Para preparar a microagulha de vidro, coloque capilares de vidro borossilicato no soquete polar. Depois de definir os parâmetros necessários, pressione o botão de puxar para gerar a agulha. Em seguida, divida as células-tronco positivas para GFP em um tubo.
Após a contagem e peletização, ressuspenda-os na concentração desejada. Transfira a suspensão celular para um tubo de 1,5 mililitro e coloque-a no gelo para transplante. Usando uma micropipeta, carregue quatro microlitros de suspensão celular em uma microagulha de vidro.
Insira a agulha no suporte designado no microinjetor e, usando uma pinça reta, quebre a ponta da agulha. Defina a pressão para 10 PSI. Usando uma pipeta Pasteur, aplique uma gota de óleo mineral em uma lâmina de vidro calibrada e microinjete a suspensão da célula na gota para anotar o diâmetro para calibração do volume de injeção.
Depois de definir o volume correto, microinjete a suspensão celular rapidamente na fatia. Sob o microscópio estereoscópico de fluorescência, verifique a presença das células nas fatias e incube-as a 37 graus Celsius com 5% de dióxido de carbono.
