Um mês após a exposição ao LISW, realize um exame patológico da cóclea do camundongo. Iniciar hemoperfusão com solução de Ringer com lactato, seguida de perfusão transcardíaca com paraformaldeído a 4%. Após a decapitação do camundongo, remova a cóclea e perfunda diretamente com 4% de paraformaldeído a quatro graus Celsius durante a noite.
Depois de adquirir toda a imagem da cóclea, usando o software ImageJ, calcule o mapa de frequência coclear para localizar com precisão as regiões cocleares específicas em diferentes frequências. Usando a fórmula fornecida, calcule a taxa de sobrevivência das células ciliadas em cada frequência. Depois de adquirir imagens Z-stack de alta resolução das células ciliadas internas, calcule o número de sinapses.
Visualize as seções da cóclea coradas com hematoxilina e eosina e conte o número de neurônios do gânglio espiral na volta do meio do canal de Rosenthal para calcular a sobrevivência do neurônio do gânglio espiral por controle. Em comparação com o controle, a imunomarcação fluorescente mostrou estruturas cocleares intactas, sem perda significativa de células ciliadas ou fibras nervosas em todos os grupos. No entanto, avaliações quantitativas indicaram que a sobrevivência das células ciliadas externas foi significativamente menor no grupo de 2,5 joules por centímetro quadrado.
Enquanto isso, a sobrevivência das células ciliadas internas foi consistente entre os grupos. A contagem de fitas sinápticas foi notavelmente reduzida em grupos de frequência mais alta. Isso foi acompanhado por uma diminuição na densidade de neurônios do gânglio espiral no grupo de 2,5 joules por centímetro quadrado, indicando que a degeneração coclear depende da exposição à energia LISW.
