Caracterização das células-tronco CD34⁺ isoladas magneticamente para estudos cardiovasculares

Para caracterizar as células-tronco CD34+ isoladas da aorta murina e artérias mesentéricas, realizar cultura de blocos teciduais e obter as células por separação magnética. Para detectar a célula endotelial na expressão do marcador de células de fibroblastos após a diferenciação, observe as células com aumento de 40x com excitações a laser de 488 nanômetros. Após tripsinizar as células, pelete-as por centrifugação e ressuspenda em 100 microlitros de tampão de triagem.

Em seguida, incube-os com anticorpos monoclonais CD16 / CD32 anti-camundongo a quatro graus Celsius por cinco minutos. Em seguida, adicione dois microlitros de cada anticorpo monoclonal desejado para coloração imunofluorescente e incube novamente a 4 graus Celsius por 10 minutos. Lave as células duas vezes com um mililitro de tampão.

Depois de centrifugar as células conforme demonstrado, remova o sobrenadante e ressuspenda as células em 300 microlitros de tampão. Transfira as células para os tubos de fluxo e coloque-as em uma caixa de gelo. Execute a citometria de fluxo para verificar a porcentagem de células diferenciadas.

A avaliação por citometria de fluxo confirmou a alta pureza das células-tronco isoladas da parede vascular CD34+. A coloração por imunofluorescência celular mostrou que as células-tronco CD34+ isoladas expressaram predominantemente marcadores de células-tronco, CD34, c-kit e Flk-1. A citometria de fluxo também confirmou que as células-tronco CD34+ isoladas possuíam a capacidade de se diferenciar em células endoteliais e fibroblastos in vitro.