1 Para começar, transfira o tecidotumoral 2 imerso em 25 mililitros de hibernado A 3 para uma placa de Petri de vidro esterilizada 4 sob um gabinete de fluxo laminar. 5 Usando um microscópio, elimine cuidadosamente 6 todo o tecido necrótico. 7 Em seguida, use um bisturi 8 e uma pinça de tecido para dissecar os vasos sanguíneos.
9 Corte o tecido tumoral em 10 pedaços de um a dois centímetros cúbicos. 11 Transfira-os para uma placa de Petri de plástico 12 contendo três mililitros de meio H-GPSA, 13 e coloque o prato no gelo. 14 Para processar manualmente o tumor, transfira o pedaço do tumor 15 para uma placa de Petri de vidro nova.
16 Usando dois bisturis, disseque o segmento 17 em seções de 0,5 mililitro sob um microscópio. 18 Para processar mecanicamente o tumor, primeiro, 19 posicione a lâmina corretamente. 20 Em seguida, ajuste a espessura da fatia para 0,45 a 0,50 milímetros, 21 e fixe o botão de liberação da mesa no modo de partida.
22 Corte o bloco de agaro em um cilindro de dois centímetros de comprimento 23 e cole-o no prato circular de plástico do picador. 24 Usando um bisturi, crie um buraco no cilindro de agaro 25 e coloque o tecido tumoral no poço. 26 Em seguida, posicione o disco de plástico no disco de montagem 27 da mesa de corte e pressione o botão de reinicialização 28 para iniciar o processo de corte.
29 Após a primeira rodada, gire o disco de montagem 30 por 90 graus e repita novamente 31 para cortar o tecido em pedaços retangulares. 32 Remova o disco de plástico. 33 E então, usando uma espátula de tecido, 34 gire apenas o tecido tumoral em 90 graus.
35 Retorne o disco de plástico para a mesa de corte 36 e pressione reset para continuar cortando. 37 Em seguida, usando uma pipeta de cinco mililitros, 38 transfira o material processado, 39 junto com o meio, para a placa de Petri. 40 Coloque o prato imediatamente sobre o gelo.
