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Purificação de um extrato lipídico total com cromatografia em coluna

Visão Geral

Fonte: Laboratório de Jeff Salacup - Universidade de Massachusetts Amherst

O produto de uma extração de solvente orgânico, um extrato lipídeca total (TLE), é muitas vezes uma mistura complexa de centenas, se não milhares, de diferentes compostos. O pesquisador muitas vezes só está interessado em um punhado de compostos. Os compostos de interesse podem pertencer a uma das várias classes de compostos, como alkanes, cetonas, álcoois ou ácidos(Figura 1), e podem ser úteis para remover as classes compostas às quais não pertence, a fim de obter uma visão mais clara dos compostos que você está interessado. Por exemplo, um TLE pode conter 1.000 compostos, mas o proxy de temperatura da superfície do mar Uk'37 é baseado em apenas dois compostos (alkenones) e o proxy de temperatura da superfície do mar TEX86 é baseado em apenas quatro (tetraethers de glicerol dialkyl gliceol). Seria necessário que o pesquisador removesse o maior número de compostos em que não estão interessados. Isso torna menos provável que a análise instrumental dos compostos de juros (alkenones ou GDGTs) seja menos complicada por outros compostos ínteuos.

Em outros casos, uma técnica de purificação a montante pode ter produzido compostos que você deseja remover agora da amostra, como a produção de ácidos carboxílicos durante a saponificação em nosso vídeo anterior. Em ambos os casos acima, a técnica de purificação chamada cromatografia de coluna é muito útil.

Figure 1
Figura 1. Grupos funcionais geoquimicamente importantes. De Killops e Killops1.

Procedimento

1. Instalação e Preparação de Materiais

  1. Obtenha um extrato lipídeco total (TLE) usando um método de extração de solvente (Sonication, Soxhlet ou Accelerated Solvent Extraction (ASE).
  2. Junte o seguinte: pipetas e lâmpadas de vidro borossilicato queimados, gel de sílica, hexano, diclorometano (DCM) e metanol.
    1. Esses materiais podem ser adquiridos de qualquer revendedor químico. Os reagentes devem ser puros e livres de hidrocarbonetos.
  3. Também obter lã de vidro queimada e fras

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Resultados

Esta técnica de purificação produz três frascos diferentes, cada um contendo uma classe composta diferente ou um grupo de classes compostas. A complexidade de qualquer amostra a ser analisada em um instrumento foi muito reduzida. Esse processo também remove compostos, como ácidos produzidos durante uma saponificação, que podem realmente grudar em partes dos instrumentos, devido à sua baixa volatilidade, o que diminuiria sua precisão, precisão e vida útil.

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Aplicação e Resumo

Alkenones e GDGTs isoorenoidais são constituintes muito comuns de sedimentos marinhos e podem ser encontrados em todos os oceanos do mundo. Alkenonas estão sendo cada vez mais detectadas em sedimentos do lago, embora os organismos responsáveis por sua produção sejam diferentes do que no oceano, e assim a relação entre a razão Uk'37 e a temperatura da água (calibração) é diferente do oceano e até mesmo entre lagos separados. GDGTs isoorenoidais são encontrados em alguns lagos grandes e ...

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Referências

Killops, S. and Killops, V. Introduction to Organic Geochemistry. Blackwell Publishing, Malden, MA (2005).

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Overview

1:05

Principles of Column Chromatography

3:06

Silica Gel Column and Sample Preparation

4:30

Silica Gel Column Chromatography

6:22

Applications

8:52

Summary

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