Fabricação de matriz de baço descelularizada derivada de ratos

Resumo

A matriz descelularizada do baço (DSM) tem aplicações promissoras no campo da engenharia de tecidos hepáticos. Este protocolo descreve o procedimento para preparar o DSM de ratos, que inclui a coleta de baços de ratos, descelularizando-os por meio de perfusão e avaliando o DSM resultante para confirmar suas características.

Resumo

O transplante de fígado é o tratamento primário para a doença hepática em estágio terminal. No entanto, a escassez e a qualidade inadequada dos órgãos dos dadores exigem o desenvolvimento de terapias alternativas. Fígados bioartificiais (BALs) utilizando matriz hepática descelularizada (DLM) surgiram como soluções promissoras. No entanto, o fornecimento de DLMs adequados continua sendo um desafio. O uso de uma matriz esplênica descelularizada (DSM) tem sido explorado como base para LBAs, oferecendo uma alternativa prontamente disponível. Neste estudo, os baços de ratos foram colhidos e descelularizados usando uma combinação de ciclos de congelamento e descongelamento e perfusão com reagentes de descelularização. O protocolo preservou as microestruturas e componentes da matriz extracelular (MEC) dentro do DSM. O processo completo de descelularização levou aproximadamente 11 h, resultando em uma ECM intacta dentro do DSM. A análise histológica confirmou a remoção de componentes celulares, mantendo a estrutura e composição da MEC. O protocolo apresentado fornece um método abrangente para a obtenção do DSM, oferecendo aplicações potenciais em engenharia de tecidos hepáticos e terapia celular. Esses achados contribuem para o desenvolvimento de abordagens alternativas para o tratamento da doença hepática terminal.

Introdução

O transplante de fígado continua sendo o único tratamento definitivo para a doença hepática terminal ^1,2,3. No entanto, a escassez crítica e o declínio da qualidade dos órgãos dos doadores aumentaram a necessidade de tratamentos alternativos⁴. No campo da medicina regenerativa, fígados bioartificiais (BALs) utilizando matriz hepática descelularizada (DLM) surgiram como soluções promissoras ^5,6,7. O DLM preserva a estrutura original do fígado, incluindo sua int....

Protocolo

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Experimentos com Animais da Universidade Xi'an Jiaotong e realizado de acordo com as diretrizes para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório.

1. Colheita do baço

1. Use ratos Sprague Dawley machos pesando 250-280 g. Aloje os ratos em salas com temperatura e umidade controladas e forneça-lhes comida e água ad libitum, exceto em jejum antes da cirurgia.
2. Injete buprenorfina (0,05 mL/kg) por via subcutânea como analgésico 1 h antes da operação. Anestesiar o rato por inalação de isoflurano. Use uma taxa de fluxo de 1,5 L/min de isoflurano a 5% para anes....

Discussão

Os LBAs representam uma abordagem eficaz para o tratamento da doença hepática terminal, particularmente nos casos em que o transplante de fígado é dificultado pela atual escassez de órgãos de doadores⁶. Uma opção promissora para a criação de LBAs é a utilização de DLM, que preserva a ECM natural e a estrutura vascular do fígado nativo. No entanto, a escassez de DLM humano e os riscos potenciais de infecção e imunogenicidade associados ao DLM animal apresentam limitações significa.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia Machine	Harvard Apparatus	tabletop	animal anesthesia
bubble trap	Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd.	pore diameter: 5 μm	prevent air bubbles
Buprenorphine	TIPR Pharmaceutical Responsible Co.,Ltd		an analgesic
Hemostatic Forceps	Shanghai Medical Instruments  Co., Ltd	J31020	surgical tool
Heparinized Saline	SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co., LTD		prevent the formation of thrombosis
Isoflurane	RWD life Science Co.		anesthetic:for the induction and maintenanceof anesthesia
Penicillin-Streptomycin	Beyotime Biotechnology Co., Ltd.	C0222	antibiotics in vitro to prevent microbial contamination
Peristaltic Pump	Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd.	BT100-1L
Phosphate-Buffered Saline	Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.	4481228	phosphoric acid buffer salt solution
Silicone Tube	Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd.	2.4×0.8mm
Silk Suture	Yangzhou Jinhuan Medical Instrument Factory	6-0 and 3-0	ligate blood vessels
Sodium Dodecyl Sulfate	Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.	151-21-3	ionic detergent, dissolves both cell and nuclear membranes
Syringe Pump	Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd	BeneFusion SP5	intravenous infusion
Triton X-100	Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.	9002-93-1	non-ionic detergent, disrupts lipid-lipid, lipid-protein, and DNA-protein interactions
Venous Catheter	B. Braun Company	24G	inserting the spleen artery