Injeção Intranodal de Células B16F10-GP no Linfonodo Inguinal de Camundongos

Comece aspirando 20 microlitros de suspensão de células de melanoma B16F10-GP usando uma seringa de insulina de 100 U. Retire as bolhas da seringa. Em seguida, em um camundongo submetido à cirurgia de ressecção tumoral, injete a suspensão celular em um linfonodo inguinal.

Insira a agulha a partir da extremidade distal do linfonodo e mova-a lentamente para o centro do linfonodo. Observe inchaço significativo do linfonodo mostrando que o líquido é injetado com precisão. Injete um volume igual de PBS no linfonodo inguinal do outro lado.

Sutura da incisão com sutura 3-0. Desinfete a pele ao redor da ferida com iodopovidona, em seguida, coloque o rato em uma gaiola limpa e mantenha o calor usando luz infravermelha. Mantenha o mouse em decúbito lateral e monitore continuamente até que a consciência seja recuperada.

Após o implante com células B16F10-GP, metástases linfonodais foram observadas pela coloração de hematoxilina e eosina. Na fase inicial, o linfonodo metastático mostrou ocupação parcial por células tumorais, com algumas áreas ainda contendo linfócitos não afetados. Na fase tardia, o linfonodo metastático estava preenchido por células tumorais acompanhadas de angiogênese tumoral.

Além disso, a frequência de células T CD8 positivas antígeno-específicas no sangue periférico foi de 2,81% no estágio inicial, caindo para 1,48% no estágio tardio. Curiosamente, enquanto a porcentagem de células T CD8 positivas permaneceu estável nos linfonodos não metastáticos, ela foi temporariamente aumentada no linfonodo metastático no estágio inicial, mas diminuiu acentuadamente no estágio tardio.