Comece a preparação da biotinta hidrogel assepticamente dentro de um gabinete de biossegurança, preparando primeiro uma solução estoque de 0,25 miligramas por mililitro de metacrilato alfa de PEG em meio de cultura de células estéreis sem FBS. Além disso, usando TCEP estéril de 20 milimolares, prepare soluções-estoque de 250 milimolares de TDT, reticulante degradável MMP2 e peptídeo RGD. Finalmente, prepare uma solução estoque de 15% em peso de PEO usando água destilada.
Combinar as quantidades necessárias das soluções-estoque de reagentes preparadas e meios de cultura de células de baixo soro com os fibroblastos em um tubo cônico de 15 mililitros. Misture bem a biotinta resultante usando uma pipeta de deslocamento positivo para garantir que as células sejam únicas. Verifique se a solução precursora final tem um pH de 6,2.
Retire a cabeça de impressão da bioimpressora para aceder à seringa de vidro. Para carregar a biotinta na seringa de vidro, remova o êmbolo da seringa. Em seguida, colete a biotinta do tubo da centrífuga usando uma seringa separada instalada em uma agulha de ponta romba de 1,5 polegada de comprimento e calibre 15.
Substitua a agulha de calibre 15 por uma agulha de 30 gauge, 0,5 polegada de comprimento e ponta romba e transfira-a para a seringa de vidro, evitando a formação de bolhas de ar. Finalmente, coloque a seringa de vidro dentro da cabeça de impressão e conecte os componentes da cabeça de impressão, garantindo uma montagem firme para impressão.
