Depois que os organoides gástricos derivados do paciente estiverem prontos para embalagem, comece a passagem de rotina dos organoides. Primeiro, remova o meio de cada poço, contendo os organoides, embutidos na matriz da membrana basal, feito na placa de 24 poços. Em seguida, distribua um mililitro de mídia DMEM F12 avançada gelada, diretamente em uma cúpula de matriz de membrana basal.
Continue aspirando e dispensando o meio, até que todos os fragmentos da cúpula se desprenda da placa. Em seguida, transporte o meio e a matriz fragmentada da membrana basal do poço para o próximo poço e repita o processo para todos os poços programados para embalagem. Depois de desmontar a última cúpula da matriz da membrana basal, distribua o meio e a mistura em um tubo de 1,5 mililitro.
Conecte uma ponta de 1000 microlitros a uma pipeta P1000 e, em seguida, insira essa ponta em uma ponteira de 200 microlitros. Usando esta pipeta configurar vigorosamente pipetar a mistura de matriz organoide para cima e para baixo, aproximadamente 25 vezes para fragmentar os organoides em pequenos pedaços. Centrifugar a mistura organoide fragmentada, usando uma centrífuga de mesa a quatro graus Celsius por 30 segundos a 2000 G.Usando uma pipeta, aspirar o sobrenadante da matriz de membrana basal e do meio.
Adicione o volume calculado da matriz fresca da membrana basal aos organoides peletizados no tubo. Pipetar suavemente o conteúdo do tubo para cima e para baixo para misturar. Aliquote rápida, 50 microlitros da mistura de matriz organoide em poços individuais de uma placa de 24 poços.
Tampe a placa imediatamente e, em um único movimento suave, vire a placa de cabeça para baixo. Coloque a placa invertida em uma incubadora de cultura de tecidos de 37 graus Celsius por 35 minutos para permitir que a matriz da membrana basal se polimerize. Finalmente, adicione 500 microlitros de meio organoide gástrico pré-aquecido a cada poço.
No dia 20 pós-iniciação, os organoides estavam prontos para serem passados, indicados por um grande tamanho organoide ou um interior escurecido. Os organoides deixados para ir além desses pontos, começaram a se decompor em monocamadas 2D. Depois de empacotar e re-semear gástrica, as cúpulas continham muitos fragmentos organoides que se reorganizaram em muitos mais organoides muito rapidamente.
