Para começar, esmague os materiais medicinais Pheretima, Periplaneta americana e Hirudo com um moedor de ervas. Peneire o pó medicinal através de peneiras de drogas padrão de número dois e número quatro. Recolher o pó entre as duas peneiras para obter o pó de amostra necessário.
Pegue um grama do pó em um tubo de centrífuga de plástico de 50 mililitros. Adicionar 20 mililitros de solução de ácido tricloroacético a 5% e homogeneizar a 1.000 RPM durante um minuto com um homogeneizador de dispersão a alta velocidade. Após homogeneização, centrifugar o homogeneizado a 1,717 G durante cinco minutos à temperatura ambiente e filtrar o sobrenadante através de um funil de vidro absorvente mergulhado em algodão num balão volumétrico de 50 mililitros.
Depois de repetir o processo de extração duas vezes com 15 e 10 mililitros de solução de ácido tricloroacético a 5%, combinar os filtrados e completar o volume para 50 mililitros com solução de ácido tricloroacético a 5%. Em seguida, adicione com precisão dois mililitros de solução de hidróxido de sódio e 0,5 gramas de parafina sólida em frascos de headspace de 20 mililitros. Em seguida, coloque-os em um forno a 70 graus Celsius por cerca de 30 minutos.
Retire os frascos para injetáveis e deixe-os arrefecer até à temperatura ambiente para que a parafina se solidifique. Para processar o headspace da amostra, adicione dois mililitros de cada solução de extracção da amostra aos frascos para injetáveis contendo parafina solidificada. Pressione a tampa e sele o frasco para injetáveis.
Coloque os frascos de headspace selados no GCMS para medição. Para obter a curva padrão, aspirar uma série de dois mililitros de solução padrão de trimetilamina sobre a camada de parafina solidificada. Coloque os frascos para injetáveis de headspace selados na máquina para medição de trimetilamina.
Para realizar o teste de precisão, aspirar dois mililitros de 0,1 microgramas por mililitro de solução padrão de trimetilamina sobre a camada de parafina solidificada. Realizar seis testes paralelos na máquina seguindo as instruções do fabricante. Para o experimento de taxa de recuperação, asse vários lotes do pó da amostra em um forno até que nenhuma trietilamina seja detectada no GCMS, como demonstrado anteriormente.
Em seguida, pegue cada grama de pó cozido no forno e fino em tubos de centrífuga de plástico separados de 50 mililitros. Adicionar 50 microlitros de solução padrão de trimetilamina a todos os tubos e extrair com solução de ácido tricloroacético a 5%, conforme demonstrado anteriormente. O tempo de retenção da trimetilamina foi de 2,3 minutos, com pico acentuado e sem interferência de outras impurezas.
As amostras de Pheretima, Periplaneta americana e Hirudo submetidas aos testes de recuperação por secagem para redução de trietilamina nas ervas apresentaram taxas médias de recuperação de 84,49, 94,66 e 85,67%, respectivamente. Trietilamina foi detectada em nove lotes de ervas com concentrações variando de 13,23 a 271,63 miligramas por quilograma.
