Depois de fabricar as nanopartículas compostas de pontos de carbono de ouro, coloque um chip de safira estéril nas placas de 24 poços e células de sementes com um mililitro do meio em um único poço. Incubar as placas em ambiente úmido para atingir 70 a 80% de confluência. Adicione as nanopartículas compósitas de pontos de carbono dourado ao único poço e incube por quatro a seis horas.
Ao final da incubação, retire o meio das lascas de safira. Enxágue suavemente os cavacos com PBS e mergulhe os chips de safira em PBS para detecção de SERS. Para realizar o experimento SERS, ligue o computador, o espectrômetro Raman e o laser de 785 nanômetros.
Em seguida, inicie o software que o acompanha e execute a calibração usando wafers de silício. Clique em nova medição seguida de aquisição espectral e ajuste a faixa de espectro. Em seguida, vá para a guia de aquisição, ajuste o tempo de exposição e a potência do laser e clique em OK para iniciar uma nova aquisição espectral.
Use uma lente objetiva de 20X para uma imagem celular clara. Em seguida, mude para uma lente de 50X. Depois de selecionar um ponto nas células para medição, clique em executar para iniciar o processo e, em seguida, salve os espectros.
Para obter imagens SERS de células A549, clique em nova aquisição de imagem, selecione o intervalo a ser fotografado e clique em OK. Defina a velocidade da borda para 785 nanômetros centro para 1, 200 centímetros inverso, duração da exposição para cinco segundos e potência do laser para 50%O parâmetro pode ser modificado conforme necessário. Clique em novo de imagens ao vivo, escolha sinal para linha de base e defina o primeiro limite para 725 e o segundo limite para 1, 700. Em seguida, vá para a área configurada, defina os passos adequados e clique em OK. Finalmente, clique em executar para começar a executar imagens SERS.
O SERS Spectra revelou que, mesmo quando a concentração de azul de metileno é tão baixa quanto 10 a nove molares negativos, as nanopartículas compostas de pontos de carbono de ouro exibem excelente desempenho SERS em comparação com as nanopartículas de ouro. Espectros SERS adquiridos em 20 pontos exibiram alta similaridade. Um mês após a colocação das nanopartículas compósitas de pontos de carbono de ouro a quatro graus Celsius, a atividade média do SERS a 950, 1, 185 e 1.620 centímetros inversos mostrou um grau de decaimento de cerca de 5,43%11,44% e 13,94%, respectivamente.
Nanopartículas compósitas de pontos de carbono de ouro mal mostraram citotoxicidade para células A549. O espectro médio das células A549 é apresentado. Agregados de nanopartículas compósitas de pontos de carbono de ouro exibem sinais SERS óbvios sem ruído de fundo no mapeamento SERS de células A549.
Espectros de diferentes pontos celulares demonstraram a heterogeneidade de componentes em várias regiões citoplasmáticas.
