Para começar, selecione ímãs retangulares planos para montar os conjuntos de ímãs para padrões de tiras. Corte placas de silicone de 2 milímetros de espessura em retângulos das dimensões 2 x 8 x 30 milímetros. Em seguida, monte os ímãs retangulares e as placas de silicone camada por camada.
Para padrões de matriz de pontos, monte os ímãs cilíndricos em miniatura garantindo que cada conjunto de ímãs consista em 36 ímãs cilíndricos dispostos em uma grade 6 x 6. Para preparar um dispositivo de cultura celular, use um perfurador para criar um orifício retangular de 1 x 1 centímetro na placa de silicone de 2 milímetros de espessura. Corte a placa de silicone ao redor do orifício para criar um molde redondo com o furo no centro.
Para esterilização, coloque os moldes no limpador ultrassônico. Esterilizar os moldes com água pura por 10 minutos. Em seguida, substitua a água com etanol 75% por 10 minutos.
Seque os moldes em uma caixa esterilizadora a 65 graus Celsius por 60 minutos. Em seguida, fixe o molde de silicone esterilizado em uma lâmina de célula de vidro redonda de 25 milímetros e pressione suavemente o molde para que o silicone adera ao vidro. Coloque os conjuntos magnéticos em uma placa de 6 poços e posicione o dispositivo de cultura de células em cima do conjunto de ímãs.
Para preparar a solução de injeção de Gd-DTPA de 30 milimolares, misturar 30 microlitros de Gd-DTPA com 470 microlitros de meio de cultura celular completo. Para criar os padrões celulares, centrifugar a suspensão HUVECs a 200G por 5 minutos. E ressuspender o pellet em meio contendo Gd-DTPA.
Após a contagem celular, ajuste a densidade celular para aproximadamente 2 vezes 10 para as 5 células por mililitro usando um meio contendo Gd-DTPA. Misture suavemente a suspensão celular e adicione 200 microlitros à cavidade do molde de cultura celular para criar uma superfície líquida cheia de borda. Incubar a placa por 3-6 horas até que as células adiram ao substrato.
Após a incubação, substitua o meio contendo Gd-DTPA por um meio de cultura completo e remova o dispositivo de cultura celular do conjunto magnético. Para preparar um dispositivo de cultura de células para padronização de células listradas, substitua as placas de silicone grossas do dispositivo por placas finas. Depois de padronizar o primeiro tipo de células, como demonstrado anteriormente, mova o dispositivo de cultura celular 1 milímetro dos ímãs abaixo para a direita.
Aplique o mesmo procedimento de padronização ao segundo tipo de células. E mova o terceiro dispositivo de cultura de células 1 milímetro dos ímãs abaixo para a direita. Padronize o terceiro tipo de células conforme demonstrado.
Depois de padronizar todos os tipos de células, lave as lâminas de vidro duas vezes com 200 microlitros de PBS. Finalmente, substitua o PBS por um meio de cultura celular completo. Testes de viabilidade realizados nas HUVECs tratadas com Gd-DTPA por 12 horas não mostraram diminuição significativa na viabilidade celular, exceto para 50 milimolares de Gd-DTPA, o que resultou em uma diferença estatística, mas preservaram uma taxa de vida de aproximadamente 90%Na padronização de células multitipos, um padrão celular tripartido de listras lado a lado e matrizes de pontos concêntricas foi gerado.
