Para começar, posicione o mouse em uma bandeja de dissecção equipada com um cone nasal para administração da anestesia. Verifique os reflexos do animal, como a retração da pata, para confirmar se a anestesia atingiu uma profundidade adequada. Em seguida, posicione o mouse para expor a pele dorsal.
Umedeça a pele com amplo etanol 70% para evitar o descolamento dos pelos. Faça uma incisão ao longo das costas, começando pela parte inferior do tórax e estenda-a até o pescoço. Usando pinças de ponta dobrada, levante suavemente o tecido adiposo marrom interescapular e corte cuidadosamente o tecido aderido.
Levante a almofada de gordura em direção à cabeça e continue cortando os tecidos anexados para abrir cuidadosamente a região até que a veia da Sulzer fique exposta. Agora, corte cuidadosamente a veia da Sulzer. Usando ponta de pipeta de 200 microlitros cortada no fundo e uma pipeta P100, colete aproximadamente 40 microlitros de sangue e armazene o sangue coletado em um tubo de coleta de sangue.
Manter o tubo no gelo até o processo de coleta do soro. Umedeça generosamente a pele ventral com etanol 70% para evitar o descolamento dos cabelos. Usando tesoura, abra cuidadosamente a cavidade torácica para expor o coração.
Usando uma seringa de um mililitro equipada com uma agulha de meia polegada de calibre 29, puncione precisamente a área do ápice do ventrículo esquerdo. Insira dois terços da agulha aproximadamente três a cinco milímetros na horizontal direita do ápice cardíaco e puxe a seringa de volta para coletar sangue do ventrículo esquerdo. Em seguida, centrifugar as amostras de sangue a 10.000G por 10 minutos a quatro graus Celsius.
Usando uma pipeta, colete o sobrenadante e prossiga com a extração e análise do metabólito.
