Calibração do Espectrômetro de Massas para Triagem de Lipídios com Marcação de Isótopos Estáveis por LC-TIMS-TOF MS/MS

Para iniciar o espectrômetro de massa ou calibração MS para LC-TIMS-TOF-MS/MS, abra o software de controle TIMS e, na subguia de calibração, clique em m/z, selecione a mixagem de ajuste no Dropbox e clique em calibrar no canto inferior direito. Continue clicando em calibrar até que uma pontuação de 100% seja alcançada. Agora selecione a guia mobilidade e siga as mesmas etapas demonstradas até que a pontuação de calibração de 100% seja atingida.

Para gerar cada ponto de calibração na curva de calibração, crave a mistura de padrão interno lipídico com 10 microlitros de mistura de padrão interno deuterado. Prepare sete dessas amostras enriquecidas para sete pontos de calibração na faixa desejada. Usando o software de análise de dados, anote manualmente as cadeias de ácidos graxos com base nos padrões passivos de MS/MS.

Para determinar a marcação de isótopos estáveis, ou eficiência SIL, calcule a razão entre a área dos isótopos contendo SIL e a área dos isótopos não contendo SIL. Calcule o padrão teórico determinando a probabilidade de encontrar um átomo marcado em qualquer local. Calcule o enriquecimento de SIL ajustando os perfis de isótopos experimentais com o padrão teórico simulado no software de análise de dados.

Para iniciar a corrida, ative o forno de coluna clicando no botão do termômetro e ative as bombas clicando no botão da válvula. Defina o método MS para o método apropriado salvo anteriormente. Verifique se o volume de injeção é de cinco microlitros, alinhe o frasco de um alvo de 20 a um e salve a lista de amostras.

Inicie a sequência e confirme a injeção bem-sucedida pela mensagem informando injetado, exibida no sistema. Copie a linha um e cole-a abaixo para gerar uma nova linha dois. Preencha a linha dois com amostras, dependendo do experimento.

Certifique-se de que a posição correta no amostrador automático seja usada. Se as fases móveis forem frescas, primeiro realize um teste de forma de pico com os padrões de mistura lipídica do fabricante, para compará-lo com os resultados anteriores. A mistura lipídica e os padrões são exibidos na tela.

Certifique-se de que as novas linhas tenham o método de separação correto, e não o método de pré-condicionamento usado na linha um. Certifique-se de que o método MS inserido esteja correto. Verifique se o método de processamento correto está carregado e se a execução do processo automatizado está habilitada.

Salve a lista de amostras para garantir que as amostras sejam analisadas após a conclusão da execução atual.