Para iniciar a impressão 3D das construções de hidrogel fotosintonizáveis, coloque a seringa de vidro com a biotinta de hidrogel contendo fibroblastos dentro da cabeça de impressão e conecte os componentes da cabeça de impressão, garantindo uma montagem firme para impressão. Em seguida, usando as setas direcionais do software Pronterface, ajuste manual e cuidadosamente a posição da agulha de extrusão dentro da lama de banho de suporte no centro do poço da placa do poço. Deixe pelo menos um milímetro de chorume abaixo da ponta da agulha.
Quando a ponta da agulha estiver corretamente colocada, pressione o botão de impressão no software Pronterface e aguarde a conclusão da impressão. Repita as etapas demonstradas anteriormente até obter o número desejado de construções bioimpressas. Após a impressão, deixe a placa do poço com as construções cobertas à temperatura ambiente no armário de biossegurança por uma hora.
Isso permite que a polimerização catalisada por base ocorra com a biotinta hidrogel fotosintonizável. Em seguida, coloque a placa do poço com as construções bioimpressas em 3D em uma incubadora estéril de 37 graus Celsius por 12 a 18 horas para derreter a lama do banho de suporte. Em seguida, dentro de um gabinete de biossegurança, mude a mídia em torno das construções bioimpressas.
Para isso, remova manualmente o meio e o banho de suporte de gelatina derretida dos poços sem atrapalhar as construções. Em seguida, adicione um volume apropriado de meio de soro baixo a cada poço. Novamente, 24 horas antes do tempo de enrijecimento desejado, substituir o meio nos poços por meios de soro baixo suplementados com 2,2 milimolares de LA estéril.
No ponto de tempo de enrijecimento desejado, retire metade do meio dos poços a serem enrijecidos e coloque a placa sem tampa sob a luz ultravioleta ou UV de um OmniCure. Ligue a luz UV com um filtro passa-banda de 365 nanômetros para enrijecer as construções por cinco minutos. Uma vez enrijecido, remova o meio restante desses poços antes de adicionar novos meios de soro baixo a cada poço.
Retornar a placa à incubadora até realizar o estudo de ativação de fibroblastos no momento desejado, A combinação de uma biotinta ácida e lama de banho de suporte básico facilitou a polimerização das construções bioimpressas em 3D e manteve as estruturas cilíndricas. A microscopia do hidrogel fluorescente mostrou poros no interior do hidrogel induzidos por micropartículas de gelatina no banho suporte. A microscopia confocal mostrou sobre-enrijecimento do controle espacial em 3D.
Ensaios de viabilidade de fibroblastos revelaram que construções com espessura de parede de 300 mícrons e com 4 milhões de células por mililitro superaram todas as outras condições em todos os momentos. A viabilidade atingiu o pico no sétimo dia, com cerca de 91% das células coradas vivas, e no dia 14, 85% ainda estavam viáveis.
