Para começar, pegue um paquímetro eletrônico, posicione sua mandíbula externa no ponto médio da borda externa da orelha e estenda-a até o canal auditivo. Meça e registre a espessura em dois terços e meio pontos ao longo da linha. Em seguida, incline a cabeça do rato para um lado, orientando a orelha para cima.
Aplique 50 microlitros de ácido oleico uniformemente nos lados ventral e dorsal da orelha, uma vez ao dia, por 25 dias. Usando uma seringa de um mililitro equipada com uma agulha de calibre 34 ou 36, injete 50 microlitros de suspensão de cutibacterium acnes por via intradérmica na superfície ventral da orelha. No dia 25, meça e registre a espessura das orelhas.
Depois de cortar as orelhas do rato sacrificado, faça furos de tamanho fixo nas orelhas usando uma broca de anel de oito milímetros. Depois de preparar e tingir as seções da orelha, observe-as ao microscópio óptico. Registre as alterações patológicas para avaliação de acompanhamento por um patologista e atribua pontuações a essas alterações de acordo com a tabela mostrada aqui.
As orelhas dos grupos ácido oleico e ácido oleico com cutibacterium acnes apresentaram espessamento, endurecimento, eritema, escamas e comedões com sangramento ocasional devido à coceira. A análise histopatológica revelou paraceratose, hiperqueratose e hipertrofia nos grupos ácido oleico e ácido oleico com cutibacterium acnes. A pontuação patológica indicou maior gravidade nesses grupos em comparação com o grupo controle.
A imuno-histoquímica mostrou maior expressão de TNF alfa na derme dos grupos cutibacterium acnes, e ácido oleico com cutibacterium acnes.
