Para começar, pegue um filme plástico de polietileno de 16 centímetros de comprimento, 12 centímetros de largura e 20 micrômetros de espessura. Use uma ferramenta de moagem de vidro para pressionar 30 saliências semicirculares em um layout padrão de PCR de 96 poços. Exponha ambos os lados do filme plástico de polietileno prensado à luz UV por uma hora para desinfetá-lo.
Adicione uma pequena quantidade de álcool polivinílico a 10% à superfície semicircular. Em seguida, coloque cerca de 3.000 vespas fêmeas de trichogramma dendrolimi anestesiadas em uma caixa de coleta. Coloque o lado convexo do cartão de ovo de filme em direção à caixa coletora e prenda as bordas com um elástico.
Agora adicione quatro microlitros de solução de aminoácidos a cada protrusão. Em seguida, cubra com outro pedaço de filme plástico de polietileno. Use um elástico para cobrir bem a caixa coletora com duas folhas de plástico.
Deixe as vespas parasitarem livremente por quatro a oito horas. Fornecer água a 10% de sacarose através de algodão úmido durante a parasitização. Em seguida, obter a solução de aminoácidos parasitados da protrusão interna do cartão de ovo artificial e transferi-la para a tampa de tubos de 1,45 mililitro.
Cubra a tampa do tubo com uma rede de nylon de 10 micrômetros, com diâmetro de 25 milímetros. Em seguida, prenda levemente a rede de nylon no tubo. Centrifugar o tubo superior direito a 1,360 g durante 10 segundos.
Recolher a solução filtrada que contém o veneno. Guarde o veneno a menos 80 graus Celsius para análises adicionais. A análise de BCA das amostras de veneno mostrou que a concentração de proteína do veneno variou de 0,35 a 0,46 microgramas por microlitro.
O controle negativo da solução de aminoácidos apresentou concentração proteica de 0,03 a 0,05 microgramas por microlitro. A análise SDS-PAGE do veneno mostrou uma gama de proteínas que abrange de menos de 10 quilodaltons a mais de 130 quilodaltons de tamanho.
