Para começar, obtenha fórmula previamente preparada e lâmina de amostra de tecido de câncer de pulmão fixa e embebida em parafina. Incube a 65 graus Celsius por cinco minutos. Realizar a desidratação imergindo a lâmina em xileno, seguido de soluções de etanol de concentrações decrescentes.
Em seguida, mergulhe as lâminas em água esterilizada três vezes por um minuto cada. Para recuperação de antígeno, coloque a lâmina em uma caixa de coloração e reparo. Preenchê-lo com solução de trabalho de tampão de reparo de antígeno imunohistoquímico de pH seis ou nove.
Cubra a caixa com uma tampa e aqueça-a no micro-ondas por oito minutos a 100% de potência. Em seguida, resfriar a lâmina até a temperatura ambiente. Cubra o tecido com uma solução de bloqueio e, em seguida, incube em uma câmara umidificada à temperatura ambiente por 10 minutos.
Depois de remover a solução de bloqueio, cubra a lâmina com a solução de trabalho de anticorpos primários e coloque-a em uma câmara umedecida. Em seguida, incube esta câmara por uma hora a 37 graus Celsius. Em seguida, lave a lâmina com a solução de trabalho do tampão de lavagem por dois minutos.
Adicione a peroxidase de rábano de polímero diretamente na lâmina e incube-a por 15 minutos à temperatura ambiente. Depois de lavar a lâmina, adicione a solução de trabalho de fluoróforo diretamente sobre a lâmina e incube-a por 10 minutos à temperatura ambiente. Depois que a lâmina for lavada, dê tratamento de micro-ondas como demonstrado anteriormente.
Quando a lâmina for resfriada à temperatura ambiente, lave-a três vezes com água destilada dupla por um minuto cada. Em seguida, mergulhe a lâmina na solução de trabalho do tampão de lavagem por dois minutos e realize a incubação de anticorpos, peroxidase de raiz forte e adição de fluoróforo, conforme demonstrado. Para a coloração nuclear celular, cobrir a lâmina com solução de trabalho DAPI e incubá-la em uma câmara umidificada por cinco minutos à temperatura ambiente.
Em seguida, lave as lâminas com água bidestilada três vezes, um minuto cada. Retire as gotículas de água do escorregador. Adicione de 10 a 20 microlitros de quencher antifluorescência à lâmina e sela-a com um vidro de cobertura de microscópio.
