Comece adicionando 2,125 mililitros de gradiente de densidade isotônico a um tubo de polipropileno de 15 mililitros contendo homogeneizado cerebral murino. Recarga cada tubo com tampão de fax para um volume final de 8,5 mililitros. Inverta suavemente os tubos 20 vezes para misturar completamente.
Usando uma pipeta de transferência graduada estreita, subponha suavemente quatro mililitros de gradiente rosa de 37% de densidade, estabelecendo duas camadas limpas. Alterne as pipetas de transferência e subponha dois mililitros do gradiente de densidade azul de 70% abaixo da camada de 37%. Transfira os tubos para uma centrífuga a quatro graus Celsius e gire-os a 500 G durante 20 minutos com a rampa de travagem ajustada para a configuração mais baixa.
Após a centrifugação, descarte a mielina do topo do tubo de 15 mililitros usando uma pipeta de transferência limpa. Recolha cuidadosamente o fragmento superior do gradiente de densidade num tubo de polipropileno limpo de 15 mililitros utilizando outra pipeta de transferência. Em seguida, reúna todas as células da amostra circulando lentamente a pipeta ao longo das laterais do tubo enquanto coleta o fragmento enriquecido imunologicamente.
Transfira o fragmento enriquecido imunemente para um novo tubo de polipropileno de 15 mililitros. Lave a amostra adicionando 10 mililitros de fax ao tubo. Inverta suavemente o tubo 20 vezes para misturar completamente.
Gire os tubos em uma centrífuga resfriada com a rampa de frenagem ajustada para a configuração mais baixa para pellet as células imunes isoladas.
