Contagem de Algas em Métodos de Cultura

Fonte: Laboratórios do Dr. Ian Pepper e Dr. Charles Gerba - Universidade do Arizona
Autor de Demonstração: Bradley Schmitz

As algas são um grupo altamente heterogêneo de microrganismos que têm um traço comum, a posse de pigmentos fotossintéticos. No meio ambiente, as algas podem causar problemas para os donos de piscinas, crescendo na água. As algas também podem causar problemas em águas superficiais, como lagos e reservatórios, devido às flores algas que liberam toxinas. Mais recentemente, as algas estão sendo avaliadas como novas fontes de energia através de biocombustíveis de algas. Algas verde-azulas são na verdade bactérias classificadas como cianobactérias. As cianobactérias não só fotossintthesizem, mas também têm a capacidade de fixar gás nitrogênio da atmosfera. Outras algas são eucarióticas, que vão desde organismos unicelulares até organismos multicelulares complexos, como algas marinhas. Estes incluem as algas verdes, os euglenóides, os dinoflagellates, as algas marrons douradas, diatomas, as algas marrons, e as algas vermelhas. Em solos, as populações de algas são frequentemente 10⁶ por grama. Esses números são inferiores aos números correspondentes de bactérias, actinomycetes e fungos, principalmente porque a luz solar necessária para a fotossíntese não pode penetrar muito abaixo da superfície do solo.

Como as algas são fototróficas, obtendo energia da fotossíntese e carbono para biomassa de dióxido de carbono, elas podem ser cultivadas em meios de crescimento que consistem inteiramente em nutrientes inorgânicos e sem um substrato de carbono orgânico. A falta de substrato orgânico impede o crescimento de bactérias heterotróficas. Utilizando um meio de crescimento inorgânico, as algas originalmente presentes no solo ou na água podem ser quantificadas pelo método de número mais provável (MPN). O método MPN baseia-se em diluir sucessivamente uma amostra, de modo que as próprias algas sejam diluídas à extinção. A presença de algas em qualquer diluição é determinada por um sinal positivo de crescimento no meio, que é tipicamente um lodo verde de algas que resulta da fotossíntese. O uso de tubos de replicação em cada diluição e uma avaliação estatística do número de tubos positivos para o crescimento em qualquer diluição permite que o número de algas presentes na amostra original seja calculado. As tabelas mpn foram desenvolvidas e publicadas específicas para um determinado desenho de MPN, incluindo o número de réplicas utilizadas em cada diluição.

1. Pese uma amostra de 10 g de solo que foi coletada úmida do campo, ou teve água adicionada a ele para que permaneça úmida por 2-3 dias. Note que o solo deve ser úmido, mas não saturado.
2. Prepare uma série de diluição de 10 vezes adicionando os 10 g de solo em 95 mL de Solução modificada de Bristol(Figura 1). Para criar a Solução modificada de Bristol, dissolva o seguinte em 1.000 mL de água: 0,25 g NaNO₃, 0,025 g CaCl₂, 0,075 g MgSO^-₄ · 7H₂O, 0,075 g K₂

A Figura 2 é um exemplo de resultados representativos.

p₁ é escolhido para ser o número de tubos de replicação da maior diluição (menos concentrada no solo) que tem o maior número de tubos positivos. Aqui, as réplicas do tubo B não contam, pois as do tubo C são de uma diluição maior. Em contraste, o número de tubos do Tubo D que mostram um sinal positivo de crescimento é menor do que os do Tubo C. Então, p₁