Escolher qualquer colônia da placa de ágar MRS contendo células de L.reuteri eletroporadas e inocular em uma microplaca de 96 poços contendo caldo MRS esterilizado por filtro por poço e um antibiótico de seleção apropriado. Incubar aerobicamente por 24 horas a 37 graus Celsius sem agitar. No dia seguinte, L.reuteri se precipitará fora da mídia na fase estacionária.
Ressuspenda a cultura por pipetagem. Adicione 200 microlitros de cultura em uma placa plana, transparente e de fundo de 96 poços. Transfira a placa para um leitor de placas e meça a densidade óptica e a fluorescência de M cherry two e outros repórteres relevantes.
A morfologia da colônia muda visivelmente na presença de oxigênio. Sob condições de baixo oxigênio, as colônias aparecem brancas, opacas, lisas e redondas. Sob condições parciais ou vazadas, as colônias aparecem onduladas e umbanet.
Enquanto sob níveis de oxigênio atmosférico as colônias sempre aparecem iscas baixas, redondas e secas. Em L.rueteri selvagem, o crescimento e a expressão da proteína repórter variam entre as colônias, dificultando deduções precisas. A cura e a retransformação do plasmídeo podem resultar em uma expressão mais estável, mas é uma ocorrência incomum e única, dependente de fenótipos mutantes mais estáveis que ocorrem espontaneamente.
