Comece transferindo o animal anestesiado para a estrutura estereotáxica e, em seguida, prenda a cabeça no cone do nariz e nas barras auriculares. Coloque as sondas para medir o pulso, a saturação de oxigênio pulsada, a pressão arterial e a temperatura do animal. Aplique pomada para os olhos.
Retire os cabelos com creme depilatório e limpe assepticamente o couro cabeludo com três passagens de iodo e álcool. Para um estudo terminal, remover o couro cabeludo com tesoura cirúrgica e expor o crânio a aproximadamente três milímetros da sutura lambóide caudalmente e três milímetros à frente do bregma. Excisar o couro cabeludo parietally para expor a parte interna do músculo temporal em ambos os lados.
Em seguida, remova qualquer tecido conjuntivo subcutâneo residual para que o crânio esteja limpo e seco para aplicar os eletrodos estimulantes. Em seguida, aplique gel condutor na lateral dos eletrodos que estarão em contato com o crânio. Coloque o eletrodo sobre este músculo temporal e fixe-o com super cola cirúrgica ao redor da borda em pontos intermitentes.
Em seguida, aplicar pasta de lidocaína no músculo temporal e couro cabeludo de ambos os lados sem perturbar os eletrodos. Testar a impedância dos eletrodos estimuladores extracranianos. Em seguida, coloque o mouse sob um dispositivo de imagem a laser speckle sem eletrodos de registro intracraniano.
Para aplicar a estimulação entre os dois eletrodos tACS do crânio, use um dispositivo estimulador comercial compatível com humanos que forneça uma corrente constante. Antes da estimulação, obtenha uma linha de base clara. Aplique breves períodos de estimulação liga/desliga em várias amplitudes em ambos os lados do crânio.
Garanta uma linha de base clara após a estimulação. Após os eletrodos estimuladores extracranianos serem colocados quatro milímetros lateralmente para cada lado do crânio, marcar a posição dos orifícios da broca a dois milímetros de cada lado da linha média, distantes quatro milímetros um do outro, e sutura ortogonal a sagital. Em seguida, faça dois furos de rebarba para os eletrodos de vidro.
Preencha esses orifícios de rebarba com óleo mineral estéril para evitar a entrada de corrente no crânio a partir dos eletrodos extracranianos. Em seguida, preencher microeletrodos de vidro agrupados com cloreto de sódio 0,2 molar e colocá-los com um micromanipulador nos dois orifícios de broca colocados lateralmente à sutura sagital. Coloque os micro eletrodos de vidro nos orifícios da rebarba.
Em seguida, testar a impedância dos eletrodos estimuladores extracranianos após a colocação da broca para verificar se estes não interferem no fluxo de corrente para o cérebro. Para medir o fluxo sanguíneo cerebral resultante da estimulação extracraniana, coloque o mouse sob um dispositivo de imagem a laser speckle com eletrodos de registro intracraniano. Uma vez inseridos no cérebro, execute perfis de profundidade em várias profundidades simétricas para garantir que esses microeletrodos de vidro estejam aproximadamente um milímetro dentro do córtex cerebral.
Use um sistema de digitalização para registrar dados contínuos das sondas Doppler e microeletrodos durante uma duração basal suficientemente estável. Em seguida, aplique a estimulação liga/desliga e teste a estimulação extracraniana. Para experimentos que induzam depressão disseminada, adicionar um terceiro orifício de broca no lado direito do crânio, 1,5 milímetros rostral a coronal e um milímetro lateral à sutura frontal posterior.
Preencha este orifício da rebarba com KCL para aplicação posterior. Em resposta à tACS de baixa intensidade, foram obtidos dados para os registros elétricos diretos intracranianos DC e os registros bilaterais com laser Doppler do fluxo sanguíneo cerebral. Uma resposta pequena foi observada em resposta a um estímulo de 0,75 miliampere, enquanto uma resposta maior foi observada em resposta a um estímulo de um miliamper.
Para os traços elétricos e de fluxo sanguíneo cerebral, as respostas foram assimétricas entre os lados direito e esquerdo do crânio. Imagens de crânio pontilhado a laser do fluxo sanguíneo cerebral durante os ataques mostraram aumento do fluxo sanguíneo em resposta à estimulação, que foi difundido uniformemente por todo o córtex. Após a estimulação, o fluxo sanguíneo retornou aos valores basais.
