Comece extirpando pelo menos 20 testículos das pupas de mosquitos Anopheles em PBS estéril. Transfira os testículos para uma lâmina de microscópio limpa contendo uma nova gota de PBS. Usando pontas filtradas P1000 ou a ponta de uma agulha de dissecção, transfira os testículos para uma placa de embrião contendo 3,7% de formaldeído em PBST.
Incubar durante 10 minutos à temperatura ambiente. Em seguida, lave os testículos em PBST por cinco minutos à temperatura ambiente. Transfira os testículos para a placa embrionária contendo RNase A e incube por meia hora a 37 graus Celsius.
Retire a solução de ARN e adicione um mililitro da solução penetrante. Incubar os testículos na solução penetrante à temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, lave os testículos e o PBST duas vezes por cinco minutos cada.
Transfira os testículos para um tubo de 1,5 mililitro contendo 20 a 30 microlitros de solução de hibridização com a sonda de DNA marcada. Incubar a mistura durante a noite a 37 graus Celsius no escuro para permitir a hibridização. Com a ajuda da ponta filtrada AP 1000 white fure, transfira os testículos para uma placa de embrião e, em seguida, lave-os em dois XSSC por cinco minutos.
Remova o CSC e, em seguida, monte os testículos em uma lâmina de vidro fosco usando um meio de montagem disponível comercialmente contendo DAPI. Sele a lâmina com um selante deslizante de tampa e incube-a à temperatura ambiente no escuro por duas horas. Um bom nível de hibridização permitiu a visualização dos cromossomos alvo ao longo da espermatogênese.
O pareamento dos cromossomos sexuais marcados pôde ser observado nos estágios prebiótico e miótico. As espermátides portadoras de X ou Y podem ser acompanhadas ao longo da espermiogênese, marcada por diferentes níveis de condensação do DNA até a etapa final dos espermatozoides maduros em forma de flecha.
