Fungos Filamentosos

1. Preparação da amostra do solo

1. Primeiro, determine o teor inicial de umidade do solo secando durante a noite uma quantidade conhecida do solo úmido, e reweighing o solo seco. A equação para determinar o teor inicial de umidade do solo é:
   
   (Equação 1)
   onde:
   MC = teor de umidade
   W = peso líquido
   D = peso seco
2. Calcule a quantidade de água que deve ser adicionada a 25 g de solo para aumentar o teor de umidade do solo para 10% em uma base de peso seco.
3. Em seguida, adicione essa quantidade de água a 25 g do solo.
4. Cubra o recipiente com plástico e perfure o filme várias vezes com uma sonda para permitir a aeração durante a incubação. Segure o filme com um elástico.
5. Pesar o solo e embrulhar, em seguida, incubar a amostra à temperatura ambiente por uma semana.

2. Inoculação e Incubação de Fungos

1. Após a incubação completa, pese a amostra do solo com o envoltório e o elástico. Calcule a perda de peso devido à perda de umidade.
2. Calcule o novo teor de umidade do solo.
3. Em seguida, prepare uma série de diluição de 1/10 dos solos, como mostrado na Figura 2. Isso resultará em diluições de 10^-1 (garrafa A), 10^-2 (tubo B), 10^-3 (tubo C), 10^-4 (tubo D) e 10^-5 (tubo E) g de solo por mL.
4. Prepare placas estéreis de ágar rose bengal-streptomiccin. Tanto a Bengala Rosa quanto a estreptomicina inibem o crescimento bacteriano. Para solos muito férteis, onde as populações microbianas do solo são altas, as diluições escolhidas devem ser maiores, ou seja,10^-3,10^-4e 10^-5, g solo por placa.
5. Para cada uma das 10^-3 placas, adicione 0,1 mL do tubo de diluição^10-2, e espalhe-se sobre a superfície do ágar usando um espalhador de vidro esterilizado com chama de etanol. Como uma quantidade de 0,1 mL é banhada, isso torna a diluição efetiva 10^-3. Repita estes passos para todas as diluições.
6. Incubar placas em temperatura ambiente por uma semana.

3. Contagem e Exame de Colônia por Microscopia

1. Faça colônia conta em um e apenas uma diluição de cada solo. As placas que são contadas devem ter discretas colônias contáveis. Placas overgrown não devem ser contadas. Da mesma forma, placas com menos de 10 colônias não devem ser contadas. Observe e descreva as características culturais de três colônias diferentes.
2. Prepare os suportes de fita de pressão (fita transparente) em slides para estudo detalhado do microscópio usando o seguinte procedimento:
   1. Deposite uma gota de fluido de montagem de lactofenol no centro de um escorregador de vidro limpo
   2. Corte uma tira de fita de celofane clara a cerca de 3 cm de comprimento do rolo de estoque. Para evitar contaminar a superfície adesiva, use fórceps ao manusear a fita. Uma agulha dissecando ajudará a libertar a fita dos fórceps.
   3. O lado adesivo da fita é aplicado na superfície de uma colônia de fungos esporulando. Tome cuidado para evitar pressão excessiva na fita ou muito densa uma massa de hifa e esporos serão coletados.
   4. Remova a fita do contato com a colônia de fungos e aplique-a, lado adesivo para baixo, à gota de fluido de montagem na lâmina de vidro. Esfregue a fita suavemente com um instrumento liso e plano para expressar bolhas de ar.
   5. Examine o suporte da fita microscopicamente sob o objetivo de imersão do óleo com óleo.
   6. Identificar dois gêneros fúngicos diferentes utilizando a chave de identificação fúngica fornecida(Figura 4).

Figura 4. Chave de identificação fúngica.