Comece cortando microarrays impressos idênticos da membrana de nitrocelulose e colocando-os em um recipiente adequado para sondagem. Para reduzir a ligação não específica, adicione o buffer de bloqueio MP-TBST aos microarrays e incube por uma hora em um agitador rotativo. Após a incubação, substitua o tampão por MP-TBST fresco.
Incubar as matrizes com anticorpos monoclonais e MP-TBST por duas horas em um agitador rotativo. Após a incubação, remova a solução da sonda molecular. Submerja os arrays totalmente em TBST limpo.
Substitua imediatamente o tampão por um novo volume para remover a solução de sonda residual. Coloque as matrizes em um agitador giratório por cinco minutos. Substitua o TBST por um novo volume de buffer e coloque as matrizes no agitador por mais cinco minutos.
Em seguida, incubar as matrizes com anticorpos conjugados de fosfatase alcalina por duas horas em um agitador rotativo. Uma vez que a incubação esteja completa e os microarrays tenham sido lavados, cubra-os em tetrazólio azul nitro e solução de desenvolvimento de cor BCIP para detectar cromogenicamente a ligação de anticorpos. Termine a reação mergulhando o array em água limpa da torneira.
Em seguida, coloque as matrizes para secar entre o papel de mancha durante a noite à temperatura ambiente. A abundância relativa de 16 epítopos diagnósticos de polissacarídeos não celulósicos da parede celular de plantas foi detectada pela anexação de anticorpos monoclonais dirigidos por glicanos aos extratos impressos. A maioria dos glicanos extraídos foi detectada dentro da fração de hidróxido de sódio alcalino.
Fortes sinais de ligação foram registrados para LM-10 e LM-11 representando xilana e arabinoxilano dentro das cascas de todas as variedades de manga testadas. LM-10 e LM-11 apresentaram ligação preferencial ao extrato de tecido radicular de alho e fraca ligação ao extrato de tecido foliar. LM-19 representando homogalacturonan parcialmente metilesterificado ou não esterificado ligado fortemente a alguns extratos de variedades de manga e apenas às frações da polpa de café.
