Monitoramento da glicose no sangue na prole de camundongos após injeção intracitoplasmática de espermatozóides

Resumo

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de camundongo de injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI) e transferência de embriões (ET), permitindo-nos observar mudanças relacionadas à idade no metabolismo da glicose que podem ser atribuídas à ICSI, fornecendo informações sobre seus potenciais impactos de longo prazo no desenvolvimento humano.

Resumo

A vida humana é consideravelmente longa, enquanto os modelos de camundongos podem simular toda a vida humana em um período relativamente curto, com um ano de vida do camundongo aproximadamente equivalente a 40 anos humanos. A injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI) é uma tecnologia de reprodução assistida comumente usada na prática clínica. No entanto, dado seu surgimento relativamente recente há cerca de 30 anos, os efeitos a longo prazo dessa técnica no desenvolvimento humano permanecem obscuros. Neste estudo, estabelecemos o método ICSI combinado com transferência de embriões (ET) usando um modelo de camundongo. Os resultados demonstraram que o esperma normal de camundongos, após ser submetido a cultura in vitro e subsequente ICSI, exibiu uma taxa de fertilização de 89,57% e uma taxa de duas células de 87,38%. Após o TE, a taxa de natalidade da prole foi de aproximadamente 42,50%. Além disso, à medida que os camundongos envelheciam, foram observadas flutuações nos níveis de metabolismo da glicose, o que pode estar associado à aplicação da técnica ICSI. Essas descobertas significam que a técnica ICSI-ET de camundongos fornece uma plataforma valiosa para avaliar o impacto das anormalidades espermáticas no desenvolvimento embrionário e seus efeitos a longo prazo na saúde da prole, particularmente no que diz respeito ao metabolismo da glicose. Este estudo fornece informações importantes para pesquisas futuras sobre os efeitos potenciais da técnica ICSI no desenvolvimento humano, enfatizando a necessidade de uma investigação aprofundada sobre as implicações de longo prazo dessa tecnologia.

Introdução

As questões de fertilidade surgiram como um dos principais focos de preocupação médica e sociológica, especialmente na sociedade moderna, onde o declínio das taxas de fertilidade e o aumento da gravidade da prevalência e gravidade da infertilidade ganharam destaque. A Tecnologia de Reprodução Assistida (ART) oferece uma ampla gama de possibilidades para enfrentar esses desafios, com a Injeção Intracitoplasmática de Espermatozóides (ICSI) comumente utilizada como intervenção terapêutica.

Desde que Palermo relatou a primeira gravidez bem-sucedida alcançada por meio de injeção intracitopl....

Protocolo

O protocolo do ICSI-ET descrito abaixo segue as diretrizes e foi aprovado pela Animal Ethical Review do Instituto de Pesquisa da Planned Parenthood de Xangai. Procedimentos de segurança: Sempre use equipamento de proteção individual (EPI) apropriado ao manusear produtos químicos ou materiais biológicos. Uso de coifas: Execute todos os procedimentos que envolvam produtos químicos voláteis ou geração de aerossóis dentro de uma capela de exaustão certificada ou gabinete de biossegurança. Use camundongos fêmeas (cepa B6D2F1 de 6-8 semanas de idade) para o procedimento de superovulação.

1. ICSI em camundon....

Discussão

Este estudo integrou técnicas de injeção intracitoplasmática de espermatozóides de camundongos (ICSI) e transferência de embriões (ET) para recapitular de forma abrangente a tecnologia de reprodução assistida humana (ART) e examinar o impacto da ICSI em conjunto com o ET no desenvolvimento da prole. A aplicação da técnica ICSI com espermatozoides normais de camundongos proporcionou altas taxas de fertilização (86,76%) e 2 células (88,48%). Após o TE, a taxa de natalidade .......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.25% avertin (2,2,2-tribromoethanol)	Nanjing Aibei	M2960	for anesthetization
Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile	BD	353001
Bacteriological Petri Dishes 50 x 9 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile	BD	351006
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc.
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Dissection Microscope	Olympus	SZX16	Use in mouse embryo transfer
Fluorinert Fc-770	SIGMA	F3556	Fluorinert FC-770 is a thermally stable fully fluorinated liquid with high dielectric strength and resistivity, used as operating fluid
handheld glucometer	Roche	AccuChek performa	Blood glucose measurement
HTF	Merck	MR-070-D	The EmbryoMax Human Tubal Fluid (HTF) (1x), liquid designed for use with Mouse IVF is available in a 50 mL format and has been optimized and validated for Embryo Culture.
Hydraulic Microinjector	Eppendorf	CellTram 4r Oil, 5196000030	For sperm injection
Inverted Microscope	Nikon	TI2-U	Micromanipulation observation host
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Micromanipulator	NARISHIGE	NTX-N4	Micromanipulation arm
mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications.
Needle Cutter	Nanjing Aibei	Sutter MF-800	Use for fabricating micromanipulation needles
Needle Puller	Nanjing Aibei	Sutter model p-100	Use for making micromanipulation needles
Piezo Drill Trip Mouce ICSI	Eppendorf	5195000.087	Application of ICSI injection needle.
Piezoelectric Micromanipulator (Membrane Breaker)	Eppendorf	Eppendorf PiezoXpert	Use of micro-pulses to break the zona pellucida and oolemma of the oocyte
Pneumatic Microinjector	Eppendorf	CellTram 4r Air, 5196000013	For fixing the oocyte
Ready-to-use Human Chorionic Gonadotropin (Hcg)	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Ready-to-use Pregnant Mare's Serum Gonadotropin (PMSG)	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Oocyte retrieval and observation of embryo development