Angiografia bidimensional raio-x para examinar bem estrutura Vascular utilizando um composto de injeção de borracha de Silicone

Resumo

Este estudo apresenta um método angiográfico bidimensional simples para examinar bem estruturas vasculares usando do silicone borracha injeção composto macio tecido e sistema de raio x.

Resumo

Angiografia é uma ferramenta essencial para o estudo das estruturas vasculares em vários campos de pesquisa. O objetivo deste estudo é apresentar um método simples e angiográfico para examinar a estrutura vascular fina de tecido fresco, não fixada usando do silicone borracha injeção composto macio tecido e sistema de raio x. Este estudo é especialmente focado em territórios de flap, utilizados em cirurgia reconstrutiva. Este estudo emprega angiografia com uma injeção de borracha silicone composta em várias condições experimentais utilizando ratos Sprague-Dawley. Primeiro, é misturada a 15 mL de MV composto e 15 mL de diluente. Em seguida, 1,5 mL do agente de cura está preparado, e um cateter 24G é canulado na artéria carótida comum do rato. Uma torneira de três vias é conectada a um cateter, e o agente radiopaco, após ser misturado com o agente de cura preparado, é injetado imediatamente sem derramamento. Finalmente, como o agente se solidifica, a amostra é colhida, e uma imagem angiográfica é obtida usando um tecido macio, sistema de raio x. Esse método indica essa qualidade angiografia mostrando bem estruturas vasculares pode ser simplesmente e facilmente obtida dentro em um curto período de tempo.

Introdução

Análise de estruturas vasculares, tais como as artérias e veias é uma importante área de interesse, particularmente em cirurgia reconstrutiva. Neste campo, flap cirurgia é amplamente realizada. Portanto, imagem angiográfica é ativamente usada para estudar o território de flap, angiosome e suprimento vascular do tecido fresco¹. Especificamente, tem havido esforços contínuos para observar a vasculatura bem, incluindo vasos bem como perfuradores (vasos emergentes dos vasos profundos, atingindo a pele) e sufocar os navios (navios entre angiosomes adjacentes de conexão)² . Estes dois tipos de navios são importantes no campo de reconstrução perforator flap e são o foco principal da pesquisa^3,4.

Vários materiais são usados na angiografia. Primeiro, há tinta da Índia, que é útil para observar a anatomia dos vasos sanguíneos. No entanto, é radiotransparente, então não é possível obter imagens angiográficas. Os materiais radiopacos mais comumente usados são o óxido de chumbo e bário. No entanto, a toxicidade é uma desvantagem crucial do óxido de chumbo, e é inconveniente para usar quando misturado com água, por causa de sua forma em pó. Bário é isento de toxicidade; no entanto, não é muito viável, como ele deve ser usado após a diluição. Ambos estes materiais radiopacos não podem atravessar os capilares; Portanto, se uma estrutura toda vascular deve ser analisada, é necessário injetar-lhes na artéria e veia separadamente⁵. Além disso, os dois materiais causam a fuga de tintura durante a dissecção anatómica, então eles devem ser combinados com gelatina. Misturas de óxido-gelatina e gelatina de bário chumbo leve pelo menos um dia para solidificar a^1,6,7.

Angiografia computadorizada (TC) é outro método utilizado e pode auxiliar na visualização de estruturas tridimensionais (3D)⁸. No entanto, as veias não podem ser visualizado, efetivamente,⁵. Nesta modalidade, clara visualização da vasculatura bem como veias de estrangulamento é difícil, exceto quando usando equipamentos específicos. A necessidade de equipamento mais caro pode ser uma desvantagem, então angiografia CT não pode ser utilizada em todos os laboratórios. Por outro lado, o sistema de raio x de tecidos moles é relativamente barato e podem operar-se mais facilmente. Este sistema é ideal para a visualização de tecidos moles e pode fornecer imagens de alta qualidade de tecido mole do que o sistema de raio-x simples. Embora o tecido mole sistema de raio x em si não pode mostrar imagens em 3D, pode ajudar a visualizar estruturas vasculares bem mais clara que a angiografia CT. Portanto, nós usamos o sistema de raio x de tecidos moles em muitas experiências, particularmente em vários modelos de retalho e Anatomia básica^2,9.

Finalmente, o uso de silicone de borracha injeção composto angiografia tem inúmeras vantagens. Porque são preparados vários agentes de cor, ele pode ser injetado e exibir cores distinguíveis como tinta nanquim. Portanto, ao mesmo tempo a estudar a anatomia e a angiografia é possível. Que pode passar por capilares e permitir que as veias ser visualizado, possibilitando exames das estruturas vasculares bem. Ao contrário a mistura de gelatina, a injeção de borracha silicone composta solidifica dentro de um curto período de tempo, aproximadamente 15 minutos, sem quaisquer procedimentos adicionais. Todo o processo é resumido na imagem esquemática na Figura 1.

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Protocolo

Todos os procedimentos, incluindo assuntos animais, foram aprovados pelo cuidado institucional do Animal e uso comités de Seoul National Hospital Universitário (IACUC n º 10-0184). Este protocolo é otimizado para pesquisa na vasculatura do flap. Este exemplo é baseado em um modelo de quatro-território flap em nossos relatórios anteriores.

1. estabelecer uma condição de Flap

Nota: É importante gerar uma mudança vascular em um modelo do rato flap 4 a 5 dias antes de estimativa visível^6,7.

1. Use ratos Sprague-Dawley machos 7 semanas de idade, pesando 200-250 g.
2. Anestesia os ratos utilizando isoflurano em 3-5% para a indução e 2-2,5% para manutenção. Execute um teste de reflexo de retirada de pitada do dedo do pé para confirmar que a profundidade da anestesia é suficiente.  Injete o meloxicam 5mg/kg por via subcutânea para alívio da dor.
3. Raspe o tronco usando um aparador de pelos e creme depilatório (ácido tioglicólico 80%). Prepare um campo cirúrgico estéril com 10% de iodo-povidona e um pano estéril para manter uma condição estéril durante os procedimentos. Aplica uma pomada de veterinário aos olhos para evitar ressecamento. Manter todos os instrumentos na condição estéril.
4. Estabelece o adequado a condição de flap.
   1. Marca um design de flap de pele circunferencial do abdômen inferior para trás, medindo 4 x 12 cm. Localize o centro da aba no meio do caminho entre o processo xifoide e o pênis (Figura 1).
   2. Fazer a incisão marcada usando uma lâmina cirúrgica.
   3. Disse o retalho com uma tesoura, incluindo a pele e panículo adiposo carnosus.
   4. Dissecar em torno do pedículo vascular [bilateral profunda circunflexa ilíaca (DCI) vasos e bilateral inferior epigástrica (SIE) vasos superficiais] na parte inferior do abdome e expor o pedículo vascular, usando uma lupa cirúrgica e instrumentos microcirúrgicos.
   5. Manter ou ligar os vasos dependendo as condições desejadas.
   6. Divida o retalho ao longo da linha média dorsal, usando uma lâmina ou tesoura.
   7. Coloque o retalho em sua posição original e fixe-a com um grampeador de pele.
   8. Aplicar uma pomada tópica da ferida cirúrgica por 3 dias e proporcionar analgesia pós-operatória ao administrar meloxicam na dose de 5 mg/kg por via oral uma vez por dia durante 3 dias.
   9. Confirme que o rato recobra a consciência suficiente para manter a prostração esternal. Retornar o rato na gaiola e movê-lo para a área de habitação. Aplicar um elizabetano colar para cada ratos.

2. preparação dos instrumentos

1. Prepare um cateter 24G e uma torneira de três vias.
2. Prepare a pinça mosquito, tesoura pequena, um bisturi cirúrgico e uma lâmina cirúrgica.
3. Prepare o agente angiográfico (injeção de borracha silicone composto).
   1. Misture o composto com o diluente na taça de coleta de amostra estéril de agente de cor. Certifique-se de uma quantidade igual de peso: 15 mL de agente de cor composto e 15 mL de diluente de MV em um rato (rato Sprague-Dawley, 200-250 g).
   2. Adicionar o agente de cura por 5%, em peso ou o volume da solução imediatamente antes da injeção de mistura: 1,5 mL do agente em um rato (rato Sprague-Dawley, 200-250 g) de cura.

3. o rato artéria preparação

1. Use o isoflurano para anestesiar os ratos (3-5% para indução) e 2-2,5% para manutenção. Execute um teste de reflexo de retirada de pitada do dedo do pé para confirmar que a profundidade da anestesia é suficiente.
2. Rapar o pescoço usando um aparador de pelos e creme depilatório (ácido tioglicólico 80%).
3. Expor a artéria carótida comum¹⁰.
   1. Fazer uma incisão de 2 cm entre as escápulas.
   2. Disse mais profundamente, usando pinça mosquito e tesoura romba até o complexo de glândulas salivares é exposto.
   3. Retrair as glândulas salivares e sem rodeios, dissecar o músculo omohyoid longitudinalmente.
   4. Disse ao redor da artéria carótida comum.
4. Ligar os lados cefálicas e caudais da artéria carótida comum com seda preta e afixá-lo.
   1. Faça uma gravata na sutura proximal e manter a tração para manter o ingurgitamento da artéria.
   2. Prepare uma sutura de seda no lado caudal para fixação do cateter 24G.

4. canulação

1. Canule artéria carótida preparada usando um cateter 24G.
2. Aperte o laço pre-feito no lado caudal e tenha cuidado para não remover o cateter durante a injeção.
3. Prepare o agente de cura (etapa 1.3.2).
4. Ligue a torneira de três vias com segurança ao cateter inserido.
   1. Confirme o sangue regurgitado dentro do cateter pela adição de pressão negativa, usando uma seringa vazia.

5. injeção

1. Injete a injeção de borracha silicone composta até mudou a cor do olho e pé.
   Nota: A alteração de cor deve aparecer como o progride de fluido injetado (quantidade de injeção é aproximadamente 25-30 mL para cada rato).
2. Fechar a torneira de três vias e esperar até que o agente se solidifica.
   1. Tenha cuidado para não contaminar com o agente, especialmente quando retirar a seringa da torneira de três vias. Use uma barreira protetora como gaze ou vinil para separar o espaço de injeção do seu entorno.
      Atenção: Qualquer contaminação dificulta a analisar a imagem angiográfica, porque o composto é radio-opaco.
   2. Confirme a cessação dos batimentos cardíacos e a respiração. Pare a anestesia.
   3. Observe a taxa de dureza com o agente restante como referência (aproximadamente 15 min necessário).

6. colheita de amostra

1. Fazer uma incisão usando uma lâmina cirúrgica para o carnosus panículo 1 cm fora o flap para evitar danos a qualquer estrutura vascular dentro da aba.
2. Dissecar ao longo do plano previamente dissecado da etapa 1.4 (sob o avião de carnosus panículo adiposo) e colher o tecido, incluindo a tampa e o pedículo vascular, usando tesouras (a estrutura vascular está incluída na aba).
3. Ligam o pedículo da aba usando uma sutura de seda 5-0 e separar a tampa do corpo. Tenha cuidado para não danificar a estrutura vascular.

7. captura da imagem angiográfica

1. Espalhe o provete, garantindo que não dobra e delicadamente, coloque-o sobre a cirúrgica drapeja usando fórceps.
2. Pegue uma imagem de radiografia.
   1. Transferi a amostra mentindo no filme para a amostra de espaço de carga.
   2. Definir o sistema de raio x de tecidos moles para 60 kVp, 5 mA e 5 exposição de s.
3. Desenvolva o filme em uma câmara escura usando uma máquina de desenvolvimento automático.
4. Digitalizar o filme com a maior resolução possível.

8. analisando a imagem^6,7,11

1. Distingui as artérias e veias baseadas a continuidade do fluxo e diâmetro.
   1. Começo da afluência da artéria do pedículo e foco no vaso alvo a ser examinado.
   2. Medir os diâmetros com software abrindo a imagem.
      1. Clique no botão reta e traçar uma linha na barra de escala é o mesmo comprimento.
      2. Aberto o analisar | Definir escala menu e entrar o valor da barra de escala conhecida a distância.
      3. Clique no botão direito e desenhe uma linha a bordo do navio do que o diâmetro precisa ser medido.
      4. Aberto o analisar | Medida menu e confirmar o comprimento.
2. Analise o padrão vascular, considerando a área de sobrevivência do flap.

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Resultados

Através deste protocolo a seguir, analisou-se a vascularização do retalho do rato Sprague-Dawley. Um retalho de pele circunferencial da parte inferior do abdome, na parte de trás que mede 4 x 12 cm foi marcado com base em nossos relatórios anteriores. Cada amostra foi em uma condição vascular diferente.

Todas as abas eram elevadas baseiam a veia e artéria ilíaca circunflexa profunda (DCIA) e em seguida supercarregado co...

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Discussão

Injeção de borracha silicone composta angiografia pode ser realizada facilmente, não requer equipamento caro e oferece muitas vantagens. Em contraste com as avaliações pré-operatórias e intra-operatório de pacientes, experimentos com animais e cadáveres podem fornecer detalhes sobre condições específicas, permitindo estudos mais diversificados e em profundidade. O modelo de retalho usando ratos é particularmente valioso para os médicos porque alterações em diversos contextos podem ser observadas antes das...

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Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
MICROFIL Silicone Rubber Injection Compounds	Flow Tech Inc.	MV-112	White color agent
MICROFIL Silicone Rubber Injection Compounds	Flow Tech Inc.	MV-117	Orange color agent
MICROFIL Silicone Rubber Injection Compounds	Flow Tech Inc.	MV-120	Blue color agent
MICROFIL Silicone Rubber Injection Compounds	Flow Tech Inc.	MV-122	Yellow color agent
MICROFIL Silicone Rubber Injection Compounds	Flow Tech Inc.	MV-130	Red color agent
MICROFIL Silicone Rubber Injection Compounds	Flow Tech Inc.	MV-132	Clear agent
MICROFIL Silicone Rubber Injection Compounds	Flow Tech Inc.	MV-Diluent	Diluent
MICROFIL CP-101 For Cast Corrosion Preparations	Flow Tech Inc.	CP-101	Curing agent
SOFTEX X-ray film photographing inspection equipment	SOFTEX	CMB-2	Soft tissue x-ray system
Film	Fujifilm	Industrial X-ray Film (FR 12x16.5cm)
Automatic Development Machine	Fujifilm	FPM 2800
Rat			Sprague-Dawley rat weighing 200-250 g
Three-way stopcock
24-guage catheter
Image J	National Institutes of Health		https://imagej.nih.gov/ij/