Analise o painel de anticorpos, confirme se o citômetro tem um mínimo de quatro lasers, incluindo vermelho, amarelo, azul e violeta. Estabeleça a matriz de compensação com esferas de compensação ou controles de célula de mancha única. Para calibrar e padronizar, execute esferas fluorescentes arco-íris no início de cada experimento, ajustando a tensão do tubo fotomultiplicador até que os picos do talão se alinhem com os valores-alvo dos experimentos anteriores.
Ajuste a tensão do tubo fotomultiplicador e ganhe para o experimento. Em seguida, use esferas de compensação capturadas por anticorpos para estabelecer uma matriz de compensação. Em seguida, plote a área de dispersão lateral no log versus a altura de dispersão para frente em linear em um gráfico de pontos, liberte os detritos e selecione o tamanho da célula usando a porta S1, escolha células singlet em um gráfico de pontos uma largura de dispersão para frente versus altura de dispersão para frente com porta S2.
Para estabelecer portões de quatro andares, use o FMO relevante para cada canal de quatro andares. Com histogramas de parâmetro único determinar o sinal positivo em cada canal e estabelecer as portas de acordo. Registre cuidadosamente as amostras usando a estratégia de fechamento estabelecida.
Identificar a microglia usando o sinal P2 RY 12 plus e determinar a expressão proteica no respectivo canal apenas para a micróglia. Estabeleça portas de análise na interface do usuário do software de análise de citômetro replicando a mesma estratégia de sincronização usada durante a gravação. Use a função adicionar estatísticas para selecionar a mediana da população de interesse na altura do canal compensado.
Exporte os valores de IFM para os respectivos canais para uma planilha usando o editor de tabelas para análise estatística adicional. O tratamento com lipopolissacarídeo induziu aumento da acetilação da histona três lisina 27. Quando a MFI é normalizada dentro do sexo, a análise do histograma das células coradas mostrou populações normalmente distribuídas com deslocamentos celulares para fluorescência aumentada.
Um aumento semelhante na acetilação da histona três lisina 27 foi observado nas células coradas.
