Ligue o laser e aguarde 30 minutos para que a energia se estabilize. Ajuste o comprimento de onda para 920 nanômetros e a potência para aproximadamente 50 miliwatts na amostra. Coloque a câmara de gravação com o peixe-zebra contido na cabeça na plataforma experimental.
Posicione a lente objetiva próxima à superfície do prosencéfalo. Para gravação de comportamento, ligue as luzes infravermelhas de 810 nanômetros em ambos os lados do tanque. Selecione a fonte de entrada para exibição de RV e comece a gravar dados.
Em seguida, abra o obturador a laser e ative o tubo multiplicador de fotos. Elevar gradualmente o cristalino objetivo até que o prosencéfalo dorsal seja revelado. Use um atuador piezo para adquirir imagens em várias profundidades para aumentar o número de neurônios registrados.
Duas imagens de fótons de cálcio registram a atividade individual do neurônio no prosencéfalo dorsal até 200 mícrons de profundidade através de crânios intactos. A gama de imagens inclui as áreas paleo, Dm, cDc, rDc, e parte do Dl cobrindo 30% do prosencéfalo adulto do peixe-zebra. O registro comportamental simultâneo realizado durante exames de imagem cerebrais permite a identificação de correlatos neuronais de saídas motoras.
Durante a aquisição de imagens, os movimentos da cauda não devem causar artefatos de movimento visíveis.
