Para começar, prepare os camundongos anestesiados para o procedimento cirúrgico. Usando tesouras cirúrgicas, incida a pele ao longo do centro da área raspada da cabeça para expor o crânio. Em seguida, limpe o crânio com um cotonete estéril usando peróxido de hidrogênio diluído por um a três segundos e seque o crânio com um novo cotonete estéril.
Para alinhar o crânio anterior e posteriormente, meça a profundidade ventral dorsal em bregma e lambda. Usando bgma como ponto de partida, localize e marque a área desejada no córtex. Em seguida, use uma broca de trefina e uma broca dental para expor o córtex.
Certifique-se de que o ângulo da broca seja perpendicular à curvatura do crânio para obter uma craniotomia uniforme e evitar danos. Perfure até que uma redução na resistência seja sentida e, em seguida, pare o processo de perfuração. Usando uma ponta de agulha de calibre 23, remova cuidadosamente o fragmento ósseo descolado.
Agora, limpe o córtex exposto com espuma cirúrgica embebida em ACSF fria para remover quaisquer detritos e interromper qualquer sangramento. Faça uma incisão para facilitar a inserção do microprisma e aliviar a pressão no córtex. Fixar o bisturi cirúrgico ao suporte no braço estereotáxico e orientar a lâmina, ou o braço estereotáxico para cortar ao longo do eixo lateral medial.
Agora, mova a faca para a coordenada anteroposterior desejada. Em seguida, mova a faca até a borda medial da craniotomia e abaixe-a lentamente até tocar o osso. Use a equação dada para determinar a profundidade da incisão pré-cortada a partir da superfície do crânio.
Certifique-se de que o comprimento da incisão seja maior que um milímetro. O ideal é que fique em torno de 1,2 milímetro. Mova a faca da borda medial da craniotomia para a coordenada medial inicial da incisão e abaixe lentamente a faca no córtex.
Depois de perfurar a dura-máter e entrar no córtex, aplique uma gota de ACSF fria para manter o tecido lubrificado e hidratado. Uma vez atingida a profundidade final, mova a faca ao longo do eixo lateral medial. Se o tecido se arrastar com a faca, mova a faca para cima e para baixo algumas vezes para garantir que o tecido está sendo cortado.
Em seguida, continue se movendo lateralmente enquanto devolve a faca à sua profundidade final. Após a conclusão, levante lentamente a faca. Se aparecer sangue, limpe o local da incisão com espuma cirúrgica embebida em ACSF para diluir e remover o sangue.
Coloque uma espuma saturada sobre o córtex exposto até que esteja pronto para inserir o microprisma. Conecte o microprisma ao kit de implante. Certifique-se de que o lado da imagem do prisma esteja oposto ao parafuso da placa de base.
Fixe o microprisma ao quadro estereotáxico e oriente-o para alinhá-lo com a incisão. Abaixe lentamente o microprisma no local da incisão. Remova a ACSF inicialmente, mas uma vez que o prisma está no córtex, lave-a com ACSF fria.
Se necessário, adicione ACSF extra e agite o córtex movendo o prisma para cima e para baixo. Cubra a área cortical exposta e a lente com uma camada protetora de adesivo de silicone, minimizando o excesso de adesivo no crânio circundante e no simulado. Agora, posicione a placa cefálica posteriormente para a colocação adequada do implante na aplicação do cimento.
Alinhe a linha média da placa cefálica ligeiramente à direita da craniotomia proposta para garantir que ambos os lados possam ser fixados durante os experimentos de fixação da cabeça. Em seguida, misture uma colher de pó de cimento opaco com quatro gotas de meio misturador e uma gota do catalisador para preparar o cimento dental adesivo. Aplique cimento na placa da cabeça e no crânio e segure a placa da cabeça no lugar até que o cimento cure.
Aplicar cimento adesivo para cobrir o crânio e tecido expostos, incorporando o microprisma e a placa cefálica até ficar estável. Mova o braço estereotáxico para cima enquanto estabiliza o microprisma com pinça para desprender o microscópio simulado. Coloque a capa protetora sobre a lente e prenda-a apertando o parafuso.
Os neurônios de animais que exploraram uma arena aberta no escuro mostraram níveis comparáveis de fluorescência e taxas de disparo em sessões com três semanas de intervalo.
