Para preparar uma barra de cabeça em forma de ômega para o apoio de cabeça do peixe-zebra, prenda um pedaço de argila modeladora à base de óleo a um micromanipulador de três eixos. Em seguida, insira um braço da barra da cabeça na argila e oriente a barra da cabeça horizontalmente. Prepare o canhão para manter o corpo do peixe no lugar durante a cirurgia.
Para remover o excesso de pele e água dos locais de fixação do crânio, prepare quatro cotonetes de tecido cortando uma toalha de papel em um quadrado de três centímetros. Em seguida, dobre os quadrados de papel ao longo de sua diagonal para produzir uma estrutura semelhante a um tubo e torça as extremidades do tubo em um ponto fino. Após anestesiar os peixes com EMT a 0,03%, realizar perfusão da seringa com EMT a 0,01% para manter a sedação durante todo o procedimento.
Embrulhe o peixe em papel de papel úmido começando da ponta da cauda até cerca de um milímetro caudal à guelra. Em seguida, enrole um tubo de plástico macio com uma fenda longitudinal ao redor do tecido de papel que cobre o peixe desde a extremidade da cauda até cerca de dois milímetros caudais à guelra. Embrulhe o papel toalha ao redor da tubulação.
Em seguida, enrole um tubo de plástico macio cortado do bulbo de uma pipeta de transferência de plástico ao redor do papel toalha. Coloque o peixe embrulhado no canhão. Em seguida, com o uso de bisturi, remova a pele que cobre os locais de fixação, duas áreas triangulares do crânio rostrolateral ao cerebelo e acima das brânquias.
Em seguida, use cotonetes de tecido para secar os locais de fixação e limpar qualquer pele restante. Usando uma ponteira de pipeta de 10 microlitros, aplique uma gota de cola de tecido no centro de cada local de fixação. Coloque o corpo do peixe na posição ereta e posicione a barra da cabeça ligeiramente acima e caudal aos locais de fixação.
Em seguida, prepare o cimento dental misturando uma colher pequena de polímero com quatro gotas de monômero rápido e uma gota de catalisador cinco. Mexa a mistura uniformemente por 15 segundos. Imediatamente após a mistura, utilizar uma micropipeta e uma ponteira de pipeta de 10 microlitros para aplicar o cimento nos locais de fixação e na região entre os locais.
Em seguida, usando um micromanipulador, pressione suavemente a barra da cabeça sobre o cimento. Cubra a barra da cabeça com o cimento restante e aguarde 12 minutos para permitir a cura do cimento. Em seguida, para melhorar o acesso óptico ao prosencéfalo para imagens de cálcio, use um bisturi para remover a pele acima do telencéfalo.
Após a cura, retire a argila da barra da cabeça. Em seguida, prepare um módulo de carregamento de peixes para o micromanipulador. Em seguida, transfira toda a cápsula do canhão para o ajustador de passo no módulo de carregamento de peixes.
Usando o micromanipulador, posicione o peixe com a barra da cabeça colocada em cima dos postes metálicos do palco da cabeça. Aumente ligeiramente o ângulo de inclinação do peixe. Aplique cola curável ultravioleta para fixar a barra da cabeça aos postes metálicos.
Em seguida, retire o peixe da cápsula e prenda o estágio da cabeça na placa de base dentro do tanque semi-hexagonal. Após a cirurgia, mergulhe o animal na água do tanque de peixes para se recuperar da anestesia.
