Para começar, revestir a membrana da plataforma de cultura celular reconfigurável montada com cinco microgramas por centímetro quadrado de fibronectina por uma hora à temperatura ambiente para melhorar a fixação celular. Em seguida, usando uma pipeta p200, aspirar a solução de revestimento. Coloque bem o estêncil de padronização no módulo principal.
Adicione mídia celular ao canal de poço e inferior do dispositivo. Seme células endoteliais da veia umbilical humana para dentro do poço. Coloque o dispositivo em uma placa de Petri.
Adicione uma tampa de tubo cônico de 15 mililitros contendo água deionizada à placa de Petri para manter a umidade local. Transfira a configuração da placa de Petri para a incubadora. Para cultivar as células em fluxo, proceder à reconfiguração da plataforma do poço aberto para o modo microfluídico.
Para isso, preencha os reservatórios e tubos com meios de crescimento de células endoteliais. Coloque a carcaça inferior no estágio de amostragem. Insira o módulo de núcleo de poço aberto na carcaça inferior, remova o estêncil, aspirar o meio celular do poço do módulo e coloque o módulo de fluxo no poço.
Em seguida, coloque a carcaça superior para selar bem o módulo de fluxo no módulo principal. Conecte as pontas dosadoras de entrada e saída às portas do módulo de fluxo. Ligue a bomba peristáltica para introduzir o fluxo de fluido no sistema.
Pare a bomba quando o tempo desejado para a exposição ao fluxo puro for atingido. Remova as pontas dosadoras de entrada e saída e, em seguida, remova a carcaça superior. Remova suavemente o módulo de fluxo do poço usando uma pinça.
Finalmente, adicione 100 microlitros de meio celular ao poço antes de realizar o ensaio desejado. As células cultivadas sob fluxo, alinhadas ao longo da direção do fluxo, enquanto as células cultivadas sem fluxo permaneceram aleatoriamente orientadas. A exposição das células ao estresse puro resultou na upregulation do fator Kruppel-like 2 e da óxido nítrico sintase endotelial, que desempenham papéis críticos em vasos sanguíneos saudáveis.
