Dissecção do olho de coelho inteiro e preparação do tecido ocular para análise histológica

Após a enucleação transconjuntival do olho do coelho, coloque imediatamente 50 mililitros de paraformaldeído a 4% e PBS no gelo. Após 15 minutos, transfira o olho para uma placa de dissecção de 100 milímetros e encha a placa com PBS para evitar que o olho seque. Sob um microscópio de dissecação, Usando uma lâmina cirúrgica, comece a fazer uma incisão um milímetro anterior ao limbo, mantendo-o paralelo ao plano da íris.

Insira uma tesoura curva na incisão inicial e continue cortando circunferencialmente, mantendo uma distância de um milímetro do limbo. Em seguida, remova a córnea com uma pinça e limpe suavemente o PBS com um lenço de laboratório. Coloque a córnea em solução de sacarose a 30% em temperatura ambiente para crioproteção.

Faça um corte inicial com uma tesoura curva através da íris. Em seguida, corte circunferencialmente ao redor do olho, semelhante à remoção da córnea, para separar a íris do resto do tecido. Remova a íris com uma pinça e limpe suavemente o excesso de PBS com o lenço de laboratório.

Coloque a íris em solução de sacarose a 30% em temperatura ambiente para crioproteção. Depois de remover a córnea e a íris, coloque o olho em 50 mililitros de paraformaldeído a 4% e coloque-o em um shaker para uma agitação suave. Deixe o olho em 4% de paraformaldeído a quatro graus Celsius durante a noite.

No dia seguinte, coloque o olho em uma placa de dissecação e encha a placa com PBS. Sob o microscópio de dissecação, use uma pinça para segurar cuidadosamente a cápsula anterior do cristalino. Em seguida, insira cuidadosamente a tesoura na câmara posterior, orientando as lâminas posteriormente ao longo da lente.

Faça um corte inicial nas zônulas da lente com uma tesoura curva. Continue fazendo pequenos cortes em um padrão circunferencial através das zônulas da lente. Para confirmar a remoção da lente, segure suavemente a cápsula anterior da lente com uma pinça e tente levantá-la.

Após a separação, coloque a lente em solução de sacarose a 30% em temperatura ambiente para crioproteção. Coloque o olho em 50 mililitros de sacarose a 30% e PBS a quatro graus Celsius por 24 a 48 horas para crioproteção. Para acelerar a crioproteção, substitua a solução inicial de sacarose por uma nova após oito a 12 horas.