Para a recuperação do FPE da biblioteca fúngica, comece esfregando os isolados fúngicos em uma placa de SDA de um quarto de força. Incubá-lo na escuridão a 25 graus Celsius por 10-14 dias antes da colheita de conídios. Em seguida, pipetar 2-3 mL de Tween 80 a 0,03% em uma placa cultivada.
Em seguida, use um laço de inoculação para raspar os conídios. Em seguida, transfira a suspensão fúngica para um tubo de centrífuga. Vórtice vigorosamente a suspensão na velocidade mais alta e, em seguida, pipete uma amostra em um hemocitômetro para contar o número de conídios.
Diluir os conídios dentro da suspensão usando 0,03% Tween 80 até obter a concentração desejada. Para preparar a câmara de inoculação, primeiro corte um disco foliar de 9 centímetros de diâmetro usando a placa de Petri de fundo como molde ou com tesoura. Em seguida, prepare 1,5% de ágar água para cada prato usando um micro-ondas.
Despeje 30 mL do ágar água resfriada na placa de Petri e deixe solidificar em uma capela de fluxo laminar. Quando a superfície do ágar estiver semissólida, coloque o disco foliar com sua superfície abaxial voltada para cima e, em seguida, pressione-o levemente para inseri-lo no ágar. Agora, coloque 20 adultos ápteros no disco foliar.
Abra a tampa da câmara de inoculação para pulverizar 0,3 mL de suspensão de conídios diretamente sobre os pulgões e o disco foliar. Depois que a suspensão secar, feche a tampa para evitar o afogamento dos pulgões da mostarda. Em seguida, selar a câmara de inoculação usando filme de parafina para manter uma alta quantidade de umidade.
Coloque a câmara em uma incubadora regulada a uma temperatura de 25 graus Celsius com um fotoperíodo claro e escuro de 12 horas cada. Use um estereomicroscópio para contar a mortalidade a cada 12 horas por 5 dias. A triagem de virulência revelou uma taxa de sobrevivência consistente para pulgões mostarda, com o grupo controle exibindo uma taxa de sobrevivência de 85%.
Cordyceps cateninnulata demonstrou a capacidade de matar pulgões mais rápidos, resultando em moralidades de 50% e 90% em 3 dias e 4,5 dias após a inoculação, ou DPI. As cepas Beauveria 141, 143 e 153 mostraram lenta capacidade de matar afídeos com apenas 5% de mortalidade em 3 DPI. Com exceção de Purpureocillium, a maioria dos isolados de PFE exibiu taxas de mortalidade corrigidas superiores a 70% em 5 DPI.
Beauveria bassiana demonstrou a maior taxa de mortalidade de 100% entre os isolados de PFE. A micose por PFE foi observada em cadáveres de pulgões mostarda infectados com espécies de Metarhizium, Beauveria, Purpureocillium lilacinum e Cordyceps cateniannulata durante a triagem de virulência.
