E;&#x7D50;&#x8AD6;&#xFF1A;1&#xFF09;WT KISS1R&#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5206;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;2&#xFF09;WT&#x3068;Arg386Pro KISS1R&#x306F;&#x3001;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5185;&#x9762;&#x5316;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x3080;&#x3057;&#x308D;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x819C;&#x306B;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;3&#xFF09;Arg386Pro&#x306E;&#x5909;&#x7570;KISS1R&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x306B;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093; - &#x305D;&#x306E;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x5909;&#x7570;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7D14;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x3001;KISS1R&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30AD;&#x30B9;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x3092;&#x5EF6;&#x3070;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

KISS1R&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8F38;&#x9001;&#x3068;&#x5206;&#x89E3;&#xFF1A;Arg386Pro&#x75BE;&#x60A3;&#x95A2;&#x9023;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;

&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; Arg386Pro &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD0A4;&#xC2A4;-1 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (KISS1R) &#xC751;&#xB2F5; kisspeptin, &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC911;&#xC559; &#xC870; &#xC219;&#xD55C; &#xC0AC;&#xCD98;&#xAE30;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB97C; &#xC5F0;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. Confocal &#xC601;&#xC0C1; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xCD5C;&#xB300; 5 h &#xB3D9;&#xC548; &#xC720;&#xC9C0; &#xB9C9; &#xD45C;&#xC2DC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; (WT) kiss1r&#xC758; colocalization&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C;, &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880; &#xD45C;&#xC2DD;&#xC774; &#xC5C6;&#xB294; colocalization &#xAC80;&#xC0C9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC640; &#xD558;&#xB8FB;&#xBC24; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A; &#xC558; &#xC5B4; WT KISS1R &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC640; &#xD558;&#xB8FB;&#xBC24; &#xCE58;&#xB8CC; 24-fold&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;. WT Arg386Pro KISS1R &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB450; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. Arg386Pro &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC640; &#xC790;&#xADF9;,&#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; KISS1R &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC5F0; 120 &#xBD84;&#xAE4C;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; WT kiss1r&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0; kiss1r&#xC758; &#xC0C1;&#xB300; &#xBD84;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, &#xCD1D; Arg386Pro kiss1r&#xB294; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; WT&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; kisspeptin &#xC790;&#xADF9; 120 &#xBD84; &#xD6C4;. &#xC774; &#xC21C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; kisspeptin&#xC5D0;&#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC751;&#xB2F5; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xB300; &#xD55C; &#xACC4;&#xC815; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC758; &#xBD09;&#xC1C4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD0C8;&#xB77D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC74C; &#xACB0;&#xB860;: 1) WT KISS1R &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; proteasomes&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC131;&#xB2A5; &#xC800;&#xD558; 2) WT &#xBC0F; Arg386Pro kiss1r&#xB97C; &#xC790;&#xADF9;, &#xB530;&#xB77C; &#xB0B4; &#xBA74; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD0C0;&#xB77D; &#xD55C;; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; 3) Arg386Pro &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; KISS1R &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;-&#xB300;&#xC2E0;&#xC5D0;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC5F0;&#xC7A5; kisspeptin&#xC5D0; &#xB300;&#xC751; KISS1R &#xC800;&#xD558;, &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC218;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC21C; &#xC99D;&#xAC00;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xC5EC;.

KISS1R &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC640; &#xC800;&#xD558;: Arg386Pro &#xC9C8;&#xBCD1; &#xAD00;&#xB828; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;.

El objetivo de este estudio fue investigar c&#xF3;mo la mutaci&#xF3;n Arg386Pro prolonga KiSS-1 receptor (KISS1R) la capacidad de respuesta a la kisspeptina, contribuyendo a la humana pubertad precoz central. Confocal de im&#xE1;genes mostr&#xF3; colocalizaci&#xF3;n de tipo salvaje (WT) KISS1R con un marcador de membrana, que se mantuvo durante un m&#xE1;ximo de 5 h de estimulaci&#xF3;n. Por el contrario, ninguna colocalizaci&#xF3;n con un marcador lisosoma se detect&#xF3;. Adem&#xE1;s, el tratamiento durante la noche con un inhibidor de lisosoma no afect&#xF3; prote&#xED;na WT KISS1R, mientras que el tratamiento durante la noche con un inhibidor del proteasoma aumentado los niveles de prote&#xED;na por 24-pliegue. WT y KISS1R Arg386Pro mostr&#xF3; dependiente del tiempo de internalizaci&#xF3;n a la estimulaci&#xF3;n. Sin embargo, ambos receptores se recicla de nuevo a la membrana. La mutaci&#xF3;n Arg386Pro no afect&#xF3; a la distribuci&#xF3;n relativa de KISS1R en la membrana y las fracciones interiorizados en comparaci&#xF3;n con el WT KISS1R para un m&#xE1;ximo de 120 minutos de estimulaci&#xF3;n, lo que demuestra que esta mutaci&#xF3;n no afecta a la tasa KISS1R trata de personas. Sin embargo, el total de Arg386Pro KISS1R se ha incrementado sustancialmente en comparaci&#xF3;n con el WT despu&#xE9;s de 120 minutos de estimulaci&#xF3;n kisspeptina. Este aumento neto fue eliminado por el bloqueo de la detecci&#xF3;n de los receptores de reciclado, lo que demuestra que los receptores de reciclado para la cuenta de la capacidad de respuesta cada vez mayor de este mutante de kisspeptina. Por consiguiente, concluimos lo siguiente: 1) PESO KISS1R es degradada por los proteosomas en lugar de lisosomas, 2) el TE y KISS1R Arg386Pro se internalizan a la estimulaci&#xF3;n, pero la mayor&#xED;a de los receptores internalizados son reciclados de nuevo a la membrana en lugar de degradarse, y 3) la mutaci&#xF3;n Arg386Pro no afecta a la velocidad de tr&#xE1;fico KISS1R - lugar, se prolonga la capacidad de respuesta a kisspeptina al disminuir la degradaci&#xF3;n KISS1R, resultando en el incremento neto en receptor mutante recicla de nuevo a la membrana plasm&#xE1;tica.

Lauren Vandepas

Division of Endocrinology and Metabolism,
Department of Medicine,
Division of Endocrinology and Metabolism, Department of Medicine

University of Miami Miller School of Medicine

Mutagenesis and Analysis of Genetic Mutations in the GC-rich KISS1 Receptor Sequence Identified in Humans with Reproductive Disorders

Lauren Vandepas

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Division of Endocrinology and Metabolism,Department of Medicine,Division of Endocrinology and Metabolism, Department of Medicine

University of Miami Miller School of Medicine

Mutagenesis and Analysis of Genetic Mutations in the GC-rich KISS1 Receptor Sequence Identified in Humans with Reproductive Disorders

Division of Endocrinology and Metabolism,
Department of Medicine,
Division of Endocrinology and Metabolism, Department of Medicine