Espectroscopia ultravioleta-visível (UV-Vis)

Fonte: Laboratório da Dra.B. Jill Venton - Universidade da Virgínia

A espectroscopia ultravioleta visível (UV-Vis) é uma das técnicas analíticas mais populares porque é muito versátil e capaz de detectar quase todas as moléculas. Com espectroscopia UV-Vis, a luz UV-Vis é transmitida através de uma amostra e a transmissão da luz por uma amostra é medida. A partir da transmissão (T), a absorvância pode ser calculada como A=-log (T). Um espectro de absorvência é obtido que mostra a absorvência de um composto em diferentes comprimentos de onda. A quantidade de absorvância em qualquer comprimento de onda é devido à estrutura química da molécula.

UV-Vis pode ser usado de forma qualitativa, para identificar grupos funcionais ou confirmar a identidade de um composto, combinando com o espectro de absorvância. Também pode ser usado de forma quantitativa, pois a concentração do analito está relacionada à absorvância utilizando a Lei da Cerveja. A espectroscopia UV-Vis é usada para quantificar a quantidade de DNA ou proteína em uma amostra, para análise de água, e como detector para muitos tipos de cromatografia. Cinéticas de reações químicas também são medidas com espectroscopia UV-Vis, tomando repetidas medições UV-Vis ao longo do tempo. As medições UV-Vis são geralmente tomadas com um espectotômetro. UV-Vis também é um detector muito popular para outras técnicas analíticas, como a cromatografia, porque pode detectar muitos compostos.

Normalmente, UV-Vis não é a técnica de espectroscopia mais sensível, porque pouca luz é absorvida por um curto comprimento de caminho. Outras técnicas de espectroscopia, como a fluorescência, têm maior sensibilidade, mas não são tão geralmente aplicáveis, já que a maioria das moléculas não são fluorescentes. UV-Vis tem sensibilidade semelhante a outras medidas de absorção, como espectroscopia infravermelha.

1. Calibrar o Espectrômetro

1. Ligue o espectrômetro UV-Vis e deixe as lâmpadas aquecerem por um período de tempo apropriado (cerca de 20 minutos) para estabilizá-las.
2. Encha uma cuvette com o solvente para a amostra e certifique-se de que o exterior está limpo. Isso servirá como um espaço em branco e ajudará a explicar as perdas leves devido à dispersão ou absorção pelo solvente.
3. Coloque a cuvette no espectrômetro. Certifique-se de alinhar o cuvette corretamente, pois muitas vezes o cuvette tem

UV-Vis pode ser usado para obter um espectro de compostos coloridos. Na Figura 1A,o espectro de absorvância de um corante azul é mostrado. O fundo mostra as cores de luz no espectro visível. O corante azul tem uma absorvância_máxima λ no laranja/vermelho. A Figura 1B mostra um espectro de um corante vermelho, com λ_max no verde.

Cinética pode ser medida a partir de um gráfico de absorvância em um c...

UV-Vis é usado em muitas análises químicas. É usado para quantificar a quantidade de proteína em uma solução, pois a maioria das proteínas absorve fortemente a 280 nm. A Figura 3 mostra um exemplo de espectro de citocromo C, que tem uma alta absorvância em 280 e também em 450 por causa de um grupo de heme. UV-Vis também é usado como uma técnica padrão para quantificar a quantidade de DNA em uma amostra, já que todas as bases absorvem fortemente a 260 nm. RNA e proteínas também absorvem a...