Para começar, inicie o software de análise de dados em um computador desktop. Clique em file, seguido de navegador e escolha selecionar pasta para abrir a pasta que contém os dados de imagem adquiridos. Selecione várias linhas relacionadas às imagens escolhidas, incluindo os controles não infectados e excluindo as imagens supersaturadas.
Anote o ID da imagem em um caderno de laboratório junto com as informações registradas durante uma segunda sessão de imagem. Clique em carregar como grupo para montar as imagens selecionadas. Agora clique no ícone salvar para salvar a nova imagem de sequência em uma nova pasta para reanálise de dados brutos, se necessário.
Em seguida, clique nas opções seguidas de exibição e selecione o fator de compartimentalização para identificar a compartimentalização usada para cada imagem. O fator de compartimentalização adquirido será exibido na parte superior de cada imagem na sequência. Para corrigir todos os fatores de binning para o mesmo valor, primeiro clique duas vezes na imagem a ser ajustada.
Na janela do amigo da ferramenta, clique na opção de ajuste de imagem e escolha o fator de binning apropriado. Clique duas vezes na imagem dos camundongos não infectados e selecione a opção contagens no campo da unidade. Ajuste a escala de cores para um valor mínimo de 600.
Escolha as opções de radiância no campo de unidades para visualizar a radiância da imagem resultante. Com a janela de sequência ativa, escolha a opção radiância no campo de unidades. Desative a caixa individual na área de limites de escala de cores para ajustar a escala de cores e a tabela de cores na paleta de ferramentas.
Marque a escala logarítmica e as caixas manuais e, em seguida, defina os números máximos da escala de acordo com o controle não infectado e a área com o sinal mais alto como o máximo. Depois de definir a mesma escala para todas as imagens, clique duas vezes em cada imagem, maximize a janela e use a opção exportar gráficos para exportar a visualização da imagem em um formato de imagem. Nomeie os arquivos por tratamento, seguido pelo ID do camundongo e pelo ponto de tempo.
Clique duas vezes na imagem da sequência. Na janela da paleta de ferramentas, clique na seção de ferramentas ROI e pressione o ícone quadrado. Desenhe um retângulo sobre todo o mouse.
Clique na borda do ROI criado e copie e cole o mesmo ROI para cada mouse. Em seguida, nomeie os ROIs a serem registrados. Em seguida, clique no ícone salvar na seção de ferramentas ROI.
Selecione a caixa, aplicar à sequência. Em seguida, aplique os ROIs salvos para todas as imagens clicando em carregar. Ajuste a posição do ROI de cada mouse para melhor ajustá-los na área de medição.
Quando todos os mouses tiverem sido rotulados, clique na opção medir ROIs. A tabela de medições de ROI deve aparecer. Defina os tipos de medição para radiância, os atributos da imagem para todos os valores possíveis e as dimensões do ROI para centímetros.
Em seguida, clique na opção selecionar tudo seguida de copiar. Cole os dados diretamente no software de análise de tabelas. Organize as colunas de dados para classificar os grupos corretamente.
Em seguida, codifique os dados por grupos na planilha. Organize os valores de fluxo total para corresponder aos mesmos valores de fluxo total ventral e dorsal do mouse. Em seguida, some-os para obter a bioluminescência de corpo inteiro de cada camundongo.
Calcule a média e o desvio padrão dos valores somados para cada grupo. Plote os dados em um software estatístico para gerar gráficos. Por fim, crie um painel com imagens bioluminescentes.
Coloque cada mouse em colunas e os pontos de tempo em linhas para construir uma matriz de eficácia do medicamento. Quando o método de bioluminescência é aplicado para avaliar agentes antiparasitários, uma matriz de eficácia do medicamento é construída para comparar os compostos de teste, exemplificados aqui pelo posaconazol com o tratamento medicamentoso padrão usado para a doença de Chagas, o benznidazol a 100 miligramas por quilograma administrado uma vez ao dia. Neste estudo longitudinal, o curso do tempo de infecção é ilustrado comparando um grupo não tratado com os tratados.
Os resultados demonstram uma redução na carga parasitária, conforme indicado pela redução da bioluminescência, ou uma recidiva mostrada pelo aumento da carga parasitária e consequente detecção de luz, sugerindo um composto ou regime de tratamento ineficaz. A luz quantificada é representada pela soma do fluxo total ventral e dorsal em fótons por segundo em função do tempo de infecção.
