Comece misturando e aliquotando 90 a 120 microlitros das amostras de formaldeído reticuladas de C.Elegans em um tubo de sonicação de poliestireno. Adicionar um volume igual de tampão de ressuspensão contendo detergentes 2X. Sonicate em banho-maria sonicator por sete minutos.
Misture suavemente a amostra por pipetagem e repita a sonicação por mais sete minutos. Uma vez feito, transfira o lisado sonicado para um tubo de 1,5 mililitro. Adicione meio volume de tampão de ressuspensão sem detergentes.
Após centrifugação a 13.000 G por 15 minutos a quatro graus Celsius, dividir o sobrenadante lisado em quatro partes. Armazene a peça lisada de entrada a menos 20 graus Celsius em um tubo de 1,5 mililitro. Adicionar 0,5 microgramas de trimetilação anti-H3K9, anti-histona H3 ou IgG à amostra apropriada de imunoprecipitação ou IP.
Incubar a reação a quatro graus Celsius durante a noite com rotação. No dia seguinte, alíquota os nove microlitros de proteína G revestidos por amostra IP em um tubo de 1,5 mililitro. Após duas lavagens com um mililitro de FA-150, ressuspenda as esferas magnéticas no tampão FA-150.
Uma vez feito, adicione 7,5 microlitros da suspensão de esferas magnéticas a cada mistura de anticorpos IP antes de incubar os tubos a quatro graus Celsius por duas horas com rotação. Em seguida, lave as esferas magnéticas sete vezes usando pelo menos 200 microlitros de cada solução tampão. Incubar cada lavagem a quatro graus Celsius por cinco minutos com rotação antes de coletar as contas em um suporte magnético para aspirar a lavagem.
Após aspirar a última lavagem do tampão, ressuspenda as esferas magnéticas em 50 microlitros de tampão de eluição IP de cromatina e transfira-o para um tubo de 1,5 mililitros. Após a eluição da amostra em um ThermoMixer, colete as esferas em um suporte magnético e transfira o sobrenadante para um novo tubo. Repetir a eluição com mais 50 microlitros de tampão de eluição de imunoprecipitação de cromatina.
Uma vez feito, puxe um total de 100 microlitros de sobrenadante antes de prosseguir com a reticulação reversa e eluição de DNA.
