Para começar, lave os condensados de estrela C de modelagem de RNA, permitindo que a solução de condensados extraídos assente por pelo menos cinco minutos. Em seguida, durante a pipetagem do topo do nível do líquido para minimizar a remoção de condensado, extraia aproximadamente metade do volume do sobrenadante. Adicione o mesmo volume de cloreto de sódio 0,3 molar em tris-EDTA para substituir o sobrenadante removido e misture por pipetagem.
Repetir o ciclo de remoção do sobrenadante e de substituição do tampão durante um total de três ciclos. Para a mistura de transcrição T7, preparar uma solução-mãe de DFHBI a 10 milimolares em dimetilsulfóxido. Em seguida, diluir uma alíquota até uma concentração final de 600 micromolares usando água livre de RNAse e DNAse.
Descongele os componentes do kit de transcrição no gelo. Em seguida, usando pontas de pipeta estéreis, pipete os componentes exibidos em um tubo de microcentrífuga autoclavado em temperatura ambiente. Misture suavemente a solução pipetando e use-a imediatamente para a síntese do transcrito de RNA.
Para fazer isso, pipete 3,3 microlitros dos condensados lavados preparados a partir de C-Stars de modelagem de RNA em uma câmara adequada para imagens de microscopia. E adicione o volume total da mistura de transcrição recém-preparada. Adquirir imagens de microscopia por um período de 18 horas, começando imediatamente após a adição da mistura de transcrição aos condensados.
Para a transcrição de aptâmeros de RNA, um resultado bem-sucedido foi confirmado pelo aumento da fluorescência do florígeno ao longo do tempo por meio de microscopia.
