Técnica modificada para ligação da artéria coronária em ratos

Resumo

O procedimento cirúrgico utilizado para induzir o enfarte do miocárdio experimental em ratos começa com toracotomia esquerda entre a terceira e quarta das nervuras, a fim de visualizar a superfície anterior do coração e do pulmão esquerdo. A artéria coronária esquerda é ligada, a caixa é fechada e o rato é deixado a recuperar-se espontaneamente.

Resumo

Enfarte do miocárdio (MI) é uma das mais importantes causas de mortalidade em humanos ^1-3. A fim de melhorar a morbidade e mortalidade em pacientes com MI precisamos de melhor conhecimento sobre a fisiopatologia da isquemia miocárdica. Esse conhecimento pode ser útil para definir novos alvos terapêuticos para inovadoras terapias cardiovasculares ^4. Modelo MI experimental em camundongos é um modelo cada vez mais popular de pequenos animais em pesquisa pré-clínica em que MI é induzida por meio de ligadura permanente ou temporária da artéria coronária esquerda (ACE) ^5. Neste vídeo, descrevemos o método passo-a-passo de como induzir MI experimental em ratos.

O animal é primeiro anestesiadas com isoflurano a 2%. O rato inconsciente é então intubados e conectados a um ventilador para a ventilação artificial. O lado esquerdo do peito é raspada e de 1,5 cm ao longo da incisão média axilar linha é feita na pele. O músculo peitoral maior esquerdo é sem rodeios dissociated até que as nervuras se encontram expostos. As camadas musculares são puxados para o lado e fixadas com um retractor de pálpebras. Após estas preparações, toracotomia esquerda é realizada entre as costelas, terceiro e quarto, a fim de visualizar a superfície anterior do coração e do pulmão esquerdo. O segmento proximal da artéria LCA é então ligado com um fio de sutura 7-0 Ethilon que normalmente induz uma dimensão do enfarte ~ 40% do ventrículo esquerdo. No final, a caixa é fechada e os animais recebem analgesia pós-operatória (Temgesic, 0,3 mg/50 ml, ip). Os animais são mantidos numa gaiola quente até recuperação espontânea.

Protocolo

1. Texto protocolo

1. Antes de prosseguir para a cirurgia, anestesiar um rato macho (C57BL / 6), que é de 6 semanas de idade ou mais velhos por inalação de 2-5% de isoflurano. Realizar uma pitada de igual para confirmar que o animal é suficientemente anestesiados.
2. O rato inconsciente é colocado de costas sobre uma almofada quente para manter uma temperatura constante de 37 ° C. O peito precordial no lado esquerdo é raspada.
3. Fixe o mouse para um dispositivo de intubação com uma câmara de isoflurano-cheia. Insira uma sonda de 0,2 de diâmetro interno para dentro da traqueia do rato através da boca, em seguida, colocar o rato intubado numa área asséptica cirúrgica (37 ° C por um controlador de temperatura) e ligar o tubo endotraqueal a um ventilador (taxa de 120 por minuto, a pressão de 4-6 mmH ₂ O); desinfectar a área com betadine e etanol a 75%.
4. Aplicar pomada oftálmica para os olhos do rato. Coloque eletrodos padrão ECG nas patas e conecte o mouse para o gravador de ECG.
5. Use tesoura estéril para fazer uma incisão de 1,5 cm ao longo da linha axilar média. Tesoura são usados ​​em vez de um bisturi para evitar lesões no tecido subjacente, em ratos. Em seguida, use uma tesoura sem corte-ponta dos vasos de dissecar e retirar o músculo precordial da parede torácica.
6. Realizar uma toracotomia esquerda entre a terceira ea quarta costelas para visualizar a superfície anterior do coração e do pulmão esquerdo
7. Além disso retrair a parede torácica, utilizando um retractor adequado, a fim de melhorar a visualização e a acessibilidade. Retire o pericárdio, usando uma pinça dentada e atraumáticas tesouras.
8. Ligar a artéria coronária esquerda, colocando a agulha (ligada com fio de sutura 7-0 Ethilon) sob a artéria com uma banda de miocárdio entre a ligadura e a artéria. A oclusão da artéria coronária bem sucedida é verificada por hipocinesia / acinesia da parede ventricular anterior esquerda e pelas alterações de gravação de ECG (por exemplo, a elevação do segmento ST, QRS broadening)
9. Feche o peito, colocando dois pontos (6-0 Ethilon) nas costelas terceiro e quarto lugares.
10. Use 5-0 Ethilon para fechar a pele.
11. Para analgesia pós-operatória, administrar uma única injecção intraperitoneal de buprenorfina (0,05 mg / kg). Os animais se recupera espontaneamente dentro de 2-5 minutos depois de parar anestesia isoflurano. Por fim, colocar o rato em uma gaiola quente e proporcionar 0,6 mg / ml de buprenorfina na água de beber (sobreposição de texto: 0,6 mg / ml em água de beber), para evitar desconforto pós-operatório. Acompanhar de perto o mouse para as primeiras 24 horas após a cirurgia.
12. Ecocardiografia é realizada para avaliar a função cardíaca de 3 dias após infarto do miocárdio. Sucesso do procedimento é verificado por acinesia na parede ventricular anterior esquerda (veja o vídeo em anexo nos Resultados). No final da experiência, o coração irá ser recolhido e armazenado em-80oC para posteriores investigações. Expressão de genes ie.

Resultados

Instrumento	Descrição da função
Blunt-ponta tesoura	Usado para cortar a pele, músculo peitoral intercostal, e suturas
Retrator olho	Usado para expor vista cirúrgico
Blunt-ponta fórceps	Usados ​​para agarrar a pele eo músculo
Suporte da agulha	Para segurar uma agulha
5-0	Utilizados para a sutura da pele

Discussão

O procedimento cirúrgico de laqueadura LCA, como demonstrado neste relatório é um método confiável e reprodutível para a indução de infarto do miocárdio experimental em ratos ^{3, 6.} A ligadura da ACE de acordo com este protocolo induz isquemia miocárdica envolvendo tipicamente ~ 40% do ventrículo esquerdo ^3. Isso induz alterações significativas de ECG do segmento ST ⁷ e palidez visível na superfície anterior do coração. Devido ao enfarte do miocárdio grande, a mortalidad...