Para começar, coloque o ambystoma Mexicanum sedado com o lado ventral voltado para baixo em papel toalha úmido embebido em solução de benzocaína a 0,03%. Cubra o animal com toalhas de papel embebidas em benzocaína. Use um par de pinças de anel para esticar o membro posterior operatório.
Com um bisturi, faça uma incisão longitudinal lateral acima do osso do fêmur, abrangendo toda a coxa no membro posterior superior. Desloque cuidadosamente os músculos e nervos do local da cirurgia sem cortar. Coloque suavemente a pinça Bode sob o fêmur para expô-lo para a cirurgia.
Agora coloque uma placa fixadora rígida de quatro orifícios de 7,75 milímetros ao longo da diáfise do fêmur sem tocar nas articulações e prenda-a na posição alinhada com uma pinça. Use quatro parafusos de titânio de dois milímetros para prender o osso à placa. Sob irrigação, com 0,7 vezes PBS e estreptomicina de 1% de penicilina, perfure manualmente para criar o primeiro orifício no osso para inserção do parafuso.
Em seguida, coloque o primeiro parafuso no orifício. Aplique o dispositivo de guia de serra no primeiro parafuso e alinhe-o com o osso e a placa. Use o dispositivo de guia de serra para perfurar e inserir os parafusos restantes.
Depois de garantir o alinhamento da placa com o osso, remova a guia da serra e use uma chave de fenda para quebrar as alças dos parafusos. Coloque um pedaço de filme plástico esterilizado sob o fêmur para evitar danos aos tecidos moles durante o processo de osteotomia. Em seguida, coloque uma serra de fio Gigli entre o osso e o filme de proteção.
Corte o osso usando uma serra de fio Gigli criando um único corte de 0,7 milímetro no fêmur. Remova a serra e o filme de proteção e irrigue o local da cirurgia com 0,7 vezes PBS e 1% de penicilina estreptomicina. Cubra a parte superior da placa e os parafusos com cera óssea estéril para proteger a pele e os músculos da irritação pelas bordas dos parafusos.
Coloque os músculos e a pele em cima da cera. Feche o local da incisão com uma sutura sintética tamanho 7.0 usando pontos simples interrompidos. Após a cirurgia, para despertar, coloque o animal em um tanque de água artificial fresco suplementado com penicilina, estreptomicina e butorfanol.
A microtomografia computadorizada e a análise histológica facilitaram a visualização do osso, das posições dos fragmentos e dos tamanhos das lacunas e do estado de cicatrização. Notavelmente, o ambystoma Mexicanum não mostrou formação calosa três semanas após a cirurgia, contrastando com os mamíferos. Um calo cartilaginoso foi visível aos três meses e um calo ósseo ossificado apareceu aos seis meses após a cirurgia.
