Para começar, enxágue o dente extraído com uma solução salina estéril para remover o sangue. Corte cuidadosamente o dente longitudinalmente em duas partes usando uma broca de fissura de carboneto enquanto irriga com solução salina estéril. Em seguida, transporte o dente e sua polpa intacta em meio estéril de alfa-MEM em gelo para o laboratório de cultura de células e tecidos.
Em seguida, coloque a amostra de dente extraída em uma placa de Petri de cultura estéril e enxágue bem três a quatro vezes com PBS estéril. Usando uma escavadeira afiada e uma pinça, remova cuidadosamente o tecido da polpa da cavidade e limpe bem com PBS estéril para remover vestígios de sangue. Agora divida a superfície do prato em quatro partes, colocando 1 a 2 mililitros de PBS estéril em cada parte.
Coloque a amostra de tecido pulpar em uma área e corte-a em pedaços pequenos usando uma lâmina cirúrgica. Transfira os pedaços de tecido levantando-os em áreas sucessivas com PBS. Enquanto isso, adicione aproximadamente 0,8 a 1 mililitro de alfa-MEM contendo aminoácidos não essenciais com 10% de FBS e um coquetel de antibióticos em uma placa de seis poços.
E mova-o para espalhar a mídia uniformemente. Vários estágios de desenvolvimento da cultura primária de células-tronco da polpa dentária são mostrados. Células arredondadas do tipo bolha do tecido dentário foram observadas no segundo dia de semeadura.
Uma rede de células que sai do tecido foi observada no quarto dia. No entanto, no 13º dia, o número de células que emergiram do explante aumentou. E no final da segunda semana, a maioria dos explantes ficou cercada por muitas células aderentes com morfologia fusiforme.
