Para começar, com uma tesoura e uma pinça romba, levante e corte a pele de um camundongo anestesiado sobre a veia jugular direita. Corte uma janela redonda na pele grande o suficiente para expor a veia jugular e parte do tecido circundante. Afaste suavemente o tecido adiposo, os gânglios linfáticos e o tecido conjuntivo usando a técnica de dissecção romba.
Em seguida, encha uma seringa de 20 mililitros com solução salina normal aquecida a 37 graus Celsius. Coloque a seringa na bomba de perfusão da seringa. Em seguida, conecte uma agulha borboleta de calibre 27 e um tubo associado à seringa.
Defina a bomba da seringa para uma taxa de fluxo de 0.5 mililitros por minuto para lavar o sangue da veia ou artéria perfurada. Posicione o fluxo de solução salina alguns mililitros ao lado do local da punção e não diretamente sobre ele. Depois que a veia jugular for limpa, inicie o cronômetro.
Obtenha agulhas hipodérmicas de calibre 30 e 33 gauge para a veia jugular e a artéria femoral, respectivamente. Gire o chanfro para cima. Em seguida, posicione a agulha em um ângulo de 25 graus sobre a veia jugular ou artéria femoral.
Depois de anotar a hora, perfure rapidamente a parte superior do recipiente. Observe o tempo necessário para o sangramento parar completamente. Aguarde a formação de um trombo antes de iniciar a fixação da perfusão.
Uma vez concluída a perfusão, dissecar a parte da veia jugular com o local da punção e o trombo. Use uma tesoura afiada para fazer um corte diagonal na extremidade distal do segmento do vaso e faça um corte reto na extremidade proximal do segmento do vaso. Em seguida, coloque o tecido fixo a quatro graus Celsius por 24 horas.
No dia seguinte, despeje a solução tampão de cacodilato de sódio em uma placa de cultura de 35 milímetros contendo um tapete de silicone de cinco milímetros de espessura. Transfira cuidadosamente o tecido para o tampão, garantindo que ele esteja submerso no tampão. Com pinos de aço inoxidável e um par de pinças finas, prenda cuidadosamente cada extremidade do vaso no tapete.
Limpe cuidadosamente a veia jugular. Com uma microtesoura, corte a parede do vaso oposta ao local da punção longitudinalmente. Abra suavemente o vaso e, em seguida, prenda-o ao tapete de silicone com o lado intraluminal voltado para cima.
Remova a solução tampão do prato. Em seguida, adicione 1% de paraformaldeído para submergir o recipiente. Coloque imediatamente a tampa no prato para evitar que seque.
