Para começar, abra o aplicativo de software clicando duas vezes no ícone de um arquivo executável. Insira as sequências de cadeia pesada e cadeia leve nas caixas de texto sob a coluna 1 sem espaços. Para anticorpos biespecíficos, adicione cadeias pesadas ou leves adicionais no segundo conjunto de caixas de texto sob a coluna 2.
Deixe essas caixas em branco para anticorpos monoclonais com cadeias pesadas e cadeias leves idênticas. Marque as caixas de seleção de ciclização de terminal final e recorte de terminal C se essas variantes de terminal de cadeia pesada forem aplicáveis. Adicione modificações químicas, incluindo linker e carga útil para conjugados de drogas de anticorpos, às caixas de modificação química de cadeia pesada e leve usando composições elementares, como cloreto de cálcio.
Essas modificações serão adicionadas à respectiva subunidade ou cadeia proteica. Especifique o número de ligações dissulfeto nas moléculas de proteína na caixa de texto marcada número total de dissulfetos. Insira o número de ligações dissulfeto de cadeia pesada não reduzidas na caixa de texto dissulfeto de cadeia pesada não reduzida e o número de ligações dissulfeto de cadeia leve não reduzidas na caixa de texto dissulfeto de cadeia leve não reduzida, dependendo da extensão da redução.
Se a glicosilação estiver presente na cadeia leve de anticorpos monoclonais, marque a caixa de seleção de cadeia leve é glicosilada. Clique no botão Procurar para selecionar uma pasta de saída para a caixa de texto da pasta de saída e digite o nome do arquivo de saída sem uma extensão de arquivo na caixa de texto Arquivo do Excel sem extensão. Em seguida, clique no botão Enviar.
Uma mensagem criada pelo relatório de cálculo de massa aparecerá na tela e o arquivo de saída poderá ser encontrado na pasta designada pelo usuário. O aplicativo será fechado automaticamente. As composições químicas, massas calculadas, massas medidas e erros de massa de vários anticorpos monoclonais são resumidos nesta tabela.
Um padrão de anticorpos monoclonais comercialmente disponível foi selecionado para representar um anticorpo monoclonal convencional com cadeias pesadas idênticas, cadeias leves idênticas e um sítio de glicosilação N-ligado na região FC. Um anticorpo monoclonal com uma cadeia leve adicional N-glicosilação ligada, um anticorpo monoclonal biespecífico e um anticorpo monoclonal conjugado de droga anticorpo também foram escolhidos para ampliar o uso da aplicação. Os pequenos erros de massa entre as massas calculadas e as massas medidas estavam dentro dos critérios normais de aceitação do erro de massa, sugerindo que as massas calculadas foram precisas.
