Depois de colocar a fibra de microdiálise no antebraço, coloque a seringa de uso único na bandeja do suporte da seringa nas bombas de microinfusão. Durante a fase de hiperemia, perfundir ringers com lactato, soro fisiológico ou solução veicular. Fixe a unidade de aquecimento local à pele, garantindo que cubra a membrana semipermeável, utilizando o disco adesivo da sonda.
Insira a sonda de fluxometria doppler a laser na abertura no centro do aquecedor local e comece a registrar os valores de fluxo de hemácias ou hemácias clicando em Iniciar no software de aquisição de dados. Coloque um manguito automático de pressão arterial no braço de um sujeito não instrumentado. Ajuste os aquecedores locais para 33 graus Celsius para manter uma temperatura da pele termoneutra.
Para adicionar um comentário à gravação contínua no software de aquisição de dados, clique na caixa de texto no canto superior direito da tela. Digite um comentário, selecione qual canal deve receber o comentário e clique em Adicionar. Inicie a coleta de dados de linha de base assim que o fluxo de eritrócitos se estabilizar em 33 graus Celsius de calor local inserindo o comentário, comece a linha de base.
Medir e registrar a pressão arterial basal após cinco a 10 minutos da coleta de dados basais. Insira o comentário, linha de base final no software de aquisição de dados. Desligue as bombas de microinfusão e substitua as seringas de solução de ringer com lactato pela seringa que contém a menor concentração de acetilcolina.
Depois de fixar as novas seringas e confirmar a perfusão do fluido através da sonda, ligue as bombas de microinfusão novamente. Digite start minus 10 como um comentário na gravação do software de aquisição de dados. Durante o último minuto de perfusão, medir e registrar a pressão arterial.
Uma vez terminada a perfusão para uma determinada concentração, substitua a seringa pela próxima concentração mais alta. Após a perfusão final, elevar a temperatura do aquecedor local para 43 graus Celsius. Deixe o fluxo de hemácias estabilizar e substitua a solução de ringers por nitroprussiato de sódio.
Medir e registrar a pressão arterial aproximadamente a cada três minutos durante essa fase de vasodilatação máxima. Quando ocorrer um platô máximo de fluxo de hemácias, selecione Parar no canto inferior direito do software de aquisição de dados. Registre a coleta de dados da linha de base conforme demonstrado anteriormente.
Com base nos requisitos do protocolo, aumente os aquecedores locais para 39 ou 42 graus Celsius. Após os platôs do fluxo de hemácias em resposta à aplicação de calor local, perfundir L-Name através da sonda de microdiálise. Em seguida, ajuste os aquecedores locais para 43 graus Celsius.
Em seguida, iniciar a profusão da sonda de microdiálise com nitroprussiato de sódio após o platô do fluxo de hemácias a 43 graus Celsius, permitindo que o fluxo atinja seu platô máximo. Uma vez iniciada a profusão para cada dose, observou-se um aumento contínuo do fluxo de hemácias até um pico, seguido por um platô induzido por calor e SNP. A profusão de nitroprussiato de sódio produziu vasodilatação local máxima, descrita como um aumento no fluxo de hemácias.
Um fluxo de hemácias relativamente menor foi observado na presença de um inibidor da óxido nítrico sintase. Durante a vasodilatação local máxima, haverá um aumento exponencial do fluxo de hemácias, devido à inibição prévia da óxido nítrico sintase. No protocolo de aquecimento local, L-Name foi perfundido após atingir um platô estável no fluxo de hemácias.
Um rápido declínio foi observado no fluxo de hemácias até atingir um novo platô em resposta ao L-Name. O aquecimento produziu um pico adicional e uma resposta nadir no fluxo de hemácias.
