Para começar, obtenha fatias organotípicas de camundongos transplantadas com células-tronco neuroepiteliais derivadas da medula espinhal humana, ou células HSCNES. Remova o meio da parte inferior da membrana de inserção e lave as fatias três vezes com PBS ou DPBS de Dulbecco pré-aquecido. Em seguida, aspire o DPBS e substitua-o por 1,5 mililitros de formaldeído a 4% pré-aquecido.
Em seguida, adicione um mililitro de 4% de formaldeído no topo da membrana. Após lavar três vezes com DPBS, usando uma faca cirúrgica, corte circunferencialmente a membrana do inserto e separe-a com as fatias do componente plástico do inserto. Após a coloração por imunofluorescência, aplique 200 microlitros de solução de montagem em uma lâmina de vidro limpa.
Utilizando pinças retas, levante e transfira suavemente a membrana flutuante do prato de 35 milímetros para uma lamínula. Em seguida, transfira a membrana para a lâmina de vidro preparada. Cubra a membrana da lâmina de vidro com uma nova lamínula com 100 microlitros de solução de montagem.
Deixe secar durante a noite sob uma capa química escura antes de prosseguir para a imagem confocal. As células HSCNES transplantadas no tecido da medula espinhal mostraram expressão estável de GFP por 30 dias, indicando boa sobrevida.
