Comece limpando suavemente as cascas dos ovos de galinha fertilizados com lenços umedecidos sem etanol sem fiapos. Incubar os ovos rombos terminam até o estágio desejado, geralmente HH20 a 21. Antes de iniciar o procedimento, prepare o número necessário de nós amarrando um nó overhand solto em uma sutura de 10 zero de 1,5 centímetro de comprimento.
Certifique-se de que o nó não é apertado e é grande o suficiente para caber sobre os átrios. Abra a casca do ovo suavemente com a extremidade inversa da pinça, apoiando o ovo firmemente para evitar rachaduras indesejadas. Abra uma janela da extremidade romba do ovo e remova as membranas externa e interna.
Use micro tesoura para remover apenas a membrana vitelina necessária. Uma vez que o embrião está livre da membrana vitelina, coloque a pinça de ponta fechada sob o segmento dorsal do embrião e levemente vire-a para expor o lado esquerdo. Remova todas as membranas imediatamente ao redor do broto atrial, removendo as membranas grosseiras primeiro e, em seguida, usando pinças mais finas para remoção da membrana fina.
Posicione o nó pré-preparado próximo ao embrião. Orientar corretamente o nó aberto sobre o botão atrial esquerdo para executar o aperto do nó. Com micro tesoura, corte as extremidades de sutura em excesso o mais próximo possível da gema e retire o excesso de sutura com uma pinça.
Finalmente, usando pinça fechada, devolva o embrião à sua posição original. Após completar a microcirurgia, cubra o ovo com uma camada dupla de paras e devolva-o à incubadora. A ligadura atrial esquerda, ou modelos LAL, mostrou que uma estrutura miocárdica mais compacta foi alcançada com alterações morfológicas significativas em relação ao desenvolvimento normal.
Observou-se deposição de matriz extracelular ao redor do interstício cardíaco, lembrando fibrose miocárdica. As medidas morfométricas de porosidade revelaram menor cavidade ventricular esquerda e compactação trabecular nos modelos LAL. Na HH 25 do modelo LAL observou-se aumento da cavidade ventricular direita, alteração da arquitetura trabecular e volume miocárdico.
A tomografia de coerência óptica dos modelos LAL mostrou redução significativa do tamanho e diâmetro do ventrículo esquerdo em relação ao controle. Os grupos LAL também exibiram um aumento na espessura da parede em comparação com os grupos controle em HH 25.
